1 . 酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流程，请回答下列问题：

（1）配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的_____，及时对培养基进行分装，并进行_____灭菌。
（2）取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤③中将温度约_____（在25℃、50℃或80℃中选择）的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养。
（3）挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤④所示进行划线。下列叙述合理的有_____。
a.为保证无菌操作，接种针，接种环使用前都必须灭菌
b.划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落
c.挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量
d.可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株
（4）步骤⑤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和_____供应。为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释1000倍后，经等体积台盼蓝染液染色，用25×16型血细胞计数板计数5个中格中的细胞数，理论上_____色细胞的个数应不少于_____。才能达到每毫升个活细胞的预期密度。

2 . 回答下列（一）、（二）小题：
（一）回答与酿酒和制醋有关的问题：
（1）用干酵母作为发酵菌酿制果酒时，需先将适量干酵母放在小烧杯中，加入少量温水（＜40℃）和一小撮蔗糖制成_______，待其出现_______，表明干酵母已活化。
（2）发酵过程中，最初2~3天内可能看不到发酵液中冒出气泡，这是因为酵母菌进行_______使发酵瓶内出现负压。为了掌握发酵进程，需测定发酵液中酵母菌的活菌数量、发酵液密度和酒精浓度等。酒精在酸性条件下，可被重铬酸钾氧化产生绿色的三价铬，故可采用_______法对发酵液中的酒精浓度进行测定。样品处理过程中，需先用活性炭进行脱色，其目的是_______。
（3）用果酒酿制果醋时，发酵瓶中先装八分满的经_______处理的锯末，然后加入含有醋杆菌的_______使醋杆菌附着在锯末上，成为固定化醋杆菌。采用固定化醋杆菌而不是固定化酶进行醋酸发酵的主要原因是_______。
（二）回答与基因工程和克隆技术有关的问题：
（1）构建重组DNA分子时，使用两种限制性核酸内切酶处理含目的基因的DNA片段和载体DNA，然后在DNA连接酶的催化下拼接；优点是可防止目的基因和切割后的载体DNA_______及反向拼接。影响拼接效率的主要因素，除了反应溶液的盐离子浓度、温度、渗透压等环境因素外，还有_______（答出2点即可）。
（2）如培育转基因植物，可选择_______培养获得的细胞系作为受体细胞，则可快速获得稳定遗传的转基因植物。如要利用转基因动物的乳腺作为生物反应器来生产基因工程药品，则一般选择_______细胞作为受体细胞，用显微注射的方法导入重组DNA分子，完成_______过程。相比细菌基因工程，以转胰岛素原基因动物的乳腺作为反应器来生产人胰岛素的优点有：乳腺细胞含有内质网和高尔基体，_______；表达的胰岛素随乳汁及时排出体外，便于提取纯化等。
（3）如要在分子水平判断目的基因在受体细胞中是否表达，可检测细胞内是否含相应的_______或蛋白质分子，若检测后者可用_______技术获得特异性探针，与提取的蛋白质杂交。

3 . 为了检验某城市自来水中的大肠杆菌含量，甲、乙、丙三个生物兴趣小组进行了相关实验。先将5L水样浓缩至5mL，再取水样在伊红美蓝培养基上进行接种，最后计算菌落数。其中甲组每次取浓缩水样1mL，乙组每次取浓缩水样0.1mL，丙组每次取浓缩水样0.01mL结果如下表：

	菌落数
	第一次取样	第二次取样	第三次取样
甲组	1000	1150	1200
乙组	110	100	120
丙组	13	15	14

下列说法错误的是（       ）

A．实验过程要设置空白对照组，若空白对照组上长出了菌落，需要在实验组数据的基础上减去空白对照组的菌落数

B．原水样中大肠杆菌的数目，要取三个小组三次取样所得菌落数的平均值

C．该过程最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，二者都会稀释分散菌种，实现目的菌的分离、纯化

D．每0．1mL浓缩水样中的活菌数通常比乙组的统计结果偏大

4 . 血红蛋白是人和其他脊椎动物负责血液中O₂或CO₂运输的蛋白质。请回答以下有关问题：
（1）蛋白质的提取和分离分为样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定四步，凝胶色谱法一般用于____________这一步，凝胶色谱法是____________的有效方法；所用凝胶的化学本质大多为____________。
（2）科学家发现家蝇体内存在一种抗菌活性蛋白，这种蛋白质具有极强的抗菌能力，受到研究者重视。分离该抗菌蛋白可用电泳法，其原理是根据蛋白质分子的___________________、大小及形状不同，在电场中的____________不同而实现分离。
（3）血红蛋白是一种含铁的蛋白质，它存在于____________中。若要根据某人血红蛋白的含量数据来判断其健康状况，则体检时____________（选填“要”或“不要”）空腹做____________。若某人患有慢性贫血，则体检单上会显示血红蛋白含量____________。
（4）人口腔上皮细胞中____________（选填“含有”或“不含有”）血红蛋白，____________（选填“含有”或“不含有”）控制血红蛋白合成的基因，判断是否含有该基因的依据是____________。

