4 . 哈佛大学研究团队开发了一种C-G碱基对转变为T-A碱基对的单碱基编辑工具（简称CBE系统），近年来成为关注的热点。该系统由三个元件构成，其中“dCas9蛋白+脱氨酶”在sgRNA的引导下，对结合区域第4-8位点的碱基C脱氨反应变成U，最终实现C→T的不可逆编辑，不需要DNA链断裂（如图1）。（限制酶识别序列和切割位点如下，XbaI：T^TCGAG   SmaI：CCC^GGG   EcoRI：G^AATTC   SacI：C^TCGAG   HindI：A^AGCTT）

CBE系统的编辑过程
(1)下列关于CBE系统的说法中不正确的是

A．过程①中发生了氢键的断裂和形成

B．过程②中发生了磷酸二酯键的断裂和形成

C．过程③中以B链为模板进行DNA复制形成碱基编辑DNA

D．该系统中单碱基编辑属于基因突变

(2)图中CBE系统与靶DNA结合区域可能存在的碱基互补配对有_______。（序号选填）
①A-T             ②C-T             ③C-U             ④A-U             ⑤U-T             ⑥C-G
(3)根据所学知识分析，CBE系统不可以___

A．提供更多生物进化的原材料

B．改变基因库

C．改变生物进化的方向

D．改变基因频率

某研究发现在二倍体野生草莓和八倍体栽培草莓中，花青素合成过程的关键转录因子之一MYB10基因自然变异导致草莓果实成白色，严重影响营养价值。科学家利用单碱基编辑系统对二倍体野生草莓果实中MYB10基因定点突变，为培育优良草莓品种提供了有价值的候选基因。
(4)已知二倍体野生草莓中MYB10基因编码链第468-488位碱基序列为5’-ACAGGACATGGGACGGATAA-3’为实现该区域编码多肽链中的组氨酸定点突变为酪氨酸，应设计的sgRNA序列是      （组氨酸：CAU、CAC酪氨酸：UAU、UAC）

A．5’-UGUCCUGUACCCUGCCUAUU-3’

B．3’-UGUCCUGUACCCUGCCUAUU-5’

C．5’-ACAGGACAUGGGACGGAUAA-3’

D．3’-ACAGGACAUGGGACGGAUAA-5’

(5)利用图质粒和目的基因构建CBE系统，为高效连接和筛选，结合pHSE401质粒上限制酶识别位点，推测目的基因上游和下游含有的限制酶识别位点组合可以为_________。（序号选填）

图质粒（左）和目的基因（右）
①XbaI和SacI②EcoRI和SacI③XbaI和HindⅢ④SmaI和SacI⑤HindⅢ和EcoRI⑥XbaI和EcoRI
(6)除上述单碱基编辑技术获得定点突变目的基因，还可以采用PCR技术获得单碱基突变基因。你倾向于选择哪种技术获得定点突变基因，并阐述理由_______。

7 . 某科研小组以耐冷基因(C)和抗除草剂基因(B)为目的基因，利用重组PCR 技术构建了 C-B融合基因(C基因位于上游)，制备过程如图1所示，并构建如图2所示的重组质粒，成功培育出既抗除草剂又抗冻的水稻新品种。请回答下列问题：

(1)PCR 依据的生物学原理是_____，循环中耐高温的 DNA 聚合酶的作用是催化_____键的形成。与体内 DNA 复制相比,PCR不具有的特点有_____。
A 边解旋边复制            B. 先解旋后复制                 C. 半保留复制          D. 半不连续复制
(2)PCR1至少需经过_____次循环才可得到图1中①②DNA 片段。为实现 PCR1 和 PCR2产物融合,在设计引物2和引物3时需考虑_____。为保证 PCR3的正常进行，可用于上述融合过程的DNA片段为_____(填序号)。
(3)图2中融合基因在进行表达时，_____会与启动子结合，沿着 DNA 模板链的_____(填“5′→3′”或“3ˊ→5ˊ”)方向移动,催化形成RNA链。
(4)构建重组质粒时，为了验证C-B融合基因已经连接到质粒中且方向正确，可用PCR 技术进行检测，应选择的引物对是_____(选填引物1~5)。