10 . 遗传学技术在突变检出领域中有着重要的贡献与作用。
(1)Muller-5技术常用于果蝇X染色体上突变的检出，已知果蝇棒眼对圆眼为显性，红眼对杏色眼为显性，且控制这两对相对性状的基因皆位于X染色体上。下图为利用Muller-5品系雌果蝇检测基因突变的过程图。不考虑交叉互换。

为检测出果蝇X染色体上是否发生了突变，F₁代需进行_____（填“自由交配”“自交”或“单对交配”）获得F₂代。现有某纯合致死突变基因被检出，则在F₂代中，最好选取性状为_____果蝇进一步研究该突变基因的作用。
(2)PCR扩增法可用于基因点突变的检出，其基本原理是，如果引物的3'端碱基与模板碱基不互补，则用耐热DNA聚合酶无法延伸。已知某变异果蝇品种在Badh2基因的EXON7区出现了一个8bp的碱基对缺失和三个位置的碱基替换（其他序列与野生型一致），为了检测该变异，现设计以下四条引物进行PCR（如图所示）。

除了题干中提到的引物、耐热DNA聚合酶和DNA模板外，PCR反应体系中还需添加_____。若在8bp缺失型的DNA样本中同时加入四条引物进行PCR扩增，实验结束后应使用_____技术对产物进行检测，且理论上可以得到_____种序列不同的DNA片段。
(3)在检出突变基因后，科学家往往利用基因工程的方式获得该基因对应的蛋白质并进行下一步研究。如图为构建重组质粒的流程示意图，在该过程中，应使用_____对质粒S进行酶切。将重组质粒通过转化导入亮氨酸合成缺陷细菌后，应使用_____（填“添加亮氨酸”或“不添加亮氨酸”）的选择培养基，同时挑取_____（填“有绿色荧光”或“没有绿色荧光”）的菌落进行进一步鉴定。