1 . 湖北麻城老米酒具有悠久的历史，以营养丰富、保健养生而著称。回答下列问题：
(1)老米酒是以糯米为原料，经糖化、酒化等过程发酵而来的。糯米需经糖化后才能被酿酒酵母转化成酒精，原因是______________。为监测发酵过程中酵母菌数量的变化，可定期取样，用______________或血细胞计数板法计数。
(2)老米酒中的原儿茶酸（PCA）具有良好抗菌、抗氧化、抗炎症等作用。生成PCA的关键酶是烯酰辅酶A水合酶（ECH）。为进一步研究ECH的结构，研究人员拟将Ech基因载入原核高效表达载体，并将重组质粒转化到大肠杆菌细胞内进行表达，以获得大量的ECH蛋白。

①图1所示的引物1～4中，利用PCR获得Ech基因时应选择的两种引物是______________。   
②Ech基因和表达载体的限制酶切位点如图1、图2所示，相关限制酶的识别序列见表1。为使Ech基因与载体连接并正确表达，在设计PCR引物时需在①所选两种引物的5＇端分别增加限制酶___________的酶切位点，据此分析，两种引物的碱基序列应分别为___________（按5＇→3＇方向）。

EcoR I	EcoRV	Mbo I
Not I	HindIll	sac I

③可将转化后的大肠杆菌接种到含氨苄青霉素、卡那霉素的固体培养基上进行筛选，能在该培养基上形成菌落的大肠杆菌是否一定含有Ech基因?请判断并说明理由_________。

2 . 在“探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化”的实验中，其中某次样品稀释10²倍后，在25×16型血细胞计数板上计数5个中格酵母菌总数为244个，相关叙述正确的是（       ）

A．每天定时从同一试管取样，测定酵母菌细胞数量，绘制种群数量动态变化曲线

B．加样液之前，需对计数室进行镜检，若有污物可用试管刷清洗

C．若一个小格内酵母菌数过多，应稀释到每小格1～2个再计数

D．可估算培养液中酵母菌密度约为1.22×109个/mL

3 . 某同学在“探究培养液中酵母菌种群数量变化”的实验中，可能观察到的细胞分散情况如图所示。下列推断错误的是（　　）

A．影响酵母菌种群增长的因素是葡萄糖有限和试管内空间有限

B．若实验中多次出现图中c的现象，可能是由于样液未充分摇匀或稀释倍数不够

C．本实验不需要设置对照实验，可用台盼蓝染液增加计数结果的有效性

D．若计数板1个大方格中有16个中方格，4个中方格中酵母菌总数为55个，则10mL培养液中酵母菌的数量为2.2×106个

4 . 为了探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化，某兴趣小组按下表完成了有关实验。 将酵母菌接种到装有 10mL 液体培养基的试管中，通气培养并定时取样计数，然后绘制增 长曲线。

试管编号	培养液/mL	无菌水/mL	酵母菌母液/mL	温度/℃
A	10	﹣	0.1	28
B	10	﹣	0.1	5
C	﹣	10	0.1	28

图甲是小组成员用血细胞计数板观察到的培养结果(样液稀释 100 倍，血细胞计数板规格为1mm×1mm×0.1mm) 图乙曲线 a、b 是相同培养条件下两批次酵母菌培养的结果。
(1)该实验的自变量有________、________________。
(2)在取样前应轻轻振荡试管， 目的是_____________________。制片时应该在盖盖玻 片_______(前/后) 滴加样液。
(3)图甲中双边线内 16 个小方格中共有酵母菌 24 个，此时试管中酵母菌数量约为 ＝__________个(写出计算过程)。
(4)根据图乙可知， b 批次的接种量可能_________(高于/低于) a 批次。 t₁ 时， 两批次 培养的 a、b 两个种群的增长速率、种内竞争的强度依次是_________、_________。(填“a ＞b”“a＝b”或“a＜b”)。t₂时两批次发酵液营养物质剩余量较少的是____ ，判断依据 是_________________________________________ 。若在 t₂ 后继续培养，最终发现种群 的数量均会下降，可能的原因是_____________________。

