1 . 体细胞核移植已在很多物种中取得成功，但其效率较低，只有不足4%的重构胚能发育成健康的个体，原因可能是胚胎的基因表达异常所致。下图为提高克隆牛重构胚发育的技术流程，其中TSA为组蛋白脱乙酰化酶抑制剂。请回答以下问题：

(1)体外培养牛乳腺细胞会发生接触抑制，需进行_____处理，进而实现传代培养。
(2)采集的卵母细胞需要培养至_____时期，去除的“核”实际上是指_____。除了使用图中的显微操作法去核，还可使用梯度离心、_____和化学物质处理等方法去核。
(3)胚胎移植前需要对代孕母牛进行_____处理。一般选择发育至_____时期的胚胎进行移植。
(4)一次核移植技术后，若需要获得更多克隆小牛，可对早期胚胎进行胚胎分割，操作时要注意_____。

2 . “蓝白斑筛选”是一种基于质粒载体的DNA重组技术，它可通过改变质粒载体中的DNA序列，实现对菌落颜色的调控，如图所示。回答下列问题：

	氨苄青霉素
未导入质粒	×
导入空白质粒	√蓝色菌落
导入重组质粒	√白色菌落

(1)构建重组载体时，应将目的基因插入到质粒的_____之间。将外源DNA片段与质粒连接成重组质粒时，所用的酶催化形成的化学键是_____。试从限制酶的角度提出一条避免载体自身环化的方法：_____。
(2)将重组质粒转入大肠杆菌前，需在低温﹑低浓度的_____溶液中处理大肠杆菌，目的是_____。
(3)在筛选导入重组质粒的大肠杆菌时，培养基中应加入_____。培养一段时间的平板上，含有重组质粒的大肠杆菌菌落呈白色的原因是_____。与“氨苄青霉素”筛选相比，“蓝白斑”筛选的优点是_____。

3 . 为提高作物产量，种植业往往使用大量的氮素化肥，既增加了生产成本，又易造成环境污染。自生固氮菌营独立生活，为改变这种现状带来了希望。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如下图，回答下列问题：

   

(1)土壤是微生物的天然培养基，该培养基能为微生物的提供的营养物质分别是_____。
(2)下表为两种培养基的配方，步骤④应选其中的培养基_____。

培养基类型	培养基组分
培养基甲	甘露醇、、、NaCl、、、蒸馏水
培养基乙	甘露醇、、、NaCl、、、蒸馏水、琼脂

(3)纯化培养时，需同时进行未接种培养基的培养，目的是_____。
(4)④的平板上统计结果数一般用菌落数表示，一般选择数目 30-300在范围的平板上计数。若甲研究员做这个实验，统计的菌落数分别是132、136、128，则每克土壤中含有的固氮菌为_____个，运用这种方法统计的结果往往较实际值_____。原因是_____。除此之外还可以用_____，但运用这种方法统计的结果往往较实际值偏大。
(5)图3是某同学利用不同于图1方法从稀释液中分离菌株的示意图。下列对其操作及结果的叙述不正确的有_____（填字母）。

   

a.操作前用无水乙醇对双手进行消毒处理
b.划线时将沾有菌种的接种环插入培养基
c.只有在5这一区域中才能得到所需菌落
d.整个过程需要对接种环进行6次灼烧

4 . EV71是引发手足口病的一种人肠道病毒。为制备抗EV71的单克隆抗体，科研人员用小鼠进行实验。抗原的选择和制备过程为：将EV71灭活病毒、EV71外壳蛋白VP1和VP2、非EV71蛋白注射到小鼠体内，多次免疫后，取上述各组小鼠的血清和未免疫小鼠血清，测定抗体与抗原的结合强度，结果如下图所示。

(1)EV71免疫的小鼠血清抗体_____（填“是”或“不是”）单一抗体，据图分析判断依据是_____。
(2)制备抗EV71单克隆抗体时，选用_____免疫的小鼠的B细胞效果最佳。单克隆抗体的制备流程图如下：

(3)相比较植物细胞，诱导融合动物细胞特有的方法是_____，融合后将获得_____种细胞（只考虑细胞两两融合的情况）。用选择性培养基对融合后的细胞进行筛选目的是获得_____。将其接种到96孔板，进行_____培养和_____，目的是获得_____。
(4)图中体外的扩大培养，是从_____中获取大量的单克隆抗体。除此之外还可以使用的方法是_____，该单克隆抗体具有的优点是能准确识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性识别，并且可大量制备。

5 . 花椰菜（2n=18，用MM表示）属十字花科，经人工长期定向选育，对黑腐病无抗性。黑芥（2n=16用，NN表示）为花椰菜近缘野生种，对黑腐病等多种常见病害具有抗性。我国科学家将黑芥叶肉原生质体和花椰菜下胚轴原生质体融合，获得了抗黑腐病的杂合新植株（过程如下图）：请回答下列问题：

