2 . 甲拌磷（3911）是高毒类有机磷农药，在土壤中存活留可达50天左右，我国已禁止在水果蔬菜上使用。下图是从土壤中筛选甲拌磷降解菌XT₂的过程，有关说法错误的是（       ）

A．图中的选择培养基需用干热灭菌法灭菌并以甲拌磷为唯一碳源进行细菌培养

B．在稀释样品接种的培养基培养的同时，需和一个未接种的共同培养在恒温箱中，12h 和 24h后分别进行观察

C．该过程用到的接种方法为稀释涂布平板法

D．若用图中的接种方法进行计数，则计菌数的结果比实际值偏小

3 . 牛奶消毒不过关容易携带细菌。根据国家标准（GB19645—2010），每毫升合格的牛奶细菌总数不能超过50000个。某兴趣小组利用恒温水浴锅对新鲜牛奶进行消毒然后检测消毒的效果，如下图所示。
   
(1)图中步骤①对牛奶的消毒的方法是_____________，一般采用____________对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌。
(2)步骤②将牛奶进行梯度稀释的目的是使聚集在一起的微生物分散，便于能在培养基表面形成______________。步骤③的接种方法是________________。
(3)兴趣小组通过步骤①~③接种了3个平板并将其和1个未接种的平板放入恒温培养箱，在适宜的温度条件下培养48 h，然后统计出4个平板上的菌落数分别是57、53、55和9。根据这样的实验结果_____________（填“能”或“不能”）判断该兴趣小组消毒后的牛奶细菌超标，原因是_______。
(4)如果要检测牛奶中是否含有大肠杆菌，需要在培养基中加入__________（填物质），观察是否出现深紫色的菌落。此培养基按照用途分类属于_______培养基。
(5)某学生想要从土壤里分离出能分解尿素的细菌，需要配置____________的培养基，此培养基按照用途分类属于_______培养基。

4 . 19世纪中期，关系到法国经济命脉的酿造业曾一度遭受毁灭性的打击。在生产过程中，出现了葡萄酒变酸、变味的怪事。经过研究，法国科学家巴斯德发现，导致生产失败的根源在于发酵物中混入了杂菌。由此人们认识到保持培养物纯净的重要性。请回答下列与微生物培养和利用的相关问题：
(1)获得纯净培养物的关键是_____________例如，对培养基进行灭菌的方法是____________。若要检测所倒的平板是否合格,常见的具体操作是_____________。
(2)阅读下列关于能源、环境和农业生产方面的材料，回答相关问题：
材料I：随着能源和环境问题日益严峻，利用纤维素酶降解秸秆生产燃料乙醇，对缓解全球能源危机有着重大意义。科研人员开展筛选、诱变及选育高产纤维素酶菌株的相关研究，过程如下图。请回答：

①从物理状态来看CMC平板属于__________________培养基。诱变选育高产纤维素酶的菌株时，通过向培养基中加入__________________染液筛选出_________________与菌落直径比大的菌落。
材料Ⅱ：尿素是一种重要的农业氮肥、但尿素并不能直接被农作物吸收，只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。某课题小组从土壤中分离能够分解尿素的细菌并进行计数的过程如下图所示。

②土壤中的细菌之所以能将尿素分解，是因为细菌能合成_______，图中培养基应以___________为唯一氮源。据题意，每次为使菌液稀释 10 倍，应加入的无菌水量是_______________mL。某同学用接种了3 个培养皿，一段时间后3 个培养皿中分别长出了54个、46 个、53 个菌落，根据实验结果，该1g 土壤样本中约有分解尿素的细菌___________个。

5 . 东北酸菜是白菜经腌制而成的传统食品。发酵过程中若霉菌等微生物大量繁殖会导致酸菜腐败发臭。研究人员从酸菜中分离出具有抑菌活性的乳酸菌，该类乳酸菌因能分泌新型细菌素（多肽）而具有抑菌活性。为获得细菌素表达量更高的工程菌用于生产，进行了相关研究。回答下列问题。
(1)乳酸菌产生的乳酸能溶解碳酸钙而产生溶钙圈。研究人员为从市售多个品牌的酸菜中分离纯化乳酸菌，配制含有碳酸钙的固体培养基，利用_____法对该培养基进行灭菌，并采用_____法将酸菜液接种到培养基中，选择有溶钙圈的菌落并继续进行纯培养。
(2)通过上述方法筛选得到6种乳酸菌，测得它们对霉菌的抑菌率如下表，应选择乳酸菌编号为_____的菌株进行后续操作。

乳酸菌编号	Ll	L2	L3	L4	L5	L6
抑菌率/%	28．57	19．48	58．44	14．28	6．49	36．36

(3)研究人员从上述乳酸菌中提取细菌素基因，将其导入受体菌，再对受体菌做进一步的检测与鉴定。下面是细菌素基因及构建的基因表达载体的示意图。

①利用PCR技术扩增细菌素基因时，应选择的一对引物是_____。PCR过程中，经过4轮循环，消耗引物的个数是_____。
②若以细菌素基因甲链为转录的模板链，为构建基因表达载体，应在与甲链结合的引物的5＇端加入_____（填“BamH I”或“Nde I”）的识别序列。
③转化操作后提取受体细胞中的DNA，并利用选择的引物进行扩增，再对扩增产物进行电泳检测，结果如下图。

