29. 为研究干旱胁迫基因LEA和VOC对甘蓝型油菜油脂的积累机制,科研人员构建了两个基因表达载体。其中基因LEA与荧光素酶基因(Luc)构建成基因表达载体甲,基因VOC和标记基因构建成基因表达载体乙,相关序列及酶切位点如图所示。箭头表示转录方向。
(1)利用PCR扩增LEA基因时,需要在引物的
____________(填“3'端”或“5'端”)添加限制酶识别序列,添加序列对应的限制酶是
____________,若产物中除了目的基因外有其他DNA片段存在,从引物角度考虑,原因可能是
___________。
(2)为了构建基因表达载体甲,依据图中已知碱基序列,在PCR扩增仪中加入的引物的碱基序列为5'-
___________-3'和5'
____________-3'。基因表达载体中启动子的作用是
____________。
(3)常用农杆菌转化法将目的基因导入油菜受体细胞,依据农杆菌的侵染特点,目的基因将插入Ti质粒的
_______上,经过转化作用,进入油菜细胞,并将其插入
_____________,从而使其得以维持稳定和表达。
(4)乙酰-CoA羧化酶基因(AC)是油脂合成过程的关键酶基因,甘油三酯酯酶基因(ATGL)是油脂分解过程的关键酶基因。将基因表达载体甲、乙分别导入植物细胞培养成转基因植物A、B,在干旱胁迫的环境下培养两种转基因植物和正常植物,分别检测植物体内AC和ATGL基因的表达水平,结果如下图。
①在分子水平上,用
____________方法检测AC酶和ATGL酶的含量可得到上述表格结果。
②基于以上研究,干旱胁迫基因LEA和VOC在甘蓝型油菜油脂积累中的机制是
___________。