35. 血管平滑肌细胞(VSMC)的功能受多种物质影响,与血管健康密切相关。同型半胱氨酸会导致VSMC分化程度降低,功能紊乱。血管保护药物R可改善同型半胱氨酸对VSMC的作用。为验证同型半胱氨酸和血管保护药物R以上的作用,请根据以下提供的材料设计实验,写出实验思路:
材料与用具:培养瓶若干、小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)若干、细胞培养液、同型半胱氨酸溶液、血管保护药物R溶液、生理盐水、显微镜、血细胞计数板、吸光光度计、滴管等。
【要求与说明】分化相关指标为细胞增殖率和细胞粘附率,分化程度越低,细胞粘附率越低。细胞增殖率(%)=(实验组细胞增殖数/对照组细胞增殖数)*100%,细胞粘附率(%)=(实验组细胞光吸收值/对照组细胞光吸收值)*100%,实验思路涉及的主要用具需写出,但具体操作过程不作要求,实验条件适宜。不考虑加入药物后的体积变化等因素。
(1)完善实验思路:
①取若干个培养瓶,分别加入适量且等量的细胞培养液和小鼠血管平滑肌细胞(VSMC),
_________________________________________,同时用吸光光度计测定光吸收值并记录。
②将上述培养瓶随机均分为甲、乙、丙三组,甲组、乙组分别加入
_________________________________,丙组加入等量的生理盐水作为对照。
③将上述培养瓶放相同且适宜的条件下培养。
④
_________________时间,用显微镜和血细胞计数板、吸光光度计等工具检测和记录数据,计算
___________________________________________________。
(2)预测实验结果(在下列坐标系中绘制实验组分化指标随时间变化的示意曲线)
_________________(3)分析讨论
①同型半胱氨酸可引起VSMC功能紊乱的原因是引起细胞内内质网功能紊乱,堆积未折叠蛋白,这些蛋白没有形成正确的
________________,不能行使正常功能。
②实验中每组应设三个重复,其目的是
_______________________________________。