1 . 请回答下列“生物技术实践”的相关问题
（一）关于细菌的培养，请回答：
（1）在细菌培养时，培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是_________（填“蛋白胨”“葡萄糖或NaNO₃”）。通常，制备培养基时要根据所培养微生物的不同来调节培养基的pH，其原因是___________。
（2）用平板培养细菌时一般需要将平板____________（填“倒置”或“正置”）。
（3）有些使用后的培养基在丢弃前需要经过____________处理，这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。
（二）为获取可降解高盐度工业废水中有机物的耐盐菌，研究人员进行了如下实验：
①制备含3%NaCl的固体培养基，以及含3%、5%和7%NaC1以高盐度工业废水中有机物为碳源的液体培养基；
②将高盐度废水采用平板划线法接种于3%NaCl的固体培养基上，如图一。然后置于适宜条件下培养一段时间，观察形成的菌落特征；
③将分离纯化后的菌株接种到固体斜面培养基上，适宜条件下培养适当时间，将试管置于4℃冰箱中保藏待用；
④取固体斜面上的菌株制成菌液，取等量菌液，分别加入到步骤①中制备的3组液体培养基中摇床培养35小时，定时取样统计活菌数目。测定结果如图二所示。

回答下列问题：
（1）配制培养基时，灭菌、添加NaCl溶液和调节pH的先后顺序是__________________。
（2）步骤②平板划线操作过程中，第一次划线前灼烧接种环的目的是防止杂菌污染，第二次及之后的几次划线前灼烧接种环的目的是______________。完成图一所示操作，至少需要灼烧接种环_________次。
（3）步骤④中常采用______________法统计活菌数目。直接从静置的培养液中取样计数的做法是错误的，正确的操作是___________________________。若每种浓度设3个重复实验，每次统计活菌数目时，需要从_________个培养瓶中取样。
（4）由图二可知，该耐盐菌最适合处理含_________（浓度）NaCl的废水。用该耐盐菌处理较高盐度工业废水时，需要__________________（合理措施），才能达到理想效果。
（三）多种微生物在中国的传统发酵技术中得到利用，请回答下列问题
（1）制作果酒、果醋的两类微生物分别是______________和______________。果醋制作过程中菌种的呼吸方式是______________。
（2）乳酸菌常用于泡菜的制作，腌制泡菜过程中亚硝酸盐含量的变化是____________。亚硝酸盐可与对氨基苯磺酸发生____________反应，这一产物再与N-1-萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物，可用_____________法定量。
（四）为获得果胶酶，科研人员进行了下列果胶酶高产菌株的分离、筛选、鉴定及果胶酶在生产上的应用试验。
（1）为分离产生果胶酶的某种霉菌，科研人员配制了如表所示成分的培养基，该表中应加入的成分a是_____________，该成分在培养基中的作用为___________；在各种成分溶解配制好后应将pH调到_____________，再进行高压蒸汽灭菌。

成分	K2HPO4	MgSO4	NaNO3	FeSO4	a	琼脂	蒸馏水
质量	0.1g	0.5g	3g	0.01g	2g	15g	加至1L

（2）将获得的菌株进行扩大培养后，再用____________工具从滤液中获得粗提的果胶酶。如要检测获得的果胶酶活性，可先将等量的果胶酶和果胶混合处理适宜时间，再加入等量的____________，最后根据沉淀物的生成量来判断。
（3）在果汁和果酒制作过程中，常用果胶酶处理来提高相应产品的____________；生产上通过明胶、海藻酸钠包埋剂或戊二醛交联剂等对果胶酶进行____________处理，以减少酶的使用量，降低生产成本。

