1 . α-淀粉酶催化淀粉生成麦芽糖直至葡萄糖的反应，一些具有独特性能（如低温催化）的α-淀粉酶在食品、日用品等多个工业领域中具有重要用途。
(1)为了找到性能优异的α-淀粉酶，科研人员从世界各地的微生物中鉴别出多种不同结构和性能的α-淀粉酶，其活性部位的氨基酸序列比较如表1所示。表中数据可作为生物进化的______证据。

微生物名称	α-淀粉酶活性部位氨基酸序列	性能
黑曲霉	…DVVANH…GEV…NHD…	来自温带土壤，常温催化
假交替单胞菌	…DVVINH…GEA…NHD…	来自北极海底，低温催化
酵母菌	…DGVFGH…GYG…NHD…	来自温带海洋，常温催化
解淀粉芽孢杆菌	…DVVLNH…GIW…HFN…	来自热带土壤，高温催化

(2)为了比较不同来源淀粉酶的活性，科研人员设计了如下所示的实验。试在表格2中的①②③处填写相应的数值。

试剂（mL）	管号	1	2	3	4
蒸馏水		0.4	0.4	0.4	①____
缓冲液		0.5	0.5	0.5	0.5
淀粉溶液		2.0	2.0	2.0	2.0
假交替单胞菌提取液		0.1
酵母菌提取液			0.1
解淀粉芽孢杆菌提取液				②____	③____
总体积		3.0	3.0	3.0	3.0

(3)科研人员挑选表1中假交替单胞菌的α-淀粉酶基因Amy3与质粒pET-22b连接，并转入大肠杆菌中表达。根据图1所示信息，质粒应用限制酶____________切开。

(4)已知大肠杆菌不能分泌表达出的重组α-淀粉酶，因此分离纯化重组α-淀粉酶的第一步操作应是____________。在很多情况下，获得的纯酶还需要固定化，其目的是____________。
(5)欲测定重组α-淀粉酶的活性，检测实验结果可选用的试剂是____________。
(6)科研人员在调查上述重组α-淀粉酶的最适pH时，使用了三种化学成分不同的pH缓冲液（因为每种缓冲液只能维持有限的pH范围），实验结果如图2所示。试解释在pH为7.5和9.0时实验数据不吻合的原因是____________。

4 . 回答下列（一）、（二）小题：
（一）研究表明低温发酵可以显著提高果酒的口感，但发酵的速度却过于缓慢。为克服这一缺点，科研人员制备了一种在低温下具有较强发酵能力的固定化酵母菌。请回答以下问题：
(1)为获取具有较强发酵能力的酵母菌，科研人员将普通酵母菌用紫外线照射等方法进行__________处理，选择在低温条件上能大量繁殖的酵母菌分别接种于等量的葡萄糖培养液中，然后置于低温、__________条件下培养。一段时间后，取适量发酵液离心，取__________与相应的显色剂反应后，用光电比色法测定酒精含量，从而选择高活性的菌种制成干酵母。
(2)在超净工作台中，将耐低温的高活性干酵母置于适宜温度的__________溶液中，待酵母悬液中出现气泡后，加入包埋介质制备成固定化酵母菌，最后用无菌水清洗以除去__________。用固定化酵母菌能明显缩短果酒发酵时间的原因是固定化使__________，形成酵母菌密度较高的发酵环境，从而加快反应速度。
(3)果酒在醋杆菌的作用下可转为果醋。将果酒、水、醋杆菌等混合液倒入发酵瓶时，不能让发酵瓶中有游离液体存在的主要目的是__________。为鉴定果醋是否酿制成功，除可以通过观察菌膜、嗅之外，还可以通过检测__________作进一步的鉴定。
（二）下图表示获得抗除草剂转基因玉米的培育过程，图中的报告基因只能在真核生物中正确表达，其产物能使某种能被细胞吸收的无色物质K呈现蓝色。请回答以下问题：

(4)构建重组质粒是基因工程的核心，此过程通常需要__________和DNA连接酶等工具酶。Ti质粒是农杆菌中的一种质粒，其上有一段包含报告基因的T－DNA序列，因该片段能进入植物细胞并__________，从而使其携带的目的基因的遗传遵循孟德尔定律。
(5)图中筛选1的目的是__________。农杆菌转化愈伤组织的过程中，愈伤组织表面常残留农杆菌，会导致未转化的愈伤组织可能在含除草剂的培养基中生长。因此，进行筛选2时，应在培养基中加__________，并挑选__________的愈伤组织细胞，用于植物组织培养。
(6)将单个转化的愈伤组织细胞置于适当的液体培养基中，经过适当配比的__________诱导，可发育成胚状体，最后发育成完整的植株。此过程始终要在适宜温度、适宜培养基及__________等条件下进行。