5 . 池塘水中生活着多种浮游动植物，其中大型溞是常见杂食性浮游动物，具有较强的摄食能力，可用于控制水体中藻类的过度增长。为探究大型溞对藻类的影响，某实验室进行了以下相关实验。请据图分析回答：

(1)多次采集池塘水，混匀后分别装入_________塑料桶中，并将塑料桶随机分成 5 组(C₀～C₄组)。向桶中加入大型溞，使其密度依次为 0 只/L、5 只/L、15 只/L、25 只/L、50 只/L。将水桶置于适宜光照下，每三天计数一次，统计每组水样中藻类植物细胞密度，实验结果如图 1。
①实验水样中的所有生物可看作微型_________，输入其中的总能量是_________。
②第 4 天到第 7 天期间，C₀、C₁、C₂组藻类植物细胞数量下降的原因可能有_________。
③研究小组将藻类细胞样液稀释 100 倍，采用血细胞计数板(规格为 1mm×1 mm×0.1 mm)计数，观察到的计数室中藻类细胞分布如下图所示，培养液中藻类细胞的密度是_________。

(2)研究者还统计了各组水体中小型浮游动物的密度变 化，结果如图 2 所示。大型溞与小型浮游动物的种间关系是_________。据此分析图 1 中C₄组对藻类抑制效果反而不如 C₃组的原因是_________。
(3)由上述实验可知，池塘中投放大型溞可用于_____，但需考虑大型溞的投放______等问题。

6 . 生活污水和养殖废水直接影响人们的生活环境，为了解决传统污水处理存在的不足，科研人员利用小球藻进行了相关研究。
(1)从城市周边河流采集水样，进行富集培养。之后将水样接种到____________的平板培养基上，筛选出小球藻单藻落，并进一步纯化得到X、Y、S、L和B五种藻株。
(2)研究人员对奶牛养殖废水沼液进行10倍和5倍稀释，以控制废水中污染物的浓度。将上述5种藻株扩大培养后，分别接种于不同稀释倍数的奶牛养殖废水沼液中，置于光照培养箱中培养，测定培养液中小球藻的数量，结果如下图。

①从培养液中随机取样加入到____________上，然后在显微镜下观察、计数小球藻数量。在取样时为降低实验误差，正确的操作是____________。
②据实验结果推测藻株____________可作为目标藻株，原因是____________。
(3)进一步检测该目标藻株对稀释5倍奶牛养殖废水沼液中总氮、总磷和COD（有机物含量）的去除效果，结果如下表。

天数（d） 检测指标（mg·mL-1）	0	4	8	12	16	20	24	28
总氮	105	100	93	88	50	43	43	43
总磷	47	45	39	30	25	20	20	20
COD	520	520	500	420	420	300	270	270

①结果表明，该藻株在沼液中分别经历了适应期、正常生长期和生停滞期，依据是____________。目标藻株对沼液中____________的去除效果最好。
②解释实验中COD下降的原因____________。
(4)若要将该研究结果应用于养殖污水的处理，为提高处理效果，请提出一个需要进一步研究的问题____________。

7 . 为探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化，某研究性学习小组完成了有关实验：若吸取酵母菌培养液1mL并稀释100倍，采用血细胞计数板（规格为1mm×1mm×0.1mm，由400个小格组成）计数，下图表示一个中方格中酵母菌的分布情况，以该中方格为一个样方，计数结果是酵母菌有多少个？如果计数的中方格中酵母菌平均数为18个，则1mL培养液中酵母菌的总数为多少个（　　）

A．18   2.88×108

B．15   4.5×108

C．16   2.8×108

D．15   2.88×108

8 . 某研究小组对酵母菌进行了相关研究，图1为果酒发酵过程中酵母菌种群数量的变化，图2是图1某时刻台盼蓝染液染色后显微镜视野下计数室局部图像（实心表示染成蓝色），图3为探究酵母菌呼吸方式的装置之一。下列分析正确的是（       ）

