1 . 紫杉醇是目前最好的抗肿瘤药物之一，但其药源植物红豆杉十分稀缺。利用红豆杉细胞培养生产紫杉醇是解决紫杉醇药源紧缺问题的有效途径之一。回答下列问题：
(1)紫杉醇是红豆杉体内的一种___代谢产物，该物质不是生物生长所必需的。
(2)红豆杉外植体经___获得愈伤组织，再将愈伤组织移至___培养基大量培养。但紫杉醇本身是抑制细胞生长的毒性物质，在培养基中的积累量越多，对细胞增殖的抑制越强，为了减弱其抑制作用，可采取的措施有___（答出1点即可）。
(3)为提高紫杉醇产量，研究人员构建紫杉醇合成关键酶基因（Bapt基因）的超表达载体，并将其导入红豆杉细胞，其具体流程如下：

   

①Bapt基因的获取：提取红豆杉的mRNA，并通过___得到其cDNA，利用PCR技术以图甲中的cDNA片段为模板扩增Bapt基因，需要的引物有___（从A、B、C、D四种引物中选择）。上述过程中，用1个图甲所示片段产生2个双链等长的子代Bapt基因片段至少要经过___次循环。
②构建Bapt基因的超表达载体并将其导入受体细胞：在构建过程中，所用DNA片段和Ti质粒的酶切位点（注：图中所示限制酶切割后形成的黏性末端各不相同）如图乙所示。强启动子能被___识别并结合，驱动基因持续转录。Ti质粒中的T-DNA在培育转基因红豆杉中的作用是___。为使DNA片段能定向插入T-DNA中，可用PCR技术在DNA片段的两端添加限制酶识别序列，M、N端添加的序列所对应的限制酶分别是___。
③Bapt基因的检测和鉴定：可通过DNA分子杂交技术检测红豆杉细胞中___（填“Bapt基因”或“强启动子”）的有无，从而确定超表达载体是否导入。为检验最终的实验目的是否达到，还应检测红豆杉细胞培养物中的___。

2 . 医学研究发现紫杉醇能有效治疗某些癌症。获得紫杉醇的传统方法是从红豆杉属植物的树皮中提取，但产量有限，也不利于濒危的红豆杉的保护。研究发现，红豆杉的其他组织细胞也能生产紫杉醇，有人尝试用细胞工程技术生产。下图为三种红豆杉细胞培养过程中细胞数量与紫杉醇产量的数据图。下列说法中，正确的是（     ）

A．培养后期紫杉醇产量出现下降的原因可能是种内斗争比较激烈的结果

B．将红豆杉细胞经组织培养形成胚状体方可接种到培养基中

C．在培养过程中，要不断通入空气并进行搅拌

D．利用植物组织培养技术生产紫杉醇，具有产量高、节约资源、保护环境等优点

3 . 花粉植株是体细胞遗传研究和突变育种的理想材料。下面是培育四季柑桔(2N=18)花粉植株的过程示意图，有关叙述错误的是

A．花粉植株培育的原理是花粉粒细胞具有全能性，其技术是植物组织培养

B．过程③是细胞再分化，其根本原因是基因选择性表达

C．四种培养基均属于固体培养基，其中所含植物激素的种类和比例有差异

D．观察处于分裂中期的四季柑桔花粉植株根尖细胞，可观察到18条染色体

4 . 常规种植的棉花（陆地棉）含有棉酚，棉酚主要分布在茎、叶、苞片、铃壳及种子里的许多黑色细小的腺体中。棉酚具有一定毒性，为培育棉酚含量低且品质好的棉花杂种植株，科研人员将某种棉酚含量低的野生棉（2n=2X=26）与品质好的陆地棉（2n=4X=52）进行了不对称体细胞杂交。
(1)科研人员首先制备了野生棉和陆地棉的悬浮细胞，用_______________酶分别处理，各自获得有活力的原生质体。
(2)用一定剂量的紫外线处理野生棉原生质体，破坏部分染色体。用流式细胞仪测定上述各种原生质体细胞的DNA含量，结果如图1所示。未经处理的野生棉、紫外线处理后的野生棉、陆地棉细胞的检测结果依次为图中_______________（选填图1中字母）。

