1 . CRISPR/Cas9是一种生物学工具，能够通过“剪切和连接”脱氧核糖核酸（DNA）序列的机制来编辑基因组。这套系统源自细菌的防御机制，是一种对任何生物基因组均有效的基因编辑工具。CRISPR/Cas9基因组编辑系统由向导RNA（也叫sgRNA）和Cas9蛋白组成，向导RNA识别并结合靶基因DNA.Cas9蛋白切断双链DNA使其形成两个末端。这两个末端通过“断裂修复”重新连接时通常会有个别碱基对的插入或缺失，从而实现基因敲除，如图所示。CRISPR/Cas9基因组编辑技术有时存在编辑出错而造成脱靶。下列叙述正确的是（　　）
   

A．Cas9蛋白能作用于脱氧核糖和碱基之间的化学键

B．对不同目标DNA进行编辑时，使用Cas9蛋白和相同的sgRNA进行基因编辑

C．CRISPR/Cas9基因组编辑系统使细菌获得抵抗溶菌酶或抗生素的能力

D．其他DNA序列含有与 sgRNA互补配对的序列，会造成 sgRNA错误结合而脱靶

2 . CRISPR/Cas9是一种生物学工具，能够通过“剪切和粘贴”脱氧核糖核酸（DNA）序列的机制来编辑基因组。这套系统源自细菌的防御机制，是一种对任何生物基因组均有效的基因编辑工具。CRISPR−Cas9基因组编辑系统由向导RNA（也叫sgRNA）和Cas9蛋白组成，向导RNA识别并结合靶基因 DNA， Cas9蛋白切断双链DNA形成两个末端。这两个末端通过“断裂修复”重新连接时通常会有个别碱基对的插入或缺失，从而实现基因敲除，如图所示。CRISPR−Cas9基因组编辑技术有时存在编辑出错而造成脱靶。下列叙述正确的是

A．靶基因部分序列与sgRNA通过碱基互补配对原则进行配对

B．通过破坏某基因后生物体的功能变化可推测该基因的功能

C．其他DNA序列含有与sgRNA互补配对的序列，造成sgRNA错误结合而脱靶

D．CRISPR−Cas9基因组编辑系统使细菌获得抵抗溶菌酶或抗生素的能力

3 . 先导编辑技术是利用经过改造的Cas9蛋白，在基因组中的特定位点切断DNA，随后逆转录酶在RNA链的引导下在切断处进行基因编辑，其能实现更精准地对DNA进行编辑，该过程流程如图所示。该技术可以实现基因的定点突变和整合，将修饰好的基因导入胚胎干细胞，治疗人类某些单基因遗传病。

（1）基因重组技术工具中的_______酶与先导编辑工具中Cas9蛋白作用相似，但二者的不同之处是前者____________________________________________________________。
（2）下图为由经过修饰的pku基因构建的重组载体，在转化胚胎干细胞时，只有重组载体中整合区域正确整合到胚胎干细胞染色体DNA上才表示转化成功，而重组载体的其他区域将被靶向分解。在转化中会出现错误整合，整合错误才会出现重组载体中的两个HSV-tk中至少会有一个与neo^r一起整合到染色体DNA上而不被分解。已知含有标记基因neo^r的细胞具有G418的抗性。HSV-tkl、HSV-tk2的产物都能把DHPG转化成有毒物质而使细胞死亡。

①题干中的胚胎干细胞可以来自_____________________________，利用胚胎干细胞为受体细胞是因为其功能上具有________________________。
②胚胎干细胞在体外培养时需要满足的条件除一定的气体环境、充足营养、适宜的温度和PH外，还应保证____________条件，气体环境中的CO₂的作用是_____________________。
③转化后的各类胚胎干细胞要依次在含有G418和____________________的培养液中培养，在双重选择下存活并增殖的是正确整合的胚胎干细胞，原因是________________________________________。

4 . 生物技术的进步在给人类带来福祉的同时，会引起人们对它安全性的关注，也会与伦理道德发生碰撞，带来新的伦理困惑与挑战。下列关于生物技术安全性与伦理问题的叙述，错误的是（       ）

A．我国对农业转基因生物实行了标识制度，如注明“转基因xx”

B．生殖性克隆有可能降低人类的基因多样性，不利于人类的进化

C．我国允许通过基因组编辑技术定向改造特定基因制造“设计完美婴儿”