(1)利用酶解法去除细胞壁获取原生质体，图①表示原生质体融合的过程，融合原理是_____，诱导过程常用的物理方法是_____（两种），融合成功的标志是_____。
(2)图②是图①经脱分化后形成的愈伤组织。由图②经_____过程形成图③，细胞呈现特定的结构和功能，该过程的实质是_____，原理是_____。
(3)给予光照，在培养一定天数后，用显微镜观察细胞中是否存在_____（细胞器），作为早期鉴别杂合细胞的标志，初步筛选出融合细胞。获得的融合细胞染色体组成为_____（用字母M和N表示），染色体数为_____，染色体组数为_____。
(4)请说出鉴定新植株是否抗黑腐病的方法_____。
(5)与传统的有性杂交方法相比，植物体细胞杂交技术的主要优点是_____。

6 . 对下列图示的生物学实验的叙述正确的是（　　）

A．若图①表示将镜头由a转换成b，则视野变明亮，观察到的细胞数目也增多

B．若需放大观察图②中的c细胞，则只需向左方移动装片即可

C．若图③是在显微镜下观察细胞质流动，发现细胞质的流动方向是顺时针，则实际上细胞质的流动方向是逆时针

D．若图④是在显微镜目镜为10×，物镜为10×下观察的，视野中被相连的64个分生组织细胞所充满，目镜不变，物镜换成40×时，则视野中可检测到分生组织细胞数为4个

7 . THP9基因是野生玉米中控制高蛋白含量的优良基因，研究者利用基因工程技术将THP9基因转到玉米细胞内，从而获得转基因高蛋白玉米新品种。已知图中THP9基因转录的方向为从左往右。下列相关叙述正确的是（　　）

EcoRⅠ	BamHⅠ	KpnⅠ	MfeⅠ	HindⅢ

A．若采用PCR技术对一个THP9基因进行扩增，则复制n代共需要引物2n-1个

B．构建基因表达载体时，用Mfe Ⅰ、Hind Ⅲ切割质粒，用EcoR Ⅰ、Hind Ⅲ切割目的基因

C．利用PCR技术扩增THP9基因时应选择引物1和引物4，子链的5＇端向3＇延伸与TaqDNA聚合酶的作用有关

D．PCR过程中用到了缓冲液，缓冲液中一般要添加Mg2+用于激活RNA聚合酶

8 . 下列有关DNA的粗提取与鉴定的叙述，错误的是（　　）

A．以香蕉、人成熟的红细胞为实验材料也可以取得较好的实验效果

B．DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精，从而可以进一步纯化DNA

C．预冷的酒精可以有效降低DNA酶活性，保证DNA的有效提取

D．溶解在2mol/LNaCl溶液的DNA，加入二苯胺试剂后在沸水浴条件下呈蓝色

9 . 某性别决定为XY型的昆虫灰体和黑体、红眼和白眼分别由等位基因A（a）和B（b）控制，已知体色基因位于常染色体上。为研究其遗传机制，进行了两组杂交实验，结果见下表：

杂交编号及亲本	子代表型及比例
Ⅰ（红眼♀×红眼♂）	F1	红眼：白眼=2：1
Ⅱ（灰体红眼♀×灰体白眼）	F1	3灰体红眼：1黑体红眼：3灰体白眼：1黑体白眼

回答下列问题：
(1)依据杂交Ⅰ实验结果，可以确定______为显性性状。但无法确定等位基因是位于常染色体上，还是X染色体上。若要判断基因的位置，还需要统计子一代眼色与性别的关系。
①若______，则基因位于常染色体上。
②若______，则基因位于X染色体上。
杂交Ⅰ子代红眼与白眼的比例不为3：1的原因是____________。
(2)若眼色基因位于X染色体上，则杂交Ⅱ中亲本基因型为______。若F₁灰体红眼雌雄个体随机交配，产生的F₂有______种表型，F₂中灰体红眼个体所占的比例为______。

10 . 如图表示赫尔希和蔡斯T2噬菌体侵染大肠杆菌实验的部分步骤。下列有关叙述正确的是（       ）

A．培养瓶甲中的大肠杆菌可以是肺炎双球菌

B．用含35S的培养基直接培养T2噬菌体，就可获得蛋白质被35S标记的T2噬菌体

C．用35S标记的噬菌体进行实验时，若②过程搅拌不充分，上清液中放射性会偏高子代噬菌体

D．用32P标记的噬菌体进行实验时，若①过程保温时间过短会导致上清液中放射性增强