2 . 回答下列问题(一)、（二）
（一）回答与微生物发酵有关的问题：糖化酶，又称葡萄糖淀粉酶，它能把淀粉从非还原性末端水解α-1,4-糖苷键产生葡萄糖,也能缓慢水解α-1,6-糖苷键，转化为葡萄糖。多应用于酒精、淀粉糖、味精、抗菌素、 柠檬酸、啤酒等工业生产。糖化酶是由某菌种经深层发酵提炼而成。
（1）要获得高产糖化酶菌株，需要从含____________土壤中采集样品，制备成菌悬液，采用__________法在以____________为唯一碳源的培养基上对菌株进行初步筛选得到单菌落。此操作需要在________进行。
（2）若要选出透明圈直径与菌落直径比值大的高产菌株，还需要通过紫外线进行诱变处理，在诱变过程中要确定诱变的适当剂量，如________（写出1点即可）。
（3）镇江香（陈）醋主要采用糯米为主料，精选优良菌种，经过淀粉糖化、酒精发酵和醋酸发酵三个主要过程酿造而成的色、香、味俱佳的酿造陈醋。陈醋在生产中往往先进行酒精发酵的原因是_______。醋的风味与酿制过程中发酵的温度和时间、______等有关（写出任意两点）。
（二）回答与植物克隆有关的问题：玉米A具有高产、抗病等优良性状，为使其获得抗除草剂性状，操作流程如下图，其中人为整合上去的报告基因可在筛选检测目的基因是否导入起作用。回答下列有关问题。

（1）Ti质粒上的报告基因在农杆菌内不能获得相应的蛋白质产物，在受体植物细胞中则可以，可能的原因是_______。步骤①中为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用2种限制酶，选择的原则________
①质粒内，每种限制酶只有一个切割位点
②酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同
③G基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点
④酶切后，G基因形成的两个黏性末端序列不相同
A．①③          B．①④          C．②③          D．②④
（2）农杆菌感染愈伤组织时，T－DNA携带的G基因易转移到受体细胞____上，然后除尽农杆菌，再使用含________的培养基得到植株B。整个过程中影响玉米愈伤组织能否成功再生植株的原因除了环境因素和培养基的成分之外，还可能有______（答出两点即可）。
（3）上图操作流程的玉米幼胚到植株B的过程中，不同培养基的区别主要在于植物生长调节剂的浓度不同，过程④⑤分别选择_______、_______（填下表中的培养基类型甲或乙），写出表中“……＂处的信息____

3 . 回答下列（一）、（二）小题：
（一）橙子富含丰富的维生素、柠檬酸和抗坏血酸等物质，鲜果和橙子加工品都深受消费者喜爱。回答下列问题：
（1）变质的橙皮表面会变绿并发软，因为表面长出了青霉菌落，青霉菌会产生_________使橙皮软化，因此要对此青霉菌进行分离纯化，可以选用以_________为唯一碳源的培养基。
（2）利用橙瓤制作橙子酒的过程：橙子去皮→橙瓤榨汁→接种→酒精发酵→橙子酒，接种时用的干酵母需用温水和_________活化。当发酵瓶中_________，即表示发酵完毕。
（3）橙瓤榨汁也可以直接用于橙子醋的制作，因为在_________和糖源充足的条件下，醋酸菌能将糖类氧化成醋酸。在生产过程中，发酵瓶中加入的果汁浓度不能过高，原因是_________。
（4）橙子中的柠檬苦素是引起果汁产生苦味的主要原因，利用球形节杆菌产生的柠檬酶处理可消除苦味。某生物实验小组将柠檬酶与海藻酸钠混合后，滴加到一定浓度的氯化钙溶液中，使液滴形成凝胶固体小球，该固定化酶的方法称为_________。工业生产中，若要将酶固定化，一般不适宜采用该方法，原因是_________。
（二）核酸检测作为确诊新型冠状病毒肺炎的金标准，写入了国家卫健委颁布的诊疗指南里，但依然出现了少数“假阴性”病例，此时采用免疫检测则可以很大程度上避免核酸检测的“假阴性”。请回答下列问题：
（1）开发核酸检测试剂盒，需要先分离毒株、获得完整基因组序列信息、设计特异性引物和探针的核苷酸序列，再据此用_________方法直接人工合成特异性引物和探针。
（2）我国研发的新型冠状病毒核酸快速检测试剂盒的检测原理是：若送检样本中存在病毒，则以病毒RNA为模板，在_________酶的作用下合成cDNA，再加入互补的荧光探针、2种引物、_________种脱氧核苷酸和耐热的__________________酶后，cDNA开始扩增，子链延伸至探针处，会水解探针释放出荧光基团产生荧光，荧光监测系统接收到荧光信号从而确诊。
（3）我国新型冠状病毒化学发光检测试剂盒采用的是免疫检测，其中的单克隆抗体是由经病毒抗原蛋白兔疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合制备的_________细胞产生的，该细胞在体外条件下做大规模培养时，为防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害，应采取的措施是__________________。要获得能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞至少要进行_________次筛选。该试剂盒能快速确诊病例，这是因为单克隆抗体具有_________等优点。

