2 . 全面接种新冠疫苗可有效防止新冠病毒的大规模传染。新冠疫苗有多种类型，如灭活疫苗、重组疫苗、mRNA疫苗等。重组疫苗的研发可以利用腺病毒作为载体。请回答下列问题：
(1)新冠病毒依赖其表面的S蛋白与宿主细胞膜上ACE2受体结合而最终实现感染。ACE2受体的化学本质是______________。该结合过程体现了细胞膜_____________功能。
(2)新冠病毒是一种RNA病毒。研制疫苗时，需利用RT-PCR技术获取S蛋白基因，该过程除逆转录酶外，还有______________酶参与，此酶需要______________（离子）的激活。PCR的最后一个循环结束后通常还需要在72℃维持7min左右，其目的是_____________
(3)腺病毒是一种DNA病毒，基因组中的E基因与其复制有关。将其作为运载S蛋白基因的载体时，需对腺病毒进行的改造是______________，以提高该种新冠疫苗的安全性。
(4)接种灭活疫苗一般需2~3次，而接种重组DNA疫苗一般只需1次，根据疫苗作用原理和人体特异性免疫反应机制分析，可能的原因是____________。
(5)在基因组中敲除并整合基因，其技术流程通常如下图1所示。

①利用大肠杆菌DNA进行PCR，无需从细胞中提取DNA，可在培养出菌落后直接挑取菌落进行，分析其原因是______________，DNA得以释放。
②利用PCR获得对应产物的关键是______________设计。
③PCR5时需要加入的引物是______________。
④利用电泳技术鉴定PCR产物，结果如图2。其中阳性泳道使用的样品是荧光基因M，可与待测泳道中DNA进行对比；标准泳道使用的样品是不同已知长度（大小）的DNA片段，作用是______________。

4 . 新冠病毒（+RNA）的棘突蛋白S通过与人体黏膜细胞表面的ACE2受体结合而进入细胞，是宿主抗体的重要作用位点。下图1是科研人员利用新冠病毒的+RNA提取S蛋白基因和S蛋白受体结合域RBD基因作为抗原基因序列，研制新冠病毒双抗原疫苗的技术路线。已知PCR1与PCR2要分别进行，然后将产物混合，使用引物1和引物4进行PCR3，最终获得大量S-RBD融合基因（1300bp）。

(1)PCR3过程中，片段1与片段2连接形成S-RBD融合基因，需要使用_______酶，该酶的作用是_______。
(2)为使S-RBD融合基因在工程菌中表达时，先合成S蛋白，在重组pX质粒中，引物4对应的区段要连接在靠近_______（填“启动子"或“终止子”）的部位，原因是_______。
(3)为初步检测过程B构建是否成功，对重组pX系列质粒及其酶切产物进行凝胶电泳检测，结果如图2。据图可知，酶切时用到的酶是_______，重组质粒pX2和pX5构建成功的依据是_______。

(4)在工程菌的筛选时，可先后用两种抗生素进行影印培养实验（将首次培养的菌落用灭菌绒布沾取印到新培养基上培养），在第二次培养时存活的菌落是否含有目的基因_______（填“是”或“否”）。鉴定pX质粒是否导入工程菌还可以采用的方法是_______。
(5)试从免疫学角度分析此种双抗原疫苗比常规S蛋白疫苗更具优势的原因_______。

5 . 新冠病毒的流行给人类生活造成极大的影响，接种疫苗和病毒筛查是防控新冠肺炎疫情的有效措施。常见的病毒疫苗有灭活疫苗、腺病毒疫苗、重组蛋白疫苗等。下图所示为重组蛋白新冠疫苗的技术路线，箭头表示限制酶BamH、Nhel，SphI、NcoI的酶切位点（四种酶的识别序列和切割位点详见下表）。

限制酶种类	BamHI	NheI	SphI	NcoI
识别序列和切制位点	5′-G↓CTAGC-3′	5′-G↓GATCC-3′	5′-GCATG↓C-3′	5′-C↓CATGG-3′

(1)新型冠状病毒表面抗原主要为S蛋白，是研制新冠疫苗的关键起点。在构建基因表达载体时，需要使用限制酶__________对图中的质粒进行切割。结合图示分析，S蛋白基因在受体细胞中表达的模板链是__________（填“a链”或“b链”）。
(2)S蛋白表面具有多个不同的抗原决定簇，不同的抗原决定簇能刺激机体产生不同的抗体。由同一抗原诱导产生的针对多个抗原决定簇的抗体称为多克隆抗体，多克隆抗体可直接从免疫动物的血清中分离出来。而只含有针对一个抗原决定簇的抗体称为单克隆抗体。在制备抗S蛋白的单克隆抗体和多单克隆抗体的过程，S蛋白的纯度对__________抗体的纯度影响较小，原因是__________。
(3)判断个体是否被新冠病毒感染，可采用的检测方法有核酸检测、抗体检测和抗原检测。抗原检测常采用双抗体夹心法，下图所示为抗原检测部件：金标垫中含有大量且可移动的金标抗体1，T线固定了抗体2，C线固定了抗金标抗体1的抗体，抗体1和抗体2可与同一抗原的不同抗原决定簇发生特异性结合，当金标抗体1聚集在T线和C线时则呈现红色。将待测样液滴加到样本垫处并向前（下图右侧）移动，若T线和C线的显色情况是__________，说明样液中含新冠病毒，即检测结果为阳性；若T线和C线的显色情况是________，则检测结果为阴性；若出现其它显示情况，则检测结果无效。

