21. 利用基因工程技术培育出油脂高产的四尾栅藻,是获取生物柴油的新途径。科学家欲从紫苏中提取DGAT1 基因(催化油脂合成的关键酶基因),导入到四尾栅藻细胞,获得转基因油脂高产的四尾栅藻,质粒pCAMBIA 与 PCR 扩增出的 DGATI 酶切位点如图所示。现有 BamHⅠ 、BgI Ⅱ、EcoRⅠ三种限制酶,它们识别并切割的碱基序列如图,分析回答:
BamHI | 5'—G↓GATCC—3 |
BglⅡ | 5'—A↓GATCT—3 |
EcoR I | 5'—G↓AATTC—3 |
(1)从紫苏组织细胞中提取总 RNA 时,需要加入 RNA 酶抑制剂,目的是
_________。过程①需要
_________酶的催化,过程②通过PCR 技术实现,进行 PCR 时,需要在两种引物的
_________端(填 5’或 3’)添加限制酶 BgIⅡ的识别序列。
(2)启动子往往具有物种特异性,在载体 pCAMBIA 质粒中插入紫苏 DGAT1 基因,其上游启动子应选择
_________(填“紫苏”、“大肠杆菌”或“四尾栅藻”)启动子。
(3)用限制酶 BglⅡ切割 DGAT1,用限制酶
_________切割 pCAMBlA,将充分酶切后的产物混合,加入 DNA 连接酶进行连接。若只考虑 DNA片段的两两连接,可得到
_________种大小不同的连接产物。利用连接产物对大肠杆菌实施转化和筛选,筛选出的重组质粒不一定符合要求,原因是
____________________.
(4)为进一步筛选出符合要求的重组质粒,选用限制酶 EcoRⅠ对不同的重组质粒进行酶切处理,得到的电泳结果如图所示,其中
_________组重组质粒为所需质粒。(已知质粒pCAMBIA中EcoRI的酶切位点与BamHⅠ 的酶切位点间的最短距离为600bp)