【推荐1】玉米是世界上的第三大粮食作物，广泛种植于世界各地。研究表明，转基因抗虫玉米中的细菌BT基因能表达一种毒蛋白，这种毒蛋白能有效杀死玉米螟（一种农业害虫）。请回答下列问题：
（1）BT基因在基因工程中称为_________。在基因表达载体中，除了要有BT基因外，还必须有启动子、终止子和______，将BT基因导入玉米细胞常用_________法。
（2）利用PCR技术扩增BT基因时，需要提供模板、原料、______、引物等条件，将模板DNA加热至90〜95℃ 的目的是__________。
（3）BT基因与载体结合过程中需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶。若某限制酶的识别序列和切点是，请画出目的基因被限制酶切割后所形成的黏性末端_______。DNA连接酶对所连接的两端碱基序列__________(填“有”或“没有”）专一性要求，定性地检测BT基因的“表达”产物可采用_____的方法。
（4）为了防止抗虫玉米通过花粉传播带来的生态学问题，科研小组考虑将抗虫基因导入到玉米根尖细胞的__________中以防止基因污染，同时在大规模种植的抗虫玉米田中设置一个或多个避难所种植普通玉米，目的是_______________。

【推荐2】猪圆环病毒（PCV）是一种单股环状DNA病毒，它是迄今发现的最小的动物病毒。现已知PCV有三个血清型，其中猪圆环病毒2型（PCV2）为致病性的病毒，是导致断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）的主要病原体。为检测某猪场病猪是否感染该病毒，实验人员进行了以下操作：①分析PCR扩增结果；②从病猪组织样本中提取DNA；③利用PCR扩增DNA片段；④采集病猪组织样本。请回答下列问题：
(1)实验人员的正确操作顺序是__________（用数字序号和箭头表示）。
(2)操作②中需要用到预冷的酒精溶液（体积分数为_______%）来初步分离DNA与蛋白质，原理是____________________________。DNA能溶于2mol/L的__________溶液，且在一定温度下，DNA遇__________试剂会呈现蓝色。
(3)操作③中PCR反应中每次循环可分为__________三步。耐高温的DNA聚合酶能够从引物的__________端开始连接脱氧核苷酸。
(4)PCR扩增得到的产物常采用__________的方法来进行鉴定，其鉴定结果如下图：

注：M：DNAmarker；1-4：空白对照、阴性对照、阳性对照、样品
据图分析，阴性对照组2表示健康仔猪的DNA，阳性对照组3表示__________。

【推荐3】从自然界中的生物体内分离得到的天然酶，在工业生产环境中催化效率往往较低。科研人员对酶的改造包括理性设计方法和非理性设计方法。
(1)理性设计是通过定点诱变改变蛋白质中的个别氨基酸，以产生更加理想的酶，此项技术称为_____。
(2)非理性设计方法主要通过易错PCR技术实现。易错PCR的原理是利用低保真的TaqDNA聚合酶和改变PCR的反应条件，降低DNA复制的保真度，在新DNA链的合成过程中增加碱基错配，从而使扩增产物出现较多点突变的一种体外诱导DNA序列变异的方法。
①TaqDNA聚合酶与一般DNA聚合酶相比最大的特点是 ________，其某一区域负责将碱基与模板链正确地互补配对，Mn²⁺可以降低这一功能，提高碱基的错配，但非互补的碱基对由于______不易形成，稳定性差，而Mg²⁺可以提高稳定性，易错PCR时应适当_______（填“提高”或“降低”）Mg²⁺浓度。
②易错PCR的反应程序为：95℃5min；95℃30s，55℃30s，72℃1min，30个循环；72℃10min。在循环之前的95℃5min处理为预变性，目的是确保_________；循环中55℃处理的目的是使__________结合；循环之后72℃处理时间延长至10min，有利于增加延伸过程中碱基错配的概率。
③下图是利用易错PCR改造某种天然酶活性的流程示意图。步骤a体现了基因突变具有_______特点，变异类型主要为碱基对的_____。

④步骤b应使受体菌处于______态；步骤c采用_____技术筛选突变酶；步骤d将一轮易错PCR筛选获得的有益突变继续进行新一轮的易错PCR，通过连续易错PCR和筛选，导致酶的_________进化，以获得满足人们需求的产物。

【推荐1】回答下列（一）、（二）小题：
（一）果胶酶广泛应用于果品加工工业，果胶酶活性对加工后成品的影响很大，因此在生产实践中测定果胶酶活性显得尤为重要。
（1）果胶酶在果品加工中的主要作用是榨汁时降低果浆的_________________，提高________________（写出两点）。
（2）黑曲霉、苹果青霉等微生物可用于生产果胶酶，扩大培养菌体的培养基可用添加_________________的豆芽汁配制。
（3）测定果胶酶活性的一种方法是，将水解果胶得到的半乳糖醛酸与3，5-二硝基水杨酸（简称DNS）共热，生成棕红色氨基化合物，然后用__________________法测定。从原理分析，DNS起到________________作用。运用该方法测定果胶酶活性，需要先配置_________________标准溶液用于制作标准曲线。
（4）为提高果胶酶的稳定性，可以将酶用物理或化学方法__________________在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。
（二）中国科学院神经科学研究所利用CRISPR-Cas9基因编辑技术（如图所示）和胚胎工程技术构建了一批敲除关键基因BMALl的生物节律紊乱克隆猴，作为抗失眠治疗研究的动物模型。CRISPR-Cas9基因编辑系统由向导RNA和Cas9蛋白组成，向导RNA识别并结合靶基因DNA，Cas9蛋白切断双链DNA形成两个末端。这两个末端通过“断裂修复”重新连接时通常会有个别碱基对的插入或缺失，从而实现基因敲除。请回答：
（1）基因编辑系统导入猕猴受精卵需要借助_________________技术。向导RNA识别靶基因DNA时遵循________________原则，Cas9蛋白切断靶基因DNA形成的两个末端重新连接时所必需的一种酶是________________。可利用________________技术检测胚胎细胞是否成功敲除了猕猴的BMAL1基因。