D．我国反对生物武器及其技术和设备的扩散，主张全面禁止生物武器

5 . 2022年1月7日，马兰里医学中心成功将猪心脏移植到一名57岁的心脏病患者身上，虽然这颗心脏仅仅存活了2个月，但仍然为异种器官移植的可行性提供了可观的数据。为了降低免疫排斥反应，研究者借助CRISPR/Cas9技术对移植的猪心脏进行了基因编辑。CRISPR/Cas9系统主要由向导RNA（sgRNA）和Cas9蛋白两部分组成，sgRNA可引导Cas9蛋白到特定基因位点进行切割、其机制如图所示。下列说法错误的是（       ）

   

A．sgRNA通过与目标DNA序列互补配对引导Cas9蛋白到位

B．有时sgRNA会因错误结合而出现“脱靶”现象，一般sgRNA序列越短，脱靶率越低

C．Cas9蛋白作用于磷酸二酯键

D．通过CRISPR/Cas9技术敲除猪心脏的某个抗原蛋白基因，至少需要设计两个序列不同的sgRNA

6 . 单细胞生物并没有免疫系统，但是科学家发现细菌中存在消除入侵病毒的功能系统，并发明了基因编辑技术。该系统主要包含单链向导和蛋白两个部分，能特异性识别并结合特定的序列，从而引导蛋白到相应位置并剪切，最终实现对靶基因序列的编辑。下列叙述错误的是（       ）

A．蛋白通过切断磷酸二酯键对进行剪切

B．基因编辑技术本质上是对靶基因进行编辑引发染色体结构变异

C．识别序列与链存在的碱基互补配对方式为，，，

D．向导的序列越短，会导致脱靶率越高

7 . 采用CRISPR/Cas9基因编辑技术可将增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因定点插入受精卵的Y染色体上，获得转基因雄性小鼠。该转基因小鼠与野生型雌性小鼠交配，通过观察荧光可确定早期胚胎的性别。下列操作错误的是（       ）

A．经基因编辑处理的受精卵在体外培养时，不同发育阶段的胚胎需用不同成分的培养液

B．经基因编辑处理的受精卵经体外培养至2细胞期后移植入同期发情小鼠的子宫

C．分离能表达EGFP的胚胎干细胞，通过核移植等技术可获得转基因小鼠

D．通过观察早期胚胎的荧光，能表达EGFP的即为雄性小鼠胚胎

8 . CLAC通道是细胞应对内质网中Ca²⁺超载的一种保护机制，可避免因Ca²⁺浓度过高引起的内质网功能紊乱。该通道功能的实现依赖一种位于内质网上的跨膜蛋白TMCO1，这种膜蛋白可以感知内质网中过高的Ca²⁺浓度并形成具有钙离子通道活性的四聚体，主动将内质网中过多的Ca²⁺释放到细胞质基质中，当内质网中的Ca²⁺浓度下降到与细胞质基质Ca²⁺浓度接近时四聚体解聚，钙通道活性消失。下列分析错误的是（       ）

A．敲除编码TMCO1的基因可能会出现内质网中钙离子浓度过高

B．TMCO1四聚体的形成和解聚只受内质网中Ca2+浓度的调节

C．若要追踪TMCO1的合成途径，需要用3H标记氨基酸的羧基

D． Ca2+既是跨膜蛋白TMCO1运输的对象，又是调节TMCO1功能的信号分子

9 . 世界首例免疫艾滋病的基因编辑婴儿，是由经CRISPR/Cas9基因编辑技术对CCR5基因进行修改的胚胎细胞孕育的。研究者的初衷是让志愿者生出能抗艾滋病病毒的婴儿。但婴儿诞生后，深圳市医学伦理专家委员会启动对该事件涉及伦理问题的调查。下列有关叙述错误的是（       ）

A．在普通培养液中加入适量的动物血清可以培养艾滋病病毒

B．修改的胚胎细胞孕育出婴儿说明胚胎细胞具有发育的全能性

C．胚胎是人生命的一个自然阶段，不能对其生命属性进行非道德篡改

D．经过基因编辑的个体，有可能影响基因选择性表达，而导致其他疾病的产生

10 . CRISPR/Cas9基因编辑技术的原理是由一条单链向导RNA引导内切核酸酶Cas9到一个特定的基因位点进行切割。通过设计向导RNA中的识别序列，可人为选择DNA上的目标位点进行切割。如图是利用该技术对某生物B基因进行编辑的过程，下列叙述错误的是（       ）

   

A．B基因被编辑后因不能转录而无法表达出相关蛋白质

B．根据B基因被编辑后生物体的功能变化，可推测B基因的功能

C．基因定点编辑前需要设计与靶基因全部序列完全配对的sgRNA

D．图中sgRNA1的碱基序列和sgRNA2的碱基序列相同或互补