5 . 回答下列（一）、（二）小题：
（一）我国的酿酒工艺历史悠久，各种水果、各种粮食都可作为原料酿酒，如红薯酒就是利用红薯酿制的黄酒，酒精度约为9%。回答下列酿造红薯酒的相关问题
(1)原料处理： 鲜红薯常需要切去腐烂部位，该处理的目的防止影响红薯酒的_______。然后再加入10%蔗糖后入锅蒸煮。蒸熟后趁热挤碎，___________后拌入5%的麦芽，使其温度保持在55℃左右，约4小时搅拌令其出液。过滤后，取滤液入缸待用。蒸煮前拌入适量蔗糖的目的是___________。加入的麦芽的作用是_________。
(2)发酵：待滤液温度降至25℃左右加入酵母菌，24小时后发酵液温度上升至30℃左右，此后每半天需搅拌一次，搅拌的主要目的是______________。10天左右，发酵液中糖分耗完引起________发酵终止。
(3)装罐储存：对发酵液进行过滤压榨，榨出的酒液静置2-3天用_____（填方法）取出上面澄清液，杀菌后装入经_____________处理的酒罐，密封低温保存。
（二）ACC氧化酶是合成乙烯的关键酶，由ACC氧化酶基因控制合成。科研人员将人工合成的ACC氧化酶基因反向插入到质粒的启动部位之后，构成反义ACC 氧化酶基因，再通过农杆菌转化法转入番茄染色体DNA中。反义ACC氧化酶基因在番茄细胞中的转录产物能与ACC氧化酶基因的转录产物互补配对，抑制乙烯的产生，使番茄减缓成熟。请回答：
(4)科研人员能直接用化学合成ACC氧化酶基因的前提条件是________。人工合成ACC氧化酶基因后，需用______________进行扩增。
(5)Ⅲ在构建重组质粒时，为确保ACC氧化酶基因反向插入质粒中，需用_________种限制性核酸内切酶切割目的基因和Ti-质粒。为了便于转化后的筛选，表达载体还应具有________。
(6)将含有重组质粒的农杆菌液涂抹在无菌番茄幼苗的芽尖，适宜时间后，用__________冲洗芽尖除菌，接种于______________（填“固体”或“液体”）培养基，经脱分化形成愈伤组织，进而形成转基因植株。实验中选择番茄幼苗的芽尖作为外植体的原因是________。
(7)反义ACC氧化酶基因抑制转基因番茄乙烯的产生，从基因表达的过程来看，是通过对______过程的调控来实现的。

6 . 回答下列（一）（二）小题
（一）苹果营养丰富，富含果胶、淀粉和纤维素等成分。请回答下列问题：
(1)苹果榨汁过滤收集得到的果汁，因_______含量较高而澄清度低，添加_______可使其沉淀。果汁保存前，通常先灭菌处理，可用_______________（写出一种即可）方法检测灭菌的效果。
(2)可利用苹果皮渣制取果胶，为提高果胶得率，需对苹果皮渣进行热处理，其原因是___________。但若热处理的温度过高，果胶得率也明显下降，其原因可能是________________。
(3)微生物法分离果胶，其原理是利用微生物分解植物组织中的复合多糖体，从而使果胶从植物组织中游离出来，有效提取果胶。为分离此类优良菌株，将待选菌群用__________方法接种在以__________为唯一碳源的培养基中进行初步筛选并计数。
(4)进一步研究发现，筛选得到的菌株还能分解餐厨垃圾（主要含蛋白质、淀粉、油脂等），说明其能分泌________。
（二）回答与人乳铁蛋白转基因山羊研究的相关问题：
(5)转基因动物制备过程中，受精卵与体细胞相比有更高的_________能力，常作为受体细胞。因哺乳动物受精卵数量有限等原因，生产研究中多用雌性山羊胚胎成纤维细胞来代替。使用时，将低温保存的雌性山羊胚胎成纤维细胞__________后，接种到装有细胞培养液的卡式瓶中，再将卡式瓶放入____________中进行原代培养，以获得更多数量的细胞。
(6)通常将乳铁蛋白基因与载体构建形成重组DNA分子后，用显微注射法导入雌性山羊胚胎成纤维细胞，转化成功率与___________________（写出两点即可）有关。为方便筛选含乳铁蛋白基因的转基因细胞，所构建的重组DNA分子上应有____________________。
(7)将转入乳铁蛋白基因的胚胎成纤维细胞，与羊的卵细胞构建成_______，利用胚胎工程技术生产转基因山羊。为检测转基因山羊中乳铁蛋白基因的表达情况可采用的方法是_____________________（写出一种即可）。