1 . 抗体分子含有两条短肽链和两条长肽链，科研人员将小鼠编码抗体（抗禽流感病毒抗原）可变区的基因片段与人编码抗体恒定区的基因片段整合，构建如图1所示的基因表达载体（Hind Ⅲ等表示不同限制酶的切割位点），导入中国仓鼠卵巢细胞后，筛选能够稳定表达的细胞株，成功获得大量嵌合抗体，如图2所示。

请根据资料回答下列问题：
(1)为构建人—鼠嵌合抗体基因的表达载体，需要对编码抗体不同片段的基因进行重组，为此应该从分泌小鼠单克隆抗体的杂交细胞中提取____，经逆转录得到____用于PCR扩增，并分别与人抗体的恒定区DNA序列拼接。
(2)在PCR反应体系中需加入模板、4种脱氧核苷三磷酸、____、____及缓冲液等。
(3)构建人—鼠嵌合抗体基因的表达载体时，先将人抗体的短、长链基因部分序列分别与相应鼠抗体的可变区序列整合后插入到两个启动子的下游。这一过程需要将鼠抗体长链基因经____双酶切，鼠抗体短链基因经____双酶切。①是____识别和结合的部位，它可以驱动相关基因转录。
(4)将重组质粒导入中国仓鼠卵巢细胞后，可采用____技术检验基因是否成功转录。通过基因工程技术成功表达并组装出有生物学活性的嵌合抗体，该嵌合抗体的优点是____。

2 . 科学家将能控制芳烃、萜烃、多环芳烃、脂肪烃四种环境污染物降解的4种基因组合到同一菌株中，创造了一种“超级细菌”。下列叙述错误的是（       ）

A．从未知结构与功能的基因中筛选4种目的基因

B．可通过构建基因文库来获取4种目的基因

C．可用PCR检测4种目的基因的表达

D．超级细菌还需改造才能成为高效表达的工程菌株

3 . 人血清白蛋白（HSA）是血浆蛋白的主要成分，具有维持血浆渗透压和进行物质运输的功能。科学家利用PCR获得大量HSA基因。请回答下列问题：
(1)PCR是根据______的原理进行体外快速扩增目的基因的技术。PCR需要在一定的缓冲液中进行，缓冲液一般添加Mg²⁺的作用是_________。
(2)PCR每次循环分为______、复性和______三步。反应中使用Taq DNA聚合酶而不是大肠杆菌DNA聚合酶，主要原因是__________。
(3)DNA复制时，子链延伸的方向是：5′-3′，若要扩增出基因HSA，应选择图中______两种引物。引物的作用是___________。

   

4 . 现临床使用的人生长激素是采用基因工程和发酵工程，由大肠杆菌表达分泌并大规模生产的。下列叙述错误的是（       ）

A．发酵过程需严格控制温度和溶氧量等条件

B．利用PCR可获取和快速扩增人生长激素基因

C．检测大肠杆菌是否表达出人生长激素常用抗原-抗体杂交技术

D．用于发酵生产的大肠杆菌工程菌具有易培养易发生突变等优点

5 . 某工厂的污水池中含一种有害的有机化合物X，工厂研究人员用镁盐、磷酸盐、化合物X、某类含氮有机物以及微量元素等配制的培养基，筛选得到能高效降解化合物X的细菌（目的菌）。回答下列问题：

(1)要从污水池中的污泥样品里分离出目的菌，从营养物质的角度分析，图中培养皿里培养基的特点是______。
(2)如果从污水池中获得的目的菌数量不多，可用______（填物理状态）培养基对目的菌进行扩大培养，该过程中振荡的目的是________________________。实验操作过程中获得纯净目的菌的关键是______。
(3)有研究人员提出通过基因工程改造细菌的基因也可获得高效降解化合物X的目的菌。基因工程是在______水平上进行设计和施工的，因此又叫做______。获取目的基因的方法有多种，现在常用PCR特异性地快速扩增目的基因。PCR是______的缩写，利用了______的原理。