4 . 【加试题】回答下列（一）、（二）小题。
(一）某研究小组欲用苹果汁为原料，利用发酵瓶制作果酒和果醋，请分析回答：
(1)将苹果汁放入发酵瓶，要预留约_________的空间。为得到酒精和糖含量较高的果酒，可在果汁中加入一定比例的_______。若发酵瓶内持续无气泡产生，则需加入更多的________，使发酵作用尽快发生。
(2)变酸的果酒表面有一层醋杆菌形成的菌膜，若要在该菌膜中筛选高表达量的醋杆菌菌株，可通过获得________的方法来分离筛选。若要统计获得菌种的数目，则常采用__________法。对获得的优质醋杆菌菌种常用划线法接种在固体培养基_______上低温保存。
(3)下图是果酒和果醋的发酵装置，关于果醋发酵叙述错误的是________

A.发酵前，瓶内酒—水混合物的pH需调至7.0
B.发酵过程中，充气口要适时适量充气
C.发酵过程中，排气口排出醋酸发酵产生的CO₂
D.发酵完成后，出料口的pH值不再减少
(二）请回答杂交瘤技术和单克隆抗体制备的有关问题。
(1)杂交瘤技术制备单克隆抗体时，利用一定的物质，如生物诱导剂______作介导，使经免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出融合的细胞再进行细胞的_______培养，获得纯系细胞，同时还要进行____检验，以保证获得的是所需的特定杂交瘤细胞。
(2)获得杂交瘤细胞后，在体外培养时需要特别加入的天然成分是___________。
(3)有关杂交瘤细胞体外培养的叙述，正确的是_________
A.用固体培养基培养                 B.用滋养层细胞支持生长
C.能进行传代培养                    D.需要对细胞进行研磨破碎获得产物
(4)现在欲利用基因工程技术生产单克隆抗体，科研小组将与抗体形成有关的关键基因通过噬菌体导入到受体细胞，该技术的核心步骤是_________,噬菌体是这些关键基因的____________。

5 . I、橘子富含丰富的维生素、柠檬酸和抗坏血酸等物质，鲜果和橘子加工品都深受消费者喜爱。回答下列问题：
（1）变质的橘皮表面会变绿并软化，因为表面长出了青霉菌落，若要对青霉进行分离纯化，可以选用以____________为唯一碳源的培养基，该物质是由____________聚合而成的一种高分子化合物。
（2）利用橘瓤制作橘子酒的过程：橘子去皮→橘瓤榨汁→接种一酒精发酵→橘子酒，接种的是用__________活化的干酵母。
（3）橘瓤榨汁也可以直接用于橘子醋的制作，因为在____________（2点）充足的条件下，醋酸菌能将糖类氧化成醋酸。利用固定化细胞技术发酵效率更高，因为与固定化酶技术相比，该技术对酶活性影响更小，原因是____________。在生产过程中，发酵瓶中加入的果汁浓度不能过高，原因是____________。
（4）橘子中的柠檬苦素是引起果汁产生苦味的主要原因，利用球形节杆菌产生的柠檬酶处理可消除苦味。某生物实验小组将柠檬酶与海藻酸钠混合后，滴加到一定浓度的氯化钙溶液中，使液滴形成凝胶固体小球，该固定化酶的方法称为____________。工业生产中，若要将酶固定化，一般不适宜采用该方法，原因是____________。
Ⅱ、回答下列与家蚕养殖有关的生态工程与基因工程的问题：
（1）南方养蚕，常建立桑基鱼塘。下列关于桑基鱼塘生态工程的叙述，错误的是__________
A．运用了“能量多级利用，物质循环再生”的生态学原理
B．人为增加了能量流通环节，提高了营养级间的能量传递效率
C．充分利用了生产者——桑所固定的太阳能
D．其中运用的主要技术是物质良性循环技术
（2）通过桑基鱼塘等朴素的生态工程实践，可归纳出的生态工程原理是____________。
（3）丝素蛋白是家蚕的一种分泌性复合蛋白，由丝素蛋白重链（FibH）、丝素蛋白轻链（Fibl）和P25糖蛋白组成。下图是构建并筛选含Fib1基的基因工程大肠杆菌的过程。请回答：

