1 . 为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行图A所示的实验。同学甲进行步骤④的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图B所示。同学乙也按照同学甲的接种方法进行了步骤④的操作：将1mL样品稀释100倍，在5个培养基平板上分别接入0.1mL稀释液，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，无菌落产生。回答下列问题：

(1)步骤②要在液体培养基中进行，原因是________________________。步骤③和④所用的培养基既有相同点也有不同点，相同点是__________________，不同点是__________________。
(2)步骤④所用的接种方法除了图中所示的方法外，还有______，这两种方法中可以用于对细菌进行计数的是______。样品稀释倍数如果太低，对选择目的菌的影响是________________________。
(3)出现B中结果可能的原因不可能是制作的平板被污染，判断的理由是____________，则可能的原因是________________________。
(4)能否根据乙同学的实验结果进行计算？______，原因是________________________。

2 . 反刍动物，如牛和羊，具有特殊的器官——瘤胃。在瘤胃中生活着多种微生物，其中许多微生物能分解尿素。某研究小组欲从瘤胃内筛选出能高效降解尿素的细菌，设计了如下实验。请分析并回答下列问题：
实验步骤：
Ⅰ．取样：从刚宰杀的牛的瘤胃中取样，将样品装入事先灭过菌的锥形瓶中。
Ⅱ．培养基的配制和灭菌。
①配制全营养LB固体培养基，配方：水、蛋白胨、酵母提取物、NaCl、琼脂（一种凝固剂）。
②配制尿素固体培养基，配方：水、葡萄糖、NaCl、K₂HPO₄、尿素、琼脂。
Ⅲ．制备瘤胃稀释液并接种，如图所示。
Ⅳ．在适宜件（瘤胃pH5.5~7.5）下进行微生物的培养、观察与计数。

(1)配制尿素固体培养基时，只添加尿素为微生物提供氮源的目的是_____。制备的培养基应用_____灭菌。实验步骤Ⅳ中，结合瘤胃中微生物环境，除考虑培养基pH以外，还应为微生物提供_____条件。
(2)图中将5g内容物加入_____mL无菌水制成稀释10倍的滤液，并继续进行_____稀释。该小组采用稀释涂布平板法对瘤胃中分解尿素的细菌进行分离和计数。在无菌条件下，利用稀释涂布平板法进行分离，需要用到图乙中的实验器材有_____（填序号）。该方法统计获得的菌落数往往比实际的活菌数_____，原因是_____。
(3)为了判断尿素培养基是否具有选择作用，实验时还需要同时接种全营养平板，如果同一浓度梯度下，尿素培养基上的菌落数_____（填“大于”“等于”或“小于”）全营养培养基上的菌落数，则说明尿素培养基具有选择作用。经过适宜条件下培养后，可通过观察菌落的哪些特征对微生物进行初步鉴定：_____（答出2点即可）。

3 . 黑枸杞具有治疗心热病及心脏病、降低胆固醇、兴奋大脑神经、增强免疫功能等效果。请据图回答下列关于利用黑枸杞制作果酒和果醋的问题：

   

(1)制作果酒时可选用图I的装置，为适当提高果酒的生产速率，进气口应___________；排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连，这样做的原因是___________。
(2)若是从混杂的微生物中分离酵母菌应使用___________（功能）培养基，从微生物培养的角度分析，黑枸杞果汁能够为酵母菌的生长提供水和___________。黑枸杞果汁发酵后是否有酒精产生，可以用___________来检验。
(3)图Ⅱ乙过程中使用的微生物主要是___________，若从食醋中分离纯化该菌种，常用的接种方法是___________。当___________充足时，该菌将黑枸杞果汁中的糖分解成乙酸。

4 . 从自然界筛选嗜盐菌（好氧型）的一般步骤是：采集菌样→富集培养→纯种分离→计数及性能测定。如图I所示是其中的一个环节，图Ⅱ所示是某培养基中部分菌落，其中白色部分为抑菌圈，黑点代表大小不同的菌落。下列相关叙述正确的是（　　）

A．富集培养可以在固体培养基中进行

B．图I所示的接种方法也适合用于对细菌进行计数

C．图Ⅱ中的嗜盐菌抑制效果最好的是乙

D．图I和图Ⅱ中的培养基分别属于选择培养基和鉴别培养基

5 . 异丁醇具有燃值高、能量密度高等优点，其开发和利用对优化我国能源结构和保护环境有非常重要的意义。科研人员构建了一种表达载体pUC18（如图1）导入酵母菌，用于过量表达ILV2、ILV5、ILV3、AR010基因，以期实现大规模生产异丁醇。图2是酵母细胞中葡萄糖代谢产生异丁醇、乙醇和乙酸的示意图，其中基因ADHs和ALDs分别控制E酶和F酶的合成。回答下列问题：
      