（2）利用该技术还可以在染色体DNA上定点插入目的基因，基本过程如下：向细胞内导入基因编辑系统时，同时导入含目的基因的DNA修复模板，修复模板能与切断后形成的末端序列互补配对，并作为合成新链的模板，这样修复后就会在原来DNA上“插入”一个目的基因，此时参与修复的除上述酶以外还有________________酶。
（3）如果对Cas9蛋白进行修饰改变，使它在向导RNA的介导下只能识别结合靶基因的________________部位，但不具备切断DNA的功能，那么就能阻止靶基因开始转录，从而使基因沉默。
（4）这一研究成果表明，我国正式开启了批量标准化构建疾病克隆猴模型的新时代。克隆猴被用于人类遗传学和生理学研究所具有的突出优点是_________________、________________。

【推荐2】组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，主要由血管内皮细胞合成、分泌、不断释放入血液，广泛存在于机体的各种组织内，可在转tPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下：

(1)在构建含有htPA基因的重组质粒过程中，切割质粒DNA的工具酶是限制酶，这类酶能将特定部位的两个核苷酸之间的__________断开。构建重组质粒时，通常使用两种限制酶切割，而不用一种限制酶切割目的是：__________。
(2)构建htPA基因表达载体，表达载体上除了htPA基因片段外，在htPA基因上游还必须拥有的DNA片段是__________，其作用是__________。
(3)要获得转基因羊，还需要将成功表达hLF的乳腺上皮细胞的细胞核移植到羊的__________中，再借助早期胚胎培养和胚胎移植技术孕育出羊羔。胚胎移植程序中要对供、受体母畜进行同期发情处理，目的是__________。
(4)若用分子水平方法判断获得的转基因羊中htPA基因是否成功表达，可检测是否含__________。

【推荐3】加端RCR是使扩增产物的末端加上一段DNA序列的PCR，加端PCR的引物被设计成除与模板配对的那一部分以外再加上若干碱基，以便能使扩增产物的末端加上额外的一段DNA。HPT酶（尿黑酸植基转移酶）是拟南芥中天然维生素E合成途径中的关键酶。为获得高产维生素E的油菜种子，科研工作者将编码HPT酶的HPT1基因转入油菜细胞并获得转基因油菜。请回答下列问题：

(1)研究人员从拟南芥细胞中提取HPT酶的mRNA，利用___酶获得编码HPT酶的cDNA，进而构建特定表达载体。获得的cDNA片段与拟南芥细胞中编码HPT酶的HPT1基因序列不同，原因是cDNA___。
(2)利用获得的cDNA进行加端PCR时，在目的基因的两端添加限制酶识别并切割位点的目的是___。
(3)若HPT1基因已经整合到油菜细胞的基因组中，经检测发现转基因植株产生维生素E能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是___。若利用蛋白质工程对HPT酶进行改造，基本途径是：预期HPT酶的功能→___→___→找到对应的脱氧核苷酸序列。

【推荐2】基因编码具有高度特异性杀虫活性的C蛋白，V基因编码的V蛋白是结构和作用机理不同于C蛋白的杀虫蛋白。利用C-V融合基因和载体（如图），获得具有高抗虫性的转基因玉米。回答下列问题：

(1)作为基因工程的载体需要具备的条件有_____________（答两点）。将C-V融合基因插入T-DNA中，插入不会破坏T-DNA的作用，T-DNA的作用是____________________________________。
(2)一般用相同的限制酶分别切割含C-V融合基因的DNA片段和载体，目的是_________________，然后将切割后的片段拼接起来，需使用____________酶处理。载体中卡那霉素抗性基因作为____________，可将含目的基因的受体细胞筛选出来。
(3)目的基因的检测与鉴定的目的是____________，从个体水平对转基因玉米进行检测与鉴定，具体方法是____________。
(4)利用PCR的方法从提取的DNA中获取目的基因时需要引物，引物的作用是____________。设计引物时还应在引物1和引物2的____________端分别添加____________的识别序列，保证目的基因能与载体相连接。

【推荐3】Anti基因是小型猪器官表面的抗原基因，人工合成的reAnti基因的模板链与Anti基因的模板链互补。科学家利用合成的reAnti基因培育出转基因猪，用于解决人类器官移植后免疫排斥的问题。回答下列问题：
（1）科学家可利用__________技术获取大量reAnti基因。要想成功获取上述转基因猪，需要实施基因工程。基因工程的核心步骤是______________的构建，这一关键操作的目的是：①使目的基因_________________________；②使目的基因能够表达和发挥作用。
（2）通常采用________法将人工合成的reAnti基因导入受体细胞（某种猪的_______）中，然后进行胚胎的早期培养。为了提高胚胎的利用率，可进行胚胎分割操作，在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意将__________均等分割，该部位细胞的发育的趋势是___________________。
（3）转基因猪的细胞核中含有reAnti基因和Anti基因的情况是____________，转基因猪可以用于人类器官移植的原因是__________________。