5 . 回答下列（一）、（二）小题：
（一）回答与柑橘加工与再利用有关的问题：
（1）柑橘果实经挤压获得果汁后，需用果胶酶处理，主要目的是提高果汁的__________。为确定果胶酶的处理效果，对分别加入不同浓度果胶酶的果汁样品，可采用3种方法进行实验：①取各处理样品，添加相同体积的__________，沉淀生成量较少的处理效果好。②对不同处理进行离心，用比色计对上清液进行测定，OD值__________的处理效果好。③对不同处理进行__________，记录相同体积果汁通过的时间，时间较短的处理效果好。
（2）加工后的柑橘残渣含有抑菌作用的香精油及较多的果胶等。为筛选生长不被香精油抑制且能高效利用果胶的细菌，从腐烂残渣中分离得到若干菌株，分别用无菌水配制成__________，再均匀涂布在LB固体培养基上。配制适宜浓度的香精油，浸润大小适宜并已__________的圆形滤纸片若干，再贴在上述培养基上。培养一段时间后，测量滤纸片周围抑制菌体生长形成的透明圈的直径大小。从直径__________的菌株中取菌接种到含有适量果胶的液体培养基试管中培养，若有果胶酶产生，摇晃试管并观察，与接种前相比，液体培养基的__________下降。
（二）回答与基因工程和植物克隆有关的问题：
（1）天然农杆菌的Ti质粒上存在着一段DNA片段（T-DNA），该片段可转移并整合到植物细胞染色体上。为便于转基因植物在组织培养阶段的筛选，设计重组Ti质粒时，应考虑T-DNA中要有可表达的目的基因，还需要有可表达的__________。
（2）结合植物克隆技术进行转基因实验，为获得转基因植株，农杆菌侵染的宿主一般要选用具有优良性状、较高的遗传稳定性、__________及易被农杆菌侵染等特点的植物材料。若植物材料对农杆菌不敏感，则可用__________的转基因方法。
（3）利用带侧芽的茎段获得丛状苗的过程与利用茎段诱导产生愈伤组织再获得丛状苗的过程相比，前者总培养时间__________，且不经历__________过程，因而其遗传性状稳定，是大多数植物快速繁殖的常用方法。
（4）与发芽培养基相比，配制转基因丛状苗生根培养基时，可根据实际情况适当添加__________，促进丛状苗基部细胞分裂形成愈伤组织并进一步分化形成__________，最终形成根。还可通过改变MS培养基促进生根，如_____（A．提高蔗糖浓度B．降低培养基浓度C．提高大量元素浓度D．不添加琼脂）。

6 . 阿拉伯胶是一种多糖，也称阿拉伯树胶，是一种产于非洲撒哈拉沙漠以南的半沙漠带的天然植物胶，主要包括有树胶醛糖、半乳糖、葡萄糖醛酸等。在食品、医药、化妆品及其他工业上有广泛的应用。其水溶液易被细菌、真菌或酶降解。为研究自然界中微生物对阿拉伯胶的降解作用，研究者从某地合欢树下距离地表深10～15cm处的土样中初筛到能合成阿拉伯胶降解酶的“M”菌。
请回答下列问题：
（1）某同学将初筛菌液接种在固体培养基上，其中一个平板经培养后的菌落分布如下图所示。该同学采用的接种方法是___________；从结果推测该同学接种时可能出现的失误是：_____________________。

（2）观察发现：“M菌的菌落为粉白色，菌落初期呈突起絮状。在显微镜下观察到：菌丝白色致密，且有分生孢子，细胞核直径约1μm。可断定“M”菌为___________（填“细菌”或“真菌”），判断依据是：______________________。
（3）分离该阿拉伯胶降解酶可用电泳法，其原理是根据蛋白质分子的___________以及分子本身的大小、形状的不同，使之在电场中的___________不同而实现分离。
（4）下表中培养液pH均为6．0，若对“M”中阿拉伯胶降解酶的活力进行测定，则应选用表中的______培养液，不选用的其他培养液的原因分别是：______________________。

实验用培养液配方
培养 液	阿拉 伯胶	阿拉伯   胶酶	NaNO3	牛肉膏	K2HPO4	MgSO4·7H2O	KC1	FeSO4·7H2O
A	25g/L	一	—	—	lg/L	lg/L	0．5g/L	0．01g/L
B	25g/L	1μg/L	一	3g/L	1g/L	1g/L	0．5g/L	0．01g/L
C	一	—	3 g/L	—	1g/L	lg/L	0．5g/L	0．01g/L
D	25g/L	—	3 g/L	一	1g/L	1g/L	0．5g/L	0．01g/L