(1)将基因ILV2、ILV5、ILV3和AR010依次插入到质粒上的目的基因插入位点，选用高表达启动子pTEF1和____________作为调控序列。pTEF1是_____________识别并结合的位点。
(2)科研人员先将pUC18转化到大肠杆菌细胞中，以便筛选、保存和扩增重组质粒。重组质粒上的____________（填“真核”或“原核”）生物复制原点使pUC18能在大肠杆菌中扩增。已知氨苄青霉素抑制细菌细胞壁的合成，pUC18中氨苄青霉素抗性基因的作用是____________。
(3)提取完整的重组pUC18并导入组氨酸缺陷型酿酒酵母细胞中，将菌株接种在培养基中以获得单菌落，该过程称为微生物的_____________培养。除必要的营养物质外，该选择培养基中需要添加的物质是____________。
A．组氨酸                    B．氨苄青霉素                    C．琼脂
(4)根据图示酵母细胞葡萄糖的代谢途径，为了进一步提高异丁醇的产量，应对基因____________进行改造使其表达产物减少。

6 . 某种新型病毒的A蛋白能与人体细胞的受体结合后使病毒能侵入细胞内部。抗A蛋白的单克隆抗体可阻断病毒的黏附或入侵。如图为筛选、制备抗A蛋白单克隆抗体的示意图。据图回答下列问题：

(1)过程①给小鼠注射新型病毒、该处理的目的是__________。
(2)过程②后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有__________，体系中出现多种类型细胞的原因是__________。
(3)过程③采用的培养基从功能上划分属于___________，在该培养基中只有杂交瘤细胞能够生存。经过这次筛选后，获得的杂交瘤细胞仍有多种，还需进行___________，经多次筛选后，才能获得足够数量的能分泌抗A蛋白抗体的细胞。

7 . 利用生物法来降低环境中的石油污染，具有投资少、能耗低、运行费用少、无二次污染、操作简单及除油率较高的优点。能分解怪类的假单孢杆菌是催化土壤或水体中石油降解的关键菌种。从自然界获取的菌样中筛选理想生产菌种的一般步骤为采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。下图表示用富集方法从土壤中分离石油降解菌的过程。据图回答下列问题：

(1)②过程的目的是_____。
(2)③过程所用的培养基，使用前首先要对其进行______。③过程的培养基中的唯一碳源是______，该过程可采用_______法将初筛菌液接种在固体培养基上。
(3)由⑤和⑥的实验检测结果，可以说明______。
(4)若用此方法从土壤中分离自生固氮菌，则配制的培养基中所需的基本营养物质有_____；某同学发现将混有自生固氮菌和酵母菌的培养液接种到该培养基中，只分离得到纯度较高的自生固氮菌，原因是___。

8 . 回答下列与传统发酵技术有关的问题：
(1)用带盖的瓶子制作葡萄酒时，为排出CO₂，需每隔一段时间拧松瓶盖一次，但不能完全打开，否则可能导致的结果是__________（答出1点即可）。酒精发酵完成后，不会直接进行醋酸发酵，其原因是酒精发酵和醋酸发酵所需__________（答出2点即可）不同。
(2)某同学用变质的苹果为实验材料筛选醋酸菌，纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，醋酸菌产生的醋酸能溶解培养基中的碳酸钙。推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有__________和__________。
(3)该同学用上述培养基筛选得到几株有透明圈的菌落（如图所示），图中产醋酸能力最强的菌株是__________（填序号）；可进一步根据图中菌落的形状、大小、颜色等特征来区分不同种的微生物，原因是__________。

9 . 黄曲霉素（C₁₇H₁₂O₆）是黄曲霉菌的次级代谢产物，具有极强致癌性。研究人员利用黄曲霉素筛选出能高效降解黄曲霉素的菌株，部分实验过程如下图所示。

回答下列问题。
(1)研究人员常从霉变的花生、玉米中采样，原因是______。
(2)将1号培养基置于摇床上振荡，其目的是______（答一点）；2号培养基应以______为唯一碳源。
(3)利用2号培养基计数，实验结果一般比实际活菌数______，原因是______。
(4)分离出的降解菌能合成某种酶从而降解黄曲霉素，这种酶可能在细胞内起作用，也可能分泌到细胞外起作用，研究人员将降解菌的培养液进行离心，取适量上清液加入到一定量的黄曲霉素溶液中，一段时间后，黄曲霉素的残留量明显降低，说明该酶可在______起作用。科学家将分离出的该酶分子固定于磁性纳米粒子上制成生物酶传感器，该传感器在检测黄曲霉素的同时还可______。

10 . 利用农作物秸秆通过纤维素分解菌发酵来获取生产酒精的原料，是获取清洁再生能源的有效途径。研究者从牛的瘤胃中筛选出纤维素分解菌，其筛选过程如图所示。刚果红能与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈。据图回答下列问题：

(1)从牛的瘤胃中筛选纤维素分解菌的原因是_______。
(2)培养基的配方中一般都含有___，培养基通常采用___灭菌。图中所示培养基是以___为唯一碳源的培养基， 这种培养基称为_____。I号培养基中加入刚果红的目的是___。
(3)Ⅱ号培养基划线过程中接种针至少灼烧_______次。