(3)将紫外线处理后的野生棉原生质体与陆地棉原生质体用化学诱导剂_______________诱导融合，形成的融合细胞经过_______________再生，成为完整细胞，进而分裂和脱分化形成_______________组织，经过_______________形成完整的再生植株。
(4)科研人员选取再生植株及双亲的根尖进行解离、_______________、_______________后压片并制成临时装片，显微镜下对_______________期的细胞进行观察，比较染色体的形态和数目，分析再生植株的染色体变异类型。
(5)用特定的方法对陆地棉和野生棉基因组DNA进行扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种植株的鉴定。图2是用同样的方法对双亲及再生植株1～6进行扩增的结果。据图特定条带判断，再生植株1～6中确定为杂种植株的有_______________。

(6)对杂种植株可通过观察_______________，筛选出低酚的杂种植物。

5 . 回答下列（一） （二）小题；
（一）酵母菌不仅应用于各种酒类的酿造和面包的制作，而且因富含各种营养物质，可以食用和药用，也可作为饲料及微生物的培养基成分。在利用酵母菌进行酿酒时，若要获得较高酒精度的酿造酒，需要含糖分较高的发酵基质，因此选育耐高糖酵母菌在实际生产过程中具有重要意义。
回答下列与培育耐高糖酵母菌有关的问题。
（1）出发菌株（用来育种处理的起始菌株）的获得：一般从_____
A．腐烂水果堆放处周围       B．肉类加工厂周围       C．生活污水池周围 D．养猪场周围获得土样，用无菌水稀释，备用。
（2）出发菌株的分离与诱变：利用_____将菌液涂布到平面培养基上，分离得到酵母菌株，并接种到液体培养基中进行扩大培养，再用紫外线和亚硝酸钠处理菌液，紫外线的作用是_____；其中扩大培养时需要振荡，目的是_____。
（3）耐糖酵母菌的筛选和检测：
诱变处理的酵母菌等量接种于装有含有_____ 酵母菌培养液的营养瓶中，设计多个重复，每天测量发酵瓶重量，并记录每日失重情况，6天后结束实验，计算总重量。选择失重情况作为检测指标的依据是_____。除了通过失重情况外还可测量_____（答2点即可）确定酵母菌的发酵能力。
显微镜下观察到高糖培养液中能正常发酵的酵母菌大小和形态与低糖培养液中的酵母菌基本一致，说明耐高糖酵母菌能通过_____适应高糖培养基。
（二）科学家将马铃薯胰蛋白酶抑制剂基因（Pin-Ⅱ）通过农杆菌导入杨树细胞，培育成了抗虫杨树。图中Ap^r表示氨苄青霉素抗性基因，Ne^r表示新霉素抗性基因，箭头表示识别序列完全不同的4种限制酶的酶切位点。回答下列问题；
（1）过程①应该选择_____（限制酶）作用于含目的基因的 DNA 和Ti质粒。
（2）Ti质粒是基因工程中常用的运载体，农杆菌上Ti质粒上T-DNA区段的作用是_____。②过程完成后，为使CaCl₂处理过的农杆菌恢复正常状态，可加入_____。
（3）过程③之前需要对农杆菌进行筛选，可以利用下述_____
A．只用含氨苄青霉素的培养基B．只用含新霉素的培养基C．先用含氨苄青霉素的培养基，再用含新霉素的培养基D．先用含新霉素的培养基，再用含氨苄青霉素的培养基
培养基筛选出含重组Ti质粒的农杆菌，还可以采用_____方法鉴定重组 DNA分子是否导入到农杆菌。被侵染的愈伤组织需要_____后再进行培养，否则最终得到的抗虫植株容易长瘤。
（4）通过调节营养物质和植物生长调节剂的适当配比，可以诱导愈伤组织再生出抗虫杨树。若愈伤组织中缺乏_____将无法再生形成植株。图中培育抗虫杨树新品种的整个过程就是_____技术。

