1 . 微生物驯化是指在微生物培养过程中，逐步加入某种物质，让其逐渐适应，从而得到对此物质高耐受或能降解该物质的微生物。科研人员现采用微生物驯化结合传统接种的方法筛选能高效降解有机磷农药——敌敌畏的微生物，并设计了如下实验流程。请据此回答以下问题：

(1)已知驯化培养基成分为蛋白胨、葡萄糖、氯化钠、磷酸二氢钾、水等，驯化时逐步加入的物质X是____。依照物理性质划分，驯化培养基属于____培养基，其中蛋白胨可提供____（至少答两点）。
(2)用于筛选的样品应来自____的土壤。将驯化后的微生物接种于培养基B的方法为____。
(3)将培养基B中分离得到的单菌落分别接种于以敌敌畏为唯一碳源的培养基C，培养24小时后，通过测定培养基中____，可筛选分解敌敌畏能力较强的微生物。为统计培养基C中的微生物数量，在如图所示的稀释度下涂布了4个平板培养基D，统计菌落数分别为250、247、312、253，测得培养基C中菌落数为1.25×10⁷个/mL，则涂布的菌液Y为____mL。该统计数据往往比活菌的实际数目____（填“多”或“少”），理由是____。

2 . 基因组印记（通过甲基化实现受精卵中来自双亲的两个等位基因一个表达另一个不表达）阻碍了哺乳动物孤雌生殖的实现。某研究团队利用甲基化酶、去甲基化酶和基因编辑技术，改变了小鼠生殖细胞的“基因组印记”，使其“变性”，然后将一个极体注入修饰后的次级卵母细胞（类似受精作用），最终创造出“孤雌生殖”的小鼠。实验过程如下图所示。下列相关叙述正确的是（　　）

A．体外培养卵母细胞时，需将培养皿置于95%氧气和5%二氧化碳的气体环境中进行培养

B．甲基化可能会关闭基因的活性，对某些基因进行去甲基化处理有利于其表达

C．“孤雌小鼠”的诞生过程没有精子参与，其基因型与提供卵母细胞的雌鼠相同

D．移植后的囊胚进一步扩大，会导致滋养层破裂，胚胎从其中伸展出来

3 . XY型性别决定的生物，群体中的性别比例为1：1，原因之一是（       ）

A．雌配子：雄配子=1：1

B．含X染色体的配子：含Y染色体的配子=1：1

C．含X染色体的精子：含Y染色体的精子=1：1

D．含X染色体的卵细胞：含Y染色体的卵细胞=1：1

4 . 四种限制酶的切割位点如图所示，下列叙述错误的是（　　）

   

A．上图中SmaⅠ、EcoRV两种酶切割后的DNA片段不能用E．coliDNA连接酶连接

B．图中SmaⅠ、EcoRV两种酶切割后的DNA片段，可以用T4 DNA连接酶连接

C．DNA连接酶催化目的基因片段与质粒载体片段连接的化学键是磷酸二酯键

D．限制酶能识别特定的核苷酸序列，有专一性，不同的限制酶切割不能产生相同的黏性末端

5 . 自然界的细胞具有统一性，不同细胞又具有多样性。下列有关说法正确的是（       ）

A．根据有无叶绿素可以区分自养生物和异养生物

B．核糖体与线粒体是原核生物与真核生物共有的细胞器

C．人类细胞与鼠细胞融合实验支持了“细胞膜结构具有统一性”的观点

D．不同生物细胞膜的功能复杂程度取决于膜蛋白的数量

6 . 操纵元是原核细胞基因表达调控的一种结构形式，它由启动子（启动基因转录）、结构基因（编码蛋白基因）、终止子（终止转录）等组成。如图表示大肠杆菌细胞中核糖体蛋白（RP）的合成及调控过程，其中序号表示相关生理过程，mRNA上的RBS是核糖体结合位点。下列有关说法正确的是（       ）