1：DNA标准样 2：普通受体菌的DNA 3：转化操作后受体菌的DNA 4：无菌水

设置4号的目的是_____（答出1点即可），电泳结果表明_____。

6 . 酵母菌的品质影响葡萄酒的产量和质量，研究人员为分离出产酒精能力强的酵母菌菌株，进行了如图I所示实验，甲、乙、丙、丁锥形瓶内分别加入100mL完全培养基，下列说法正确的是（       ）

   

A．传统葡萄酒发酵过程中，为避免污染发酵装置需严格灭菌

B．用稀释涂布平板法计算出葡萄酒过滤液的活菌数为6．8×106个/L，此数值可能高于实际的活菌数

C．对培养基进行灭菌的方法是高压蒸汽灭菌法，菌种接种过程中的试管口、瓶口等无需再灼烧灭菌

D．由图Ⅱ可知，丙可能是培养瓶密封不严导致，丁组酵母菌产酒精能力比乙强

7 . 具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种。图1是工业化生产酵母菌的流程，图2是耐高糖和耐酸特性的酵母菌工业化生产装置示意图。


回答下列问题：
(1)图1中标号①______的操作目的是______；②______常用方法是______。
(2)实验室用高浓度葡萄糖筛选经诱变处理后的野生酵母菌，经多次传代培养以获得目标菌株。纯化菌株时，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的原因是______。培养过程中定期取样进行菌落计数，评估菌株增殖状况。选育出来的菌种具有稳定的______。
(3)图2发酵罐通过传感器监测发酵液酒精浓度、温度、氧气、pH等物质、环境的变化，其中pH需控制在______（填“酸性”或“碱性”）环境下。图中3为搅拌器，可以加快酵母菌繁殖速率，其原理是______。
(4)工业化大规模生产通过发酵罐实现，如发酵产品是为了得到酵母菌，可通过______方法将菌体从培养液中分离出来。若在外界环境条件适宜的情况下，并未产生乙酸的最可能原因是______。

8 . 常乳是母牛泌乳期一周后直到泌乳停止前一周这个时间段内分泌的乳汁。奶牛自身乳房和乳头中可能含有的细菌，加上挤乳过程中产生的少量污染，常乳中会有一定量的细菌存在。研究小组要检测一份常乳样品中细菌的总量（不考虑菌种），检测流程如下图，每个平板上接种菌液量为0.1mL。下列说法不正确的是（       ）

A．倒平板时将培养皿打开一条细缝，不要完全打开，防止杂菌污染

B．上述方法是稀释涂布平板法，培养基要营养全面，适合各种细菌生长

C．也可以通过连续划线的方法接种，通过菌落数计算样品中的细菌总数

D．若三个平板上的菌落平均数为59，则每毫升样品中细菌总数为5.9×107

9 . 某污水处理厂欲处理一批含As^3＋和硝酸盐浓度较高的污水，研究人员通过对肠道微生物的分离与筛选，得到了耐砷的反硝化细菌，它在厌氧条件下能够将硝酸盐还原为N₂O和N₂。分离耐砷的反硝化细菌具体步骤如下：
采集健康人体的新鲜粪便样本。
(1)配制培养基以筛选_______：该培养基中含有适宜浓度的________，从而有利于该菌的生长，抑制其他微生物的生长。此种培养基属于________培养基。
接种：取采集的人体新鲜粪便样品0.3 g，接种至该培养基上。
(2)耐砷反硝化细菌的分离与纯化：取200～300μL上述培养液，均匀地涂布在已经添加了5 mmol/L As^3＋和10 mmol/L NO₃^-的细菌固体培养基上。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是________；涂布完成后，将平板置于温度为________的恒温培养箱中培养24 h。挑取长势比较良好、形态大小不同的菌落利用平板划线法进行分离纯化，用该种方法进行接种时，接种工具是________，该接种工具的灭菌方法是________。操作时，在第二次及其以后的划线时，总是从上一次划线的________开始划线，目的是_______。
对分离纯化后的菌株进行鉴定。
(3)测定菌株在不同砷浓度下的生长、繁殖能力：挑取单菌落加入到液体培养基中进行培养，吸取1 mL菌液离心收集菌体后，分别接种到含有0 mmol/L、1 mmol/L、2 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L As^3＋和10 mmol/L NO₃^-的液体培养基中，测定其OD值(OD值越大，表明菌体数量越多)，并绘制曲线如下图。结合曲线可以得出结论：_______。

10 . 为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行如图A所示的实验。请回答以下相关问题：
   
(1)各种培养基的配方不同，但一般都含有____________等营养物质，配制好的培养基通常使用_______________法灭菌。步骤③与步骤②中培养基成分相比，最大的区别是________。与步骤③培养基相比，步骤④加入了_____________凝固剂。
(2)进行步骤④的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图B所示，该接种方法是__________，出现图B结果可能的操作失误是_______________。
(3)对步骤⑤中某瓶细菌计数的方法有两种，一种方法统计出的菌落数可代表活菌数；另一种方法是______________，该方法需要借助血细胞计数板，但此法得出的结果会偏高，原因是_______________。
(4)步骤⑤后取样测定石油含量的目的是__________。步骤⑤需要振荡培养，原因是_________（答两点）。