6 . 回答下列（一）、（二）小题：
（一）泡菜是我国的传统食品之一，但制作过程中产生的亚硝酸盐对人体健康有潜在危害。研究发现，有的乳酸菌含高效率的亚硝酸还原酶（NiRs）,能催化亚硝酸盐降解为NO和NH3。
（1）泡菜制作过程产生的亚硝酸盐主要来自某些杂菌对植物细胞中______的还原所得。为了筛选NiRs 高产菌，科研人员在LB固体培养基中添加了______，把相应菌液稀释后涂布接种在平板上，培养24小时后测量______的大小来确定，经扩增培养后还要进行______、耐适度高温等特性鉴定，才可用于生产应用。
（2）通过光电比色法测定并比较“优选”乳酸菌与普通菌株的优势时，若普通菌株泡菜样液OD值不在标准曲线范围时，应采取的解决措施是______。生产上影响泡菜中亚硝酸盐含量的因素除了菌种类型外还有______等（答出两点即可）。
（3）科研人员尝试提取亚硝酸还原酶，利用一定的方法将其固定在______的介质上，成为固定化酶后用于泡菜的“绿色减毒”处理，为确保亚硝酸还原酶的“减毒”效果，在固定化酶处理泡菜的生产过程中尤其要注意保持发酵环境的______条件。
（二）目前国内对水稻不同品种开展了基因工程、组织培养、体细胞杂交等系列育种和栽培研究，请回答下列问题：
（1）科学家把抗盐碱基因 TPSP导入水稻，培育高产的“海水稻”，为使TPSP 基因高效表达，需要对重组载体上目的基因相关的______序列进行修饰；重组载体上缺少标记基因时，可利用______技术对目的基因是否成功导入受体细胞进行高精度的检测。
（2）当籼稻愈伤组织在只含有细胞分裂素的培养基上培养时，出现具有分生能力的绿色芽点，但继续出芽，通常在培养基中添加______，以促进幼苗形成，这是形成植株幼苗的______途径。
（3）系列研究过程中用显微镜可以观察到的现象是______（填序号）。
①绿色芽点细胞排列松散
②刚融合的籼稻和稗草杂交细胞发生质壁分离
③绿色芽点细胞中有叶绿体
④愈伤组织细胞的细胞核大、液泡小
（4）除体细胞杂交之外，让籼稻和稗草在试管内受精，出现胚发育障碍时可进行______，以解决远缘杂交的不亲和性。
（5）胚乳（3n）由一个精子与两个极核（与卵细胞同源）受精发育而成，若用籼稻种子的胚乳诱导愈伤组织，培育三倍体，需适时除胚，以免因胚对营养的吸收影响愈伤组织细胞的____________，还可避免再生苗中混有__________________。

