23. 糖化酶是将淀粉转化为葡萄糖的酶,大部分野生酵母菌因缺乏糖化酶基因而不能直接利用淀粉。研究人员将经诱变处理后获取的黑曲霉菌高产糖化酶基因导入毕赤酵母CS115(对氨苄青霉素不敏感)中,构建能直接利用淀粉的工程菌,该过程所用质粒(仅示部分结构)如图所示。质粒的外侧链为a链,内侧链为b链。基因Amp
r转录的模板链属于b链的片段。请回答下列问题。
(1)经诱变获得高产菌株后,获取高产糖化酶基因并对其进行PCR扩增,为了方便切割且能够准确和运载体结合,需要在两种引物的
__________________(5'或3')端连接限制酶
__________________识别的序列。扩增过程中需要
__________________催化。
(2)将高产糖化酶基因表达载体导入毕赤酵母,并且在其细胞内维持稳定和表达的过程称为
____________。高产糖化酶基因表达时,
__________________酶识别启动子并与启动子结合开启转录,其转录时的模板链属于
__________________链的片段。
(3)毕赤酵母GS115是一种组氨酸营养缺陷型微生物,自身不能合成生长必需的组氨酸,因此可利用
__________________的基础培养基(不含淀粉)初步筛选导入高产糖化酶基因表达载体的毕赤酵母GS115,再将筛选出的细胞转接至含
__________________的培养液(含淀粉)中进行发酵产酶性能测定。