①构建重组质粒时要用到的工具是______________。
②导入时，为了增加大肠杆菌细胞壁的通透性，常用__________处理大肠杆菌。
③图中“导入”环节的操作是：将有关酶处理的目的基因、载体与大肠杆菌受体细胞混合培养。之后将混合培养的大肠杆菌，接种到含氨苄青霉素的培养基上培养，目的是_________。作为本次基因工程的受体大肠杆菌应该______（“含”；“不含”）质粒A。
④影印接种就是用丝绒做成与平板大小相近的印章，然后把长有菌落的母平板倒置在丝绒印章上，轻轻印一下，再把此印章在新的培养基平板上轻轻印一下，然后在恒温培养箱中进行培养，培养结果如上图。推测含有目的基因的工程菌菌落是____________（用字母表示）。

7 . 阅读下列材料，完成下面小题。
仙居杨梅除直接食用，还可用于酿酒。智慧的劳动人民利用发酵工程技术，利用发酵罐（如图），大规模生产杨梅酒，使仙居杨梅的价值翻了一番。发酵型杨梅酒的工艺流程依次包括挑选杨梅、清洗、打浆、糖酸调整、加入酵母菌、倒罐、发酵、除酸、过滤、澄清、杀菌、陈酿、成品等。

1．下列关于杨梅酒发酵叙述正确的是（       ）

A．图中2为杨梅酒出口，通过检测流出发酵液糖的浓度，决定何时终止发酵

B．图中3为叶轮，可以加快酵母菌的繁殖

C．采用真空发酵技术不能提高酒精发酵速率

D．夏季高温会促进发酵菌种的繁殖，大量获得发酵产物

2．某同学采用塑料瓶等自制简易杨梅醋发酵装置，下列叙述错误的是（       ）

A．可以采用杨梅酒为原料

B．保持通气，在发酵液表面会形成菌膜

C．发酵过程中，醋酸菌的生长繁殖和代谢产物的形成都与pH有关

D．吸取发酵液，在显微镜下观察可看到菌落

8 . 变酸的酒表面有一层膜、泡菜坛表面有一层白膜、腐乳外面有一层致密的皮，它们分别是（       ）

A．醋酸菌、乳酸菌、毛霉菌丝

B．醋酸菌、毛霉菌丝、毛霉菌丝

C．醋酸菌、酵母菌、毛霉菌丝

D．酵母菌、醋酸菌、乳酸菌

9 . （一）天津独流老醋历史悠久、独具风味，其生产工艺流程如下图：

(1)糖化阶段是在____________和温度较高的条件下进行的，这一过程可由酒曲中的黑曲霉来完成，下列适于黑曲每扩大培养的培养基是____________（A．LB培养基B．尿素固体培养基C．MS培养基D．添加蔗糖的豆芽汁培养基）。
(2)酒精发酵时，进行定期搅拌，其原因主要是____________。发酵完毕后过滤除去渣，并用手挤压滤渣的目的是____________。
(3)醋酸发酵时，发酵设备的控制系统需感应____________（填两个）等理化性质的变化，以监测发酵进程。与固定化酶相比，固定化醋杆菌需_____________等条件（填两个）。
(4)发酵后的残渣需要灭菌后才能放置于垃圾桶，这属于垃圾的____________处理。
（二）研究发现人溶菌酶（hLZ）是天然抗生素替代品。科学家培育出转入溶菌酶基因山羊，以大规模生产人溶菌酶（从乳汁中提取）。过程如图所示。其中编号①~⑨表示过程;质粒S中的基因Len通过控制相关酶的合成而控制亮氨酸的合成（亮氨酸是山羊细胞维持生命活动必不可少的一种必需氨基酸），基因GFP控制合成绿色荧光蛋白。四种限制性核酸内切酶的识别序列及切割位点见下表。请回答下列问题：

