17. 研究发现,感染毛霉能诱导脐橙产生具有抗病活性的红色物质(CPRE)。为探究CPRE能否替代化学杀菌剂保护采收后的脐橙,科研人员进行了研究。
(1)据右表配方配制培养基,溶解后分装到锥形瓶中,用
______法灭菌后冷却至50℃左右。分别加入浓度为25、50、100、200μg/mL的CPRE无菌溶液,摇匀备用。以无菌水作为对照。本培养基的氮源来自于
______。
马铃薯培养基配方 |
成分 | 含量 |
马铃薯 | 200g |
葡萄糖 | 20g |
琼脂 | 15-20g |
蒸馏水 | 定容至1000mL |
(2)将含不同浓度CPRE的培养基分别涂于载玻片上凝固后,接种20μL指状青霉孢子悬浮液,在适宜条件下培养一段时间后,用显微镜观察孢子萌发情况。各组萌发率的计算公式为:视野内萌发孢子数/视野内孢子总数×100%;根据萌发率计算实验组的萌发抑制率,计算公式为
______。统计结果表明CPRE能抑制指状青霉孢子萌发,且随浓度的增加抑制效果增强。
(3)将直径0.5cm的指状青霉菌饼反贴在含不同浓度CPRE的培养基上,每个培养皿贴3块,适宜条件下培养,每24h测量菌饼直径(单位:cm),计算平均值。结果见下表。
浓度(μg/ml) 时间 | 0 | 25 | 50 | 100 | 200 |
第1天 | 1.1 | 0.8 | 0.7 | 0.51 | 0.51 |
第2天 | 1.9 | 1.3 | 0.7 | 0.68 | 0.51 |
第3天 | 2.2 | 1.7 | 0.9 | 0.68 | 0.52 |
实验结果说明
______。
(4)为进一步研究CPRE抑制指状青霉的机理,研究者进行了如下检测。
①检测不同浓度CPRE处理,菌丝几丁质(真菌细胞壁的主要成分)含量和胞外AKP酶活性,结果如图。
注:AKP酶(碱性磷酸酶)由细胞合成后分泌到细胞壁与细胞膜的间隙。
图1和图2的结果表明,CPRE改变了细胞壁的结构和功能,判断依据是
__________。
②取指状青霉菌丝用碘化丙啶(与DNA结合产生红色荧光的染料)进行染色。结果为
____________,证明CPRE破坏了细胞膜的完整性。
(5)请结合以上研究分析说明CPRE抵御指状青霉感染的作用机制,并阐述脐橙受到“伤害”时才会启动防御机制的意义
_________。