1 . CRISPR/Cas9基因编辑技术、转基因技术等新技术被用于水稻等作物改良。sgRNA和Cas9蛋白是CRISPR/Cas9系统的核心，sgRNA是根据靶基因设计合成的向导RNA，引导Cas9蛋白对靶基因进行剪切，实现对靶基因定点编辑。
(1)CRISPR/Cas9系统广泛存在于自然界的细菌细胞内，推测其作用是____________。CRISPR/Cas9系统中的sgRNA可与目标DNA结合，依据的原理是______________。CRISPR/Cas9基因编辑技术有时存在编辑对象出错而造成“脱靶”，sgRNA的识别序列越短，脱靶率越高，请分析原因_____________________。
(2)杂交水稻的培育常用到雄性不育系。水稻是两性花，其雄性育性受基因控制，但高温会导致花粉败育。科研人员发现两株温敏型雄性不育突变株M和N，其雄性不育的起点温度分别为25℃、21℃。考虑到大田中环境温度会有波动，制备水稻杂交种子时，选用植株N作母本进行杂交更合适，理由是______________。
(3)为培育不受温度影响的雄性不育株，科学家利用CRISPR/Cas9基因编辑系统，将纯合野生稻（2N）甲中的冷敏型基因g改造为耐冷型基因G，筛选得到纯合耐冷突变体乙。同时利用转基因技术将抗虫基因（H）转入不抗虫野生稻中，外源抗虫基因可插入到不同的染色体上，培育得到纯合抗虫水稻丙和丁。科研人员进行如表所示实验。

实验	亲本	F1表型	F2表型及数量
A	甲×乙	耐冷型	耐冷型280，冷敏型200
B	丙×丁	全抗虫	抗虫1502，不抗虫99

①据实验A的F₂中耐冷型植株与冷敏型植株的数量比，有人提出假设：F₁产生的雌配子育性正常，但带有G基因的花粉成活率很低（假设其花粉成活率保持不变）。请设计杂交实验方案，检验上述假设，并写出支持该假设的实验结果_________________。
②实验B的F₂出现该性状比的原因是_________________________。

2 . 研究证实，人低氧诱导因子（HF-1a）表达水平与肝癌的发生发展具有密切关系，HIF-1a在肝癌细胞中的表达水平明显高于正常肝细胞的。CRISPR/CcS9基因编辑技术是通过人工设计的sgRNA（向导RNA）来识别目的基因组序列，并引导Cas9蛋白酶进行有效切割目的DNA双链。形成双链断裂，而在细胞自我修复过程中通常会发生碱基插入或缺失的错配现象等，最终干扰基因组DNA的表达。使用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除HIF-la基因可以为肝癌治疗提供新途径。回答下列问题：
(1)由题意可知，Cas9蛋白酶很可能作用于DNA的__________部位造成了双链断裂，其作用效果类似于基因工程中的__________酶。
(2)科研人员构建了靶向HIF-1a基因的CRISPR/Cas9重组质粒，并用重组质粒通过__________法对肝癌细胞进行转染，利用其敲除肝癌细胞中的HIF-1a基因。在分子水平上可通过__________技术检测HIF-1a基因是否敲除成功，来确定CRISPR/Cas9基因是否在目的细胞中发挥作用。
(3)为检测Cas9蛋白酶对HIF-1a基因的敲除效果，取基因敲除的肝癌细胞和等量的普通肝癌细胞，然后用生理盐水配制的HIF-la表达诱导剂（CoCl₂）诱导相关细胞并检测HIF-1a蛋白的表达，检测结果如下表所示，已知甲、乙、丙、丁均为HIF-la蛋白的表达量。分析下表并回答下列问题：

	普通肝癌细胞	基因敲除的肝癌细胞
加入HIF-1a表达诱导剂	甲	乙
__________	丙	丁

表格中的处理方式为__________。若Cas9蛋白酶对HIF-la基因进行了完全敲除，则甲、乙之间的大小关系为__________（用“”“<”或“=”表示）