7 . 自然界中有很多种微生物，尚未能分离纯化培养，科研人员开发了新的微生物分离 技术以筛选微生物。
（1）配制培养基并分离微生物的步骤是：计算→称量→溶化→调pH→______________→倒平板→______________→培养。筛选微生物的一般思路是，根据表型特征利用____培养基进行筛选。
（2）若某种微生物没有明显表型特征时，就无法通过上述方法筛选，科研人员通过图所示的流程进行筛选。

①据图分析，科研人员利用目标微生物编码膜蛋白的____________________，构建表达载体，并导入用________________处理的大肠杆菌细胞中，获取大量膜蛋白。
②用获取的膜蛋白作为抗原，利用兔子制备单克隆抗体的具体流程是：_____。
（3）将上述带有荧光的单克隆抗体与待分离微生物群体混合，目的是_____目标微生物。 用流式细胞仪分离不同荧光强度的细胞，结果如图2所示。对结果进行比较，应从区域_____（选填图中数字）的细胞中筛选目标微生物。

8 . 下图1装置可用于探究酵母菌呼吸方式的实验，图2为图1的不同培养阶段酵母菌种群数量，葡萄糖浓度和乙醇浓度的变化曲线，请回答下列问题：

（1）为了获得图2曲线，应_____________（填“打开”或“关闭”）图1中的阀a，并从图1中的_____________（填“管口1”、“管口2”或“管口3”）取样检测。
（2）酵母菌种群数量从c点后开始下降的主要原因除葡萄糖大量消耗外，还有_____________、_____________。
（3）在—时段，酵母菌进行细胞呼吸时分解葡萄糖能量有三条去路：①以热能的形式散失、②储存在乙醇中、③转移到ATP的高能磷酸键中，以上三条途径所分配的能量从大到小排序是_____________（填数字序号）
（4）用血细胞计数板对活酵母菌进行计数时，正确的实验方法是_____________。（填序号）
A．将盖玻片盖在计数室上后，从盖玻片边缘滴加酵母菌培养液
B．若取样的小方格中酵母菌过多，可选择邻近的一个小方格计数
C．对压在小方格界线上的酵母菌，只计数上下两条界线上的酵母菌
D．将培养后期的样液稀释后再取样计数
如果某时刻计数的五个中方格的酵母细胞总数为100个，则此刻的酵母菌数量处于图2中曲线上的_____________点左右，可选择b点时刻的酵母菌来探究酵母菌能否进行无氧呼吸，其理由是_____________。
（5）某同学在时取样，统计的酵母菌种群数量明显高于e点对应的数量，原因可能有_____________、未染色，统计的菌体数包含了死亡的菌体和用血球计数板计数时出现错误等。

9 . 三孢布拉霉菌能用来生产胡萝卜素，但该菌株的高产性状容易退化，需要定期筛选出高产菌株，研究表明菌体细胞内的[H]可将无色的TTC还原为红色复合物，且菌体细胞内[H]含量越高，还原能力越强，胡萝卜素合成能力也越强。请结合下列筛选菌株及提取胡萝卜素的流程图回答问题：
三孢布拉霉菌液→梯度稀释→涂布到含有TTC的培养基上→挑取单菌落→扩大培养→收集菌丝并处理→萃取→鉴定
（1）工业生产上提取天然胡萝卜素的方法主要有三种，除可利用上述微生物的发酵生产之外，还可以从植物中提取和从______________中获取。用有机溶剂萃取的方法获取胡萝卜素时萃取的最佳温度和时间可以通过设置______________来摸索。
（2）将菌液涂布到含TTC的培养基上，目的是筛选出________________________，对照组需涂布等量的______________以判断培养基是否被污染。挑取单菌落时，若菌落周围______________，则菌株合成胡萝卜素的能力较强。
（3）从该微生物中提取胡萝卜素时，扩大培养后要收集菌丝进行的处理是粉碎和__________，以提高萃取效率。为了验证萃取物是否是胡萝卜素，该同学将叶绿素b、叶绿素a、叶黄素、萃取物和色素混合液（含叶绿素b、叶绿素a、叶黄素和胡萝卜素）依次点样在滤纸的1、2、3、4、5位置（如图甲所示），并进行分离，滤纸条上各色素带的位置为______________（填字母）时，即可说明该萃取物最可能是胡萝卜素。

10 . 纸片扩散法药物敏感实验是在涂有细菌的培养基上按照规定要求铺设浸有不同药物的纸片，培养一段时间后测量抑菌圈的大小，从而测试受试菌株对各种药物的敏感程度。下图为某一纸片扩散法药物敏感实验的结果，下列分析正确的是（       ）

A．在图示培养基上可用平板划线法或稀释涂布法接种病原菌

B．若两纸片位置相距较近，可将其中的一个纸片重新放置

C．形成的抑菌圈较大的原因可能是受试菌株对药物较敏感

D．不同抗生素在平板上的扩散速度不同会对实验结果造成影响