6 . 科研人员将R基因作为目的基因，构建基因表达载体，下图是目的基因的DNA的片段和所用到的质粒。回答下列问题：

   

(1)在扩增R基因时，需要加入引物，根据R基因______（填“内部”或“两端”）的核苷酸序列来设计特异性引物；利用PCR技术合成的DNA分子与模板DNA分子比较，长度一般______（选填“较长”或“较短”）。
(2)构建基因表达载体时，一般选择同种限制酶，据图分析，可以选择的酶是______，但用一种限制酶切割，会出现R基因和质粒的自身环化，或者R基因与质粒的反向连接。为避免上述现象，并且要在基因表达载体中保留标记基因，在切割质粒和目的基因时都采用两种限制酶切割，据图分析，该过程最适合选用的两种酶是______。
(3)将上述过程构建的基因表达载体导入到细菌，这些细菌将会获得对______的抗性。导入前，一般先用钙离子处理细菌，使其处于能吸收环境中______的生理状态。
(4)如果要将表达载体导入动物受精卵，常用的方法是______。

7 . PCR技术是基因工程扩增目的基因的常用方法，下列说法错误的是（       ）

A．该技术可以不用解旋酶，但需要耐高温的DNA聚合酶

B．DNA聚合酶将4种游离的脱氧核苷酸加到引物的3′端

C．第三次循环产物中出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段

D．PCR技术使用的一对特异性引物的碱基序列是互补的

8 . 某真菌的W基因可编码一种可高效降解纤维素的酶，已知图乙中W基因转录方向是从左往右。为使放线菌产生该酶，以图甲中质粒为载体，进行重组DNA技术的相关操作。回答下列问题：

限制酶	识别序列及切割位点(5′-3′)
BamHⅠ	G↓GATTC
EcoRⅠ	G↓AATTC
MfeⅠ	C↓AATTG
KpnⅠ	GGTAC↓C
HindⅢ	A↓AGCTT

(1)若要从土壤中筛选出纤维素分解菌，需要配制以_________为唯一碳源的固体培养基并进行灭菌处理。为便于筛选可在培养基中加入_________染料。
(2)限制酶主要是从______________(填“真核生物”或“原核生物”)中分离纯化出来的。结合上述图表分析应使用限制酶______________切割图甲中质粒，使用限制酶________________切割图乙中含W基因的DNA片段，以获得能正确表达W基因的重组质粒。
(3)与质粒中启动子结合的酶是_________。利用PCR技术对W基因进行扩增时子链延伸的方向是_____。

9 . 蛋白A具有重要的医用价值，研究人员欲用转基因牛来大量生产蛋白A。下图所示为蛋白A基因片段和人工构建的大肠杆菌质粒pBR322，图中Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，Neo^r表示新霉素抗性基因，箭头表示切割形成末端完全不同的4种限制酶的切割位点。据图回答问题：

(1)基因工程的核心步骤是____，构建蛋白A基因表达载体时，选用的限制酶是____。含有重组质粒的大肠杆菌分别在含氨苄青霉素和含新霉素的培养基上的存活情况是____。若要在转基因牛的乳汁中收集到蛋白A，还需要在pBR322质粒中插入_____。
(2)实验室可采用PCR技术扩增蛋白A基因。PCR技术的原理是____，PCR缓冲液中加入Mg²+的作用是____。已知蛋白A基因的部分序列为5'-ATCTTAGATATC……ACTGCCATTCGG-3'，因此用PCR技术扩增蛋白A基因时用到的一对引物的序列为____（写出6个含氮碱基，并标明5'和3'）。
(3)培育转基因牛时，要获得足够多的卵母细胞，需要用_____激素对供体母牛进行超数排卵处理。获得的早期胚胎需要培养至____期才可进行胚胎移植。