限制酶	BamHI	BglⅡ	HindⅢ	XbaI
识别序列和切割位点	G↓GATCC	A↓GATCT	A↓AGCTT	T↓CTAGA

(5)过程②需要的限制性核酸内切酶是_____________在③中，B与切割后的质粒S用DNA连接酶连接，在两个片段相邻处形成______________，获得重组质粒T。
(6)为成功筛选出含重组质粒T的成纤维细胞。质粒S中用作标记基因的是_____________。为达到筛选目的，培养基的营养成分中特殊之处是_____________。若用PCR检测目的基因是否成功导入受体细胞中，实验组以待测的样本DNA为模板，使用目的基因的特异性引物进行PCR扩增，同时将以目的基因片段为模板的组别作为阳性对照组，将以_____________为模板的组别作为阴性对照组。
(7)过程⑧中_____________（填“需要”或“不需要”）添加胚胎成纤维细胞，图中早期胚胎的_____________（填结构）将发育成完整转基因羊个体。培育出的山羊可从乳汁中获得基因表达产物，但是与膀胱生物反应器相比，它还是受到了转基因动物的_____________（答出2点）的限制。

10 . 回答下列（一）、（二）小题
（一）分析以下在食品工业中有关制作果汁、利用果汁酿制果酒、果醋相关工艺及原理的内容：
（1）为提高果汁出汁率和降低浊度，可在榨汁时加入果胶酶和________酶以分解果胶，这些酶可通过培养________等微生物菌体中提取。
（2）在果酒酿造过程中，为促进酵母菌大量繁殖，需先往发酵罐中通入________，然后密闭，有利于获得更多的酒精产物。由于果汁无法高温灭菌，往往含有醋杆菌，但在酿酒时醋杆菌往往不会大量繁殖，主要原因是：________。
（3）要测定果酒中酒精含量，需先将澄清果酒用活性炭处理，目的是________：然后利用重铬酸钾和酒精显色成灰绿色，根据下图的吸收光谱，可用特定量的酒精和重铬酸钾反应，选择波长________nm光的来测定________，通过和标准曲线对照，获得酒精含量。

（4）果酒制果醋时，发酵罐内先填充经________处理的木材刨花，后加入醋杆菌和________。
（二）回答与基因工程和植物克隆有关的问题：
（1）将野外采集的某植物叶片经消毒处理后，去除下表皮，再将其置于经_________处理的较高渗透压的混合酶液中以获得原生质体，去除下表皮的目的是使酶液________，保证酶解充分。植物原生质体的获取过程中一般使用________（填“相同”或“不同"）浓度的甘露醇溶液。
（2）为培育抗虫的转基因植物，将含抗虫基因的DNA和质粒用________酶处理后形成重组质粒，将重组质粒导入上述植物原生质体。原生质体培养过程中，原先________形的原生质体再生细胞壁后形状会明显改变，在液体培养基适宜环境的诱导下分化为________，最后再生出完整的植株。
（3）为了检测抗虫基因是否存在于该转基因植物的不同组织细胞中，某同学用PCR方法进行鉴定。在鉴定时应分别以该植物不同组织细胞中的________作为PCR模板。
A．mRNAB．总RNAC．DNAD．mRNA或DNA