7 . 回答下列（一）、（二）小题：
（一）回答与微生物培养及应用有关的问题：
（1）在利用微生物时，为消除污染杂菌，通用的方法是______。培养微生物时需要对各种用具进行灭菌，置于超净台上的用具可利用____灭菌30分钟。
（2）米酒酿造过程中，常利用黑曲霉使淀粉糖化，原因是黑曲霉能分泌α-淀粉酶、β淀粉酶及____酶，可以将淀粉分解为葡萄糖。黑曲霉使米饭中淀粉糖化所需的发酵条件是___ （A.有氧和较高温度   B.有氧和较低温度   C.无氧和较高温度   D.无氧和较低温度）。
（3）尿素固体培养基可用于分离产______的细菌，尿素分解为氨后被细菌吸收可用于合成_______________（答出2点即可）。
（4）以稀释的果酒为原料发酵制作果醋，果醋中醋酸浓度一般不超过5%。其主要原因是当发酵液中的醋酸浓度接近5%时_______，不能继续生成醋酸。果醋发酵完毕后可以在发酵液中加入一定浓度的食盐并密封，目的是__________，以免醋酸进一步氧化分解。
（二）回答与利用生物技术培育抗盐品种有关的问题：
（1）为获得大量抗盐基因，可将其连接到质粒上，通过大肠杆菌培养扩增，原因是质粒具有_______________的特点。
（2）用两种不同的限制性核酸内切酶切割目的基因，再用这两种酶切割农杆菌的Ti质粒，可以防止_______，从而提高目的基因和质粒重组的成功率。用DNA连接酶连接目的基因和Ti质粒时，应适当降低温度，原因是温度较低有利于_________，使不同DNA分子片段更容易连接在一起。
（3）将重组质粒通过农杆菌转化法导入植物细胞，可取植物叶片经______后，剪成小片作为转基因的受体材料。之所以不用完整的叶片，一方面是由伤口有利于_______，再者伤口也有利于组织培养时_________的形成。
（4）抗盐品种的培养不一定需要基因工程技术，也可利用______技术，在培养基中加入不同浓度的NaCl，诱发和筛选_______。

8 . 研究者以拟南芥根段作为组织培养材料，探讨了激素诱导愈伤组织分化生芽的机制。
（1）离体的拟南芥根段在适宜条件下可以培育出完整的植株，说明植物细胞具有______。在组织培养过程中，根段细胞经过_____ 形成愈伤组织，此后调整培养基中细胞分裂素（CK）与生长素的比例可诱导愈伤组织分化。
（2）在愈伤组织生芽过程中，CK通过ARRs（A）基因和WUS（W）基因起作用。为探讨A基因与W基因的关系，将A基因功能缺失突变体（突变体a）和野生型的愈伤组织分别置于CK与生长素比例高的（高CK）培养基中诱导生芽，在此过程中测定W基因的表达量。图1中，野生型的W基因表达量与高CK诱导时间的关系是______。分析图1结果可得出的结论是：在高CK诱导下A基因促进W基因表达。得出结论的依据为：与野生型相比 ______。

（3）用转基因方法在上述突变体a中过量表达W基因，获得材料甲。将材料甲、突变体a和野生型三组愈伤组织在高CK培养基中培养，三组愈伤组织分化生芽的比例如图2，由此能得出的结论包括__________________。
A. A基因在愈伤组织分化生芽的过程中起作用
B. W基因的表达产物调控A基因的表达
C. 缺失A基因时W基因表达不能促进生芽
D. 过量表达W基因可使生芽时间提前
（4）YUCs（Y）基因编码生长素合成途径中的一种关键酶。研究发现，在高CK诱导条件下，突变体a中Y基因的表达量明显高于野生型。依据此发现和上述所有实验结果，完善在生芽过程中有关基因和植物激素的相互关系模式图。请在方框中选填“A基因”“W基因”“Y”基因，在（     ）中选填“＋”“－”（＋表示促进，－表示抑制）______。

9 . 无子西瓜的培育过程如下列简图所示：

根据上述图解，结合你学过的生物学知识，判断下列叙述正确的是

A．用此方法培育无子西瓜的原理和获得无子番茄的原理是一致的

B．图中四倍体植株所结的西瓜，果皮细胞中含有4个染色体组

C．秋水仙素处理二倍体西瓜幼苗的茎尖，主要是抑制有丝分裂过程中纺锤体的形成

D．培育三倍体无子西瓜通常需要年年制种，如果应用现代生物技术可以快速进行无性繁殖

10 . 下图是“白菜一甘蓝”杂种植株的培育过程。下列说法正确的是

A．植物体细胞杂交技术已经能使杂种植物按照人们的需要表现出亲代的优良性状

B．愈伤组织的代谢类型是自养需氧型

C．上述过程中包含着有丝分裂，细胞分化和减数分裂等过程

D．“白菜一甘蓝”杂种植株产生的变异属于染色体变异