A．过程①中RNA聚合酶与启动子结合后相继驱动多个基因的转录

B．过程②中核糖体与mRNA结合后逐一阅读密码，直至终止子结束

C．细胞中缺乏rRNA时，RP1与mRNA上的RBS位点结合阻止翻译的起始

D．该机制保证了rRNA与RP的数量平衡，同时也减少了物质与能量的浪费

7 . 下列与细胞膜的结构和功能有关的叙述，正确的是（       ）

A．与细胞间信息交流有关的信号分子必须与细胞膜表面受体结合，才能完成信息传递过程

B．磷脂分子和部分蛋白质分子是可以运动的，膜流速率可影响到细胞膜组分的更新速度

C．海带细胞通过协助扩散快速地将大量的碘从海水中吸收至细胞内

D．磷脂分子中，由甘油、脂肪酸组成的头部是亲水的，由磷酸组成的尾部是疏水的，对于细胞膜控制物质运输起重要作用

8 . 科研人员构建了可表达H-M3融合蛋白的重组质粒并进行了检测，该质粒的部分结构如图所示，其中M3编码序列表达标签短肽M3。

(1)图中启动子的作用是_____。除图中标出的结构外，作为载体，质粒还需具备的结构有_____（答出两点即可）。构建重组质粒需要使用T4DNA连接酶，下列属于T4DNA连接酶底物的是_____。

(2)为了确定H基因连接到质粒中且插入方向正确，需进行PCR检测，若仅用一对引物，应选择图中的_____，添加引物的原因是_____。PCR是在PCR扩增仪中自动完成的，完成以后常采用_____来鉴定PCR的产物。
(3)图中胰岛素基因以_____链作为模板进行转录。构建基因表达载体时一般至少需要两种限制酶，以防止_____和_____。为使胰岛素基因能够在大肠杆菌中表达出正确的蛋白质，获取目的基因时通常先_____，然后再通过逆转录得到胰岛素基因。
(4)PCR扩增胰岛素基因的前提是_____，以用于特异性制备PCR扩增需要的引物。PCR扩增过程中，经过4轮循环后，得到的产物中只含一种引物的DNA分子占比为_____，n次循环后，至少消耗引物_____个。
(5)若H基因为水母体内的绿色荧光蛋白基因，科研人员将构建的表达载体导入大肠杆菌，结果发现大肠杆菌有的发绿色荧光，有的发黄色荧光，有的不发荧光。将发黄色荧光的大肠杆菌分离纯化后，对H基因进行测序，发现其碱基序列发生改变，将该基因命名为H1基因（黄色荧光蛋白基因）。若要通过基因工程的方法探究H1基因能否在真核细胞中表达，实验思路是_____。

9 . 癌症的免疫疗法是指重新激活抗肿瘤的免疫细胞，进而克服肿瘤的免疫细胞，进而克服肿瘤的免疫逃逸、某些种类癌细胞表面高表达银蛋白PSMA，CD28是T细胞表面受体，T细胞的有效激活依赖于CD28在癌细胞与T细胞结合部位的聚集。科研人员尝试构建双特异性抗体PSMA×CD28的生产流程，如图1所示；双特异性抗体PSMA×CD28的结构及作用机理，如图2所示。

(1)据图1分析，制备双特异性抗体PSMA×CD28的过程中，用到的动物细胞工程技术主要有_____（答出2点即可）。
(2)双特异性抗体PSMA×CD28制备时，应先将_____（物质X）分别注射到小鼠体内再分离出B淋巴细胞。将B淋巴细胞分别与小鼠的骨髓瘤细胞融合，常用的诱导方法有_____（答出2种即可）。将第一次筛选获得的杂交瘤细胞进行多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每孔细胞不超过1个，通过培养让其增殖，然后利用_____原理检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。与传统血清抗体相比，单克隆抗体的优点有_____。体外培养到一定时期的单克隆杂交—杂交瘤细胞因为_____（答出两点）等因素而分裂受阻，需进行传代培养。
(3)抗体都是由两条H链和两条L链组成的4条肽链对称结构。据图2分析，杂交瘤细胞A×B会产生多种抗体，原因是_____。双特异性抗体PSMA×CD28协助杀伤癌细胞的机理是_____。

10 . 细胞核是细胞代谢和遗传的控制中心，下列说法正确的是（       ）

A．癌变细胞的核孔数量多于正常细胞，与其核基因转录较频繁有关

B．在光学显微镜下能观察到细胞核的核膜、核孔和核仁等结构

C．脱氧核糖核酸等大分子物质可以通过核孔进入细胞质

D．细胞核内生命活动所需的能量由细胞核自主提供