1 . 灵芝是一种真菌（见图1），生长缓慢，其中的药用成分灵芝酸（A）具有抗癌作用。为提高A的产量，科研人员进行了系列探索。

(1)传统获得A的方式是从灵芝子实体和孢子中直接提取。近年来，利用菌丝体发酵生产A被广泛应用，其优势包括___。

A．缩短生产周期

B．提高A的产量

C．无需提纯处理

(2)科研人员改进了全程振荡培养菌丝的方法，将锥形瓶中振荡培养2天的培养液倒入培养皿中静置培养14天，检测发现静置培养时A 的含量显著高于全程振荡培养；进行显微观察，结果如图2。

①振荡培养2天后，不在锥形瓶中继续静置培养，而是分装到多个培养皿中静置培养的原因是___。
②结合图2结果推测，A的合成与细胞___密切相关。
(3)在静置培养基中添加（Ca²⁺能进一步提高A产量，为验证Ca²⁺通过C酶促进A的合成。请选择以下材料设计实验补充证据（预期结果用“+”的量代表“A”的量）。
a.C酶   b.C酶抑制剂   c.CaCl₂溶液   d.无菌水

组别	菌种	实验处理	检测指标	预期结果
1组	野生型菌株	①___	A含量	②___
2组		d		++
3组		③___		④___
4组		⑤___		⑥___

(4)经进一步研究，科研人员构建Ca²⁺促进A合成的机制，如图3。Cr可入核与F、S、L酶基因的启动子结合调控其表达，图4显示，在不同培养条件下，检测A合成途径中相关酶基因的表达。综合以上研究，评价构建图3中调控和代谢途径的证据是否充分___。

2 . CD87是一种癌细胞膜上的受体蛋白，与癌细胞的转移和增殖有关。研发针对CD87的抗体类药物能提高癌症的治愈率。
(1)单克隆抗体制备过程如图1所示：
   
细胞①表示小鼠的____细胞，使用HAT培养基筛选获取杂交瘤细胞的原理是____；获取杂交瘤细胞后，需在全营养培养基中培养一段时间，目的是____。采用____法获取单细胞，并培养形成克隆。通过筛选的杂交瘤细胞可通过注入小鼠腹腔或在培养液中进行扩大培养并不断产生单克隆抗体。
(2)双特异性抗体是指同时具有两种抗原结合位点的人造抗体，研究人员利用基因工程和发酵工程技术制备具有CD3和CD87结合位点的双特异性抗体（见图2）。
   
备注：CD3是T细胞表面特异性抗原，在所有T细胞膜上均有表达。该抗原被激活后，能极大促进T细胞的免疫效力
①设计目的基因序列：通过查阅基因数据库，获得CD3和CD87蛋白对应的碱基序列和氨基酸序列，为使两种抗体蛋白能结合形成有功能的抗体，利用计算机辅助设计技术，设计改造蛋白质的____，推测其可能的氨基酸序列和碱基序列。
②获取目的基因：利用____获取目的基因后，通过PCR扩增，采用的引物如图3所示。
   
③构建重组质粒：选用含LacO位点的质粒作为载体。LacO位点常与阻遏蛋白结合，阻止RNA聚合酶的移动，环境中的乳糖能解除阻遏蛋白的作用。将目的基因与质粒连接，形成图4所示的重组质粒。LacO位点的作用是____。
   
④重组质粒的导入和检测：将重组质粒与经低温、低浓度CaCl₂处理的大肠杆菌共培养一段时间，将菌种接种在含四环素的培养基中培养一段时间，获得的大肠杆菌需鉴定是否含有重组质粒，原因是____。提取大肠杆菌总DNA后，根据表中4种限制酶的识别序列，采用____酶进行酶切，电泳后若存在1150bp左右长度的条带，则说明导入了重组质粒。

酶	识别序列
EcorI	5’-G^AATTC-3’
BgIII	5’-A^GATCT-3’
BamHI	5’-G^GATCC-3’
XhoI	5’-C^TCGAG-3’
备注：“^”表示酶切位点

⑤双特异性抗体的生产：将筛选出的大肠杆菌扩大培养后，接种在发酵罐中进行大规模发酵。生产过程中需要持续检测的指标是____（写出3个）。
(3)相对于单克隆抗体，图示双特异性抗体在治疗癌症时的效果更好，推测原因是____。

3 . 发酵工程已渗透到几乎所有工农业领域，为人们解决粮食、保护环境等问题作出了重大贡献。下列说法错误的是（       ）

A．果醋、腐乳的制作过程中，往往会在产品表面形成菌膜，而在溶液内部不能形成菌膜

B．酿酒酵母的最适生长温度约为30℃

C．泡菜的制作过程中，亚硝酸盐的含量先上升后下降

D．发酵工程的废弃物易处理，且对环境污染小

4 . 传统发酵技术给我们的生活增加了丰富的色彩，发酵工程在食品、医药和农牧业等领域得到了广泛应用。有关两者的比较，错误的是（　　）

选项	比较项目	传统发酵技术	发酵工程
A	规模	通常为家庭、作坊式生产	工业化的大规模生产
B	菌种	天然的混合菌种	选育的单一优良菌种
C	发酵形式	固体、半固体为主	液体、半固体为主
D	产量品质	品质更高，更符合食品安全标准	发酵时间更短，产量更高

A．A

B．B

C．C

D．D

5 . 回答下列（一）、（二）小题：
（一）利用玉米秸秆转化为绿色能源酒精，不仅可以低成本缓解能源危机、减少环境污染，而且是实现可持续发展战略的基本保障，具体的工艺流程如图。