6 . 疫苗接种是预防新型冠状病毒感染最重要的措施之一，然而病毒的不断变异对现有疫苗的接种效力提出挑战。
(1)新型冠状病毒通过其表面的S蛋白与宿主细胞膜蛋白ACE-2结合而侵入细胞，S蛋白作为_______刺激机体产生_______免疫反应，其中_______细胞产生的抗体通过结合S 蛋白的受体结合区域（RBD）中和病毒，进而阻断其侵害过程，因此RBD是疫苗开发的重要靶点。
(2)多种新型冠状病毒突变株在RBD区域出现突变。研究者比较病毒野生型和最具代表性的5种突变株的RBD氨基酸序列，找到一小段保守序列RBD9. 1，并展开研究：
实验组小鼠：注射含RBD9. 1的缓冲液；
对照组小鼠：注射含野生型病毒RBD蛋白或乙肝病毒抗原的缓冲液，同时设置空白对照组。
实验一：取各组小鼠的血清与ACE-2蛋白和野生型病毒RBD蛋白混合，检测RBD和 ACE-2结合情况。
据图1分析，乙组和丙组阻断率较高的原因是_______，但由于_______，导致丙组的阻断率低于乙组。
为进一步评估RBD9. 1血清对病毒的中和能力，研究者将各组小鼠的血清分别与病毒 野生型、5种突变株混合，检测ACE-2过表达细胞的病毒感染率，发现_______，说明 RBD9. 1血清能有效中和野生型病毒及其突变株。

实验二：用RBD9. 1刺激各组免疫后小鼠脾细胞，发现仅乙、丙两组检测到细胞毒性T 细胞比例、IL-2等细胞因子的分泌量明显提高，表明RBD9. 1可以诱导小鼠产生_______免疫记忆。
(3)某些病毒诱导机体产生的抗体与病毒结合后可引发ADE效应（图2)，加重病情发展。 为探究RBD9.1抗体能否通过Fc-FcγR相互作用介导最新流行突变毒株产生ADE效 应，请选择实验材料，设计实验方案。
实验材料：
①Fc段突变的RBD9. 1抗体；②RBD9. 1抗体；③FcγR抗体；④表达FcγR的 细胞D ;⑤FcγR基因敲除的细胞D;⑥最新流行突变毒株 实验方案：

组别	实验处理	检测
实验组	将 I 共同温育一段时间后，加入到 II 细胞培养瓶中	细胞的病毒感染率
对照组	将 Ⅲ共同温育一段时间后，加入到 V细胞培养瓶中

____________
(4)依据本研究，你是否支持针对RBD9. 1进行新型疫苗研发，请说明理由_______。

7 . 疫苗接种是预防肺炎链球菌感染的有效手段。减毒无荚膜肺炎链球菌（SPY1）作为减毒活疫苗经鼻腔滴入使小鼠免疫，对成年鼠的保护效果较好，但对幼鼠的保护效果有限。
(1)经鼻腔滴入的 SPY1 减毒活疫苗入侵机体的第一步，是突破作为人体第__________ 道防线的鼻黏膜。随后抗原呈递细胞对其进行__________ 并呈递抗原，引起机体发生___________ 免疫反应。
(2)使用佐剂（免疫应答的辅助物质）是提高疫苗效果的有效手段。经典佐剂CT 毒性较 强，不适于婴幼儿疫苗。科研人员以幼鼠为实验对象，研究以   C48/80 为佐剂的 SPY1 ，疫苗的免疫效果，实验处理和结果如下。

组别	滴鼻免疫幼鼠	免疫保护监测
第一组	？	免疫后2周，每组随机取6只幼鼠，在鼻腔内滴入等量的D39肺炎链球菌。3天后，统计气管除D39的数目
第二组	CT
第三组	C48/80
第四组	SPY1
第五组	C48/80+ SPY1
第六组	CT+SPY1

注：佐剂 CT 等需溶解至磷酸盐缓冲液（PBS）中
第 1 组的操作是_____。实验结果表明_____。
(3)科研人员进一步将同等菌量的   D39 和 SPY1 对幼鼠滴鼻并记录幼鼠存活情况，结果如 图 2。并检测了 CT 和 C48/80 滴鼻对幼鼠肺组织的影响，组织切片结果如图 3。

上述两实验的目的是_____。
(4)综合以上研究，研究者认为佐剂 C48/80 和 SPY1 联合制备的肺炎疫苗具有很好的应 用前景，请说明理由_____。

9 . 呼吸道黏膜能阻碍SARS－CoV－2等病原体的入侵，是黏膜免疫系统的重要组成部分。下图表示呼吸道黏膜的部分免疫过程，请据图回答问题。

(1)人体免疫系统具有免疫防御、免疫监视和___________等功能。呼吸道黏膜的免疫类型有________。
(2)SARS－CoV－2借助气溶胶进入呼吸道后，黏膜DC细胞摄取、处理病毒，并将抗原肽呈递到细胞表面，通过与Th细胞接触，促进Th细胞增殖和分泌细胞因子，后者进一步诱导B细胞增殖分化，形成能分泌分泌型IgA的___________细胞和记忆B细胞；同时启动细胞免疫获得___________等特异性细胞。
(3)陈薇院士团队已研制出可雾化吸入的腺病毒载体重组新冠疫苗，通过改造人类5型腺病毒，在阻止___________，降低病毒毒力的同时，通过向病毒载体中插入___________序列，在人体细胞中合成S蛋白，诱导黏膜免疫。
(4)与肌肉注射疫苗相比，雾化吸入疫苗的应用优势有___________。雾化吸入疫苗不能选用灭活病毒疫苗或重组蛋白疫苗，而用腺病毒载体疫苗，可能的原因是______________________。
(5)研究发现肾上腺糖皮质激素升高会抑制粘液和分泌型IgA的产生。生活中我们发现，长期压力过大、精神紧张的人更容易患感冒，原因是这类人___________。