A．调查酵母菌种群数量的方法为样方法

B．图1中酵母菌数量达到c时开始产酒，de段数量减少与酒精含量过高有关

C．图2的中方格内酵母菌活菌数与死菌数大致相等，此时对应于图1的cd段

D．酵母菌发酵产酒时，图3装置中红色液滴有可能左移

9 . 啤酒生产需经过制麦、糖化、发酵等主要环节。糖化主要是将麦芽中的淀粉等有机物水解为小分子的过程。主要工艺流程如下图所示，请回答下列问题：

（1）大麦是啤酒发酵的重要碳源，针对制麦及糖化步骤，下列说法正确的有_________（填序号）。
①大麦萌发时仅产生淀粉酶，几乎不产生蛋白酶
②用赤霉素处理大麦，可诱导淀粉酶的合成
③酵母不能直接利用淀粉，需要淀粉酶等将淀粉转化成酵母可利用的糖
④糖化采用的温度越高，淀粉水解速度越快
（2）啤酒发酵时具有活力的酵母需达到一定的数量，故在菌种活化的过程中，需定时取样，检测酵母的生长状况。若某次样品经2次10倍稀释后，经台盼蓝染色（体积不计），在25×16型血细胞计数板上计数_________色细胞，5个中格中的细胞数为244个，该样品中活酵母细胞的密度为_________个细胞/mL。（注:每个小格长1mm，宽1mm，高0．1mm）
（3）敲除酿酒酵母中的蛋白酶基因，减少发酵液中蛋白的水解，有助于增强啤酒泡沫的稳定性，从而改善啤酒的品质。以下是某科研小组的实验：
①已知编码酵母蛋白酶A（PEP4）的基因序列如下（为非模板链）：

Cas9蛋白可在人为设定的RNA序列（gRNA）引导下，在选定位点切断相应的DNA链（如图），在DNA自我连接的修复过程中产生突变。DNA序列中含NGG的位点具有较高的编辑效率（N为任意碱基）。

上述PEP4序列中有________处可作为Cas9的优选剪切位点。Cas9的剪切位点在其NGG识别位点的________________侧。（填“5'”或“3'”）
②用酪蛋白固体培养基筛选突变体，野生型可以水解酪蛋白，在菌落周围形成透明圈。需要筛选透明圈________的菌落，表明其蛋白酶活性__________。

10 . 为研究不同浓度葡萄糖溶液对酵母菌种群数量变化的影响，某研究小组在超净工作台中取10支试管，分别加入10 mL质量分数为2%、4%、6%、8%、10%葡萄糖溶液，每个浓度设两个重复组。棉塞封口，在28℃恒温培养箱中培养，其他实验条件均相同，定时用血细胞计数板计数。结果如图1请回答下列问题：

（1）血细胞计数板是一种常用于计数细菌、酵母菌等微生物数量的生物学工具。下列关于血细胞计数板及其使用的说法，正确的有_________（在a~d中选择填空）。
a. 血细胞计数板是一块特制的载玻片，其上有2个计数室
b. 制片时应先将盖玻片放在计数室上，再用吸管滴加样液
c. 滴加培养液后，用滤纸在血细胞计数板一侧边缘吸引进行引流
d. 待酵母菌菌体沉降到计数室底部后立即在高倍镜下观察、计数
（2）0~168 h内，2%葡萄糖溶液中酵母菌种群增长呈_________型。0~48 h内，随葡萄糖溶液浓度升高，酵母菌种群增长率加快，说明此阶段酵母菌种群增长的限制因素为_________。
（3）实验结果显示，10%葡萄糖溶液中种群数量最大值小于其他组，并且其数量下降先于其他组，最可能的原因是10%葡萄糖溶液组_________（在a~d中选择填空）。
a.糖类物质供应不足     b.培养温度明显升高        c.培养液pH明显增大       d.乙醇的产量和产生速率最高
（4）在以上实验的基础上，该研究小组继续研究了马铃薯培养液对酵母菌种群数量变化的影响，得到如图2所示的实验结果。

①图1、图2结果表明，与葡萄糖溶液相比，马铃薯培养液中酵母菌种群增长率和种群数量最大值都明显_________，但变化趋势基本一致。
②一次取样后，将样液稀释10倍，采用图3中血细胞计数板计数，在显微镜下观察到图4所示的现象（“○”表示酵母菌

对图4的中方格中酵母菌计数时，最佳计数路径是_________（在a~d中选择填空）。若以图4的计数结果作为应计数的5个中方格的平均值，则此样液中酵母菌的密度是_________个/mL。