(1)步骤①进行预处理的目的是_____________，容易进行酶解。
(2)已知葡萄糖与蒽酮试剂反应能产生颜色，采用光电比色法测定糖液中葡萄糖浓度，需先将待测样品通过活性炭脱色，其目的是_____________。若测样品时使用的比色杯光面玻璃不干净，与正常标准曲线对照，将导致计算结果_____________（填“偏小”、“偏大”或“无影响”）。
(3)步骤③中将糖液与酵母菌混合置于_____________发酵罐，短时间内酵母菌更多分布在发酵液的_____________部位。待酒精浓度达到11.4%时不再发酵，可在发酵罐上施以负压使酒精挥发，酒精发酵速率将_____________。发酵产物经_____________去杂、蒸馏，可获得纯化的酒精。
(4)酿酒残渣还可作为酿醋原料，这属于农业废弃物的_____________处理。
（二）为推进“抗原筛查、核酸诊断”监测模式，在核酸检测基础上增加抗原检测，科学家设计出一种新冠抗原自检试剂盒，检测原理如图所示。

注：胶体金：一种常用标记，可与蛋白质牢固结合，大量聚集时肉眼可见红色
样品垫：滴加样品的位置
结合垫：预留可移动的胶体金标记的新冠抗体1、胶体金标记的鼠IgG
T线：固定了新冠抗体2
C线：固定了抗鼠IgG抗体
(5)将鼻咽拭子样品加入样品垫，然后加入液体介质，利用_____________方法，溶有样品的液体沿试纸向吸水垫的方向扩散。T线可以通过抗体2结合_____________，使胶体金聚集在T线，显示红色条带。
(6)为获得T线上的抗体，需将_____________注入小鼠体内，取免疫小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，经选择后用96孔板培养和筛选，每个孔中接种_____________个细胞，培养后经抗体检验，再克隆_____________。为提高克隆形成率，可在培养基中加入_____________细胞。
(7)若检测结果为_____________，则说明该样品中没有新冠病毒抗原。

6 . 阅读下列材料，并回答问题：
抗菌肽的来源及其作用机理
   藏猪是我国青藏高原上常年放牧生长的地方品种，在长期严酷的自然环境下，形成了抗寒、抗病、食草、肉香等优良特性，该特性与其肠道中特殊的微生物菌群有关，这些微生物分泌的维生素、多肽、蛋白质等物质，为藏猪肠道提供了优良的微生态环境，有利于预防疾病、促进健康，也为拮抗菌和抗菌物质的筛选提供了来源。
   研究人员以藏猪盲肠内容物作为菌种来源，分离得到若干单菌落，通过观察菌落的形态、大小和颜色，对菌种进行挑选、编号和保存。进而采用牛津杯法从上述菌种中筛选出一株拮抗金黄色葡萄球菌和大肠杆菌活性最强的细菌。经鉴定，该菌株为枯草芽孢杆菌，并命名为TS。牛津杯法是实验室常用的抑菌实验之一，先将牛津杯（圆形小管）竖直立在已经凝固的不含营养物质的琼脂凝胶平板（下层板）上，再向牛津杯周围倒入混有指示菌的培养基（上层板），待培养基完全凝固后用镊子将牛津杯取出，用移液器向牛津杯制造的小孔中分别加入待测菌发酵液和对照液，培养一段时间后，测量小孔周围抑菌圈的大小，可反映出待测菌抑菌活性的大小。
   将TS发酵产生的抑菌活性物质进行分离纯化，得到了一种新型的天然抗菌肽（TP）。有关抗菌肽的作用机理，目前学术界仍然有很大争议，一般认为作用可能包括：摧毁靶标菌的细胞膜，使细胞膜通透性增加，或者形成孔、通道、肽脂复合体，进而引起细胞内成分的外流；也可能进入靶标菌胞内，与其DNA、蛋白质等物质结合，使靶标菌代谢受阻，生长受抑制或直接死亡。研究者检测了大肠杆菌经TP处理后K⁺的释放情况，结果如图1。嗅化乙锭（EtBr）可以嵌入到DNA碱基内部发出荧光，当结合了EtBr的DNA的浓度增加时荧光强度也增加，如果有其他嵌入DNA碱基的物质与EtBr并存，则造成结合的竞争，导致荧光强度减弱。利用这一点，研究者提取大肠杆菌的DNA经EtBr处理后，再加入不同浓度的TP，检测荧光强度，结果如图2。根据检测结果，研究者初步揭示了TP的作用机制。

（1）肠道内的微生物与藏猪存在____________的种间关系。藏猪特有的可拮抗致病菌的微生物是长期严酷环境__________的结果。
（2）从藏猪盲肠内容物分离得到单菌落的过程，可采用________溶解盲肠内容物制成菌液，进而采用__________________法将菌液接种于固体培养基表面。
（3）在牛津杯法抑菌实验中，__________（举2个例子）是需要严格灭菌的。图3是利用牛津杯法筛选出TS时的操作处理，请写出小孔A、B、C、D中应加入的物质及上层板培养基的处理，并预期实验结果___________________。

（4）抗菌肽破坏靶标菌的细胞膜可导致细胞内成分的外流，体现了细胞膜具有_____________的功能；抗菌肽与蛋白质结合会引起靶标菌代谢受阻的原因是__________________。根据实验结果1和2，推测TP的抑菌机制是_____________________。
（5）欲将TP用于畜牧业生产或医学实践，你认为还需要进行哪些方面的检测___________________？