23. 酵母菌絮凝是指菌体细胞间通过细胞壁相互粘附、聚集成团的现象。适当提高酵母的絮凝能力,有助于发酵后细胞和产物的分离,节约生产成本。科研人员为研究R基因对酵母菌絮凝性能的影响,用基因工程技术获得了R基因被敲除的酵母菌菌株,主要步骤如图1(G418为一种氨基糖苷类抗生素)。据图回答:
(1)过程①,引物2和引物4分别添加了MluⅠ的识别序列,则引物1和引物3的5'端分别添加
_____的识别序列,PCR获取R基因左右两端的N和C片段过程中,除图中条件外,还需提供
_____等条件(至少写三个)。
(2)利用含
_____的培养基筛选出重组酵母,再挑取单菌落进行PCR扩增,验证酵母细胞R基因是否被敲除,则扩增时选择引物组合是
_____。
(3)科研人员继续将野生酵母菌和R基因敲除酵母菌的菌液接种到装有麦芽汁的锥形瓶中,一定条件下静置发酵7天,测定酒精发酵能力和絮凝能力,结果如下表。
指标种类 | 酒精发酵能力 | 絮凝能力 |
野生酵母菌 | 4.5% | 63.1% |
R基因敲除酵母菌 | 4.5% | 83.1% |
①酒精发酵期间,每个锥形瓶应注意保持
_____条件和定期排气。
②实验结果表明,R基因敲除酵母菌是否符合生产需求?请说出你的判断依据。
_____。
(4)科研人员又将不同浓度梯度的R基因敲除酵母菌菌液和野生酵母菌菌液点样于含30g/mL钙荧光白(细胞壁抑制剂,破坏细胞壁的正常组装)的YPD培养基上,结果如图2.推测R基因敲除酵母菌絮凝能力变化的原因是
_____。