1 . 体细胞核移植已在很多物种中取得成功，但其效率较低，只有不足4%的重构胚能发育成健康的个体，原因可能是胚胎的基因表达异常所致。下图为提高克隆牛重构胚发育的技术流程，其中TSA为组蛋白脱乙酰化酶抑制剂。请回答以下问题：

(1)体外培养牛乳腺细胞会发生接触抑制，需进行_____处理，进而实现传代培养。
(2)采集的卵母细胞需要培养至_____时期，去除的“核”实际上是指_____。除了使用图中的显微操作法去核，还可使用梯度离心、_____和化学物质处理等方法去核。
(3)胚胎移植前需要对代孕母牛进行_____处理。一般选择发育至_____时期的胚胎进行移植。
(4)一次核移植技术后，若需要获得更多克隆小牛，可对早期胚胎进行胚胎分割，操作时要注意_____。

2 . “蓝白斑筛选”是一种基于质粒载体的DNA重组技术，它可通过改变质粒载体中的DNA序列，实现对菌落颜色的调控，如图所示。回答下列问题：

	氨苄青霉素
未导入质粒	×
导入空白质粒	√蓝色菌落
导入重组质粒	√白色菌落

(1)构建重组载体时，应将目的基因插入到质粒的_____之间。将外源DNA片段与质粒连接成重组质粒时，所用的酶催化形成的化学键是_____。试从限制酶的角度提出一条避免载体自身环化的方法：_____。
(2)将重组质粒转入大肠杆菌前，需在低温﹑低浓度的_____溶液中处理大肠杆菌，目的是_____。
(3)在筛选导入重组质粒的大肠杆菌时，培养基中应加入_____。培养一段时间的平板上，含有重组质粒的大肠杆菌菌落呈白色的原因是_____。与“氨苄青霉素”筛选相比，“蓝白斑”筛选的优点是_____。

3 . 为提高作物产量，种植业往往使用大量的氮素化肥，既增加了生产成本，又易造成环境污染。自生固氮菌营独立生活，为改变这种现状带来了希望。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如下图，回答下列问题：

   

(1)土壤是微生物的天然培养基，该培养基能为微生物的提供的营养物质分别是_____。
(2)下表为两种培养基的配方，步骤④应选其中的培养基_____。

培养基类型	培养基组分
培养基甲	甘露醇、、、NaCl、、、蒸馏水
培养基乙	甘露醇、、、NaCl、、、蒸馏水、琼脂

(3)纯化培养时，需同时进行未接种培养基的培养，目的是_____。
(4)④的平板上统计结果数一般用菌落数表示，一般选择数目 30-300在范围的平板上计数。若甲研究员做这个实验，统计的菌落数分别是132、136、128，则每克土壤中含有的固氮菌为_____个，运用这种方法统计的结果往往较实际值_____。原因是_____。除此之外还可以用_____，但运用这种方法统计的结果往往较实际值偏大。
(5)图3是某同学利用不同于图1方法从稀释液中分离菌株的示意图。下列对其操作及结果的叙述不正确的有_____（填字母）。

   

a.操作前用无水乙醇对双手进行消毒处理
b.划线时将沾有菌种的接种环插入培养基
c.只有在5这一区域中才能得到所需菌落
d.整个过程需要对接种环进行6次灼烧

4 . EV71是引发手足口病的一种人肠道病毒。为制备抗EV71的单克隆抗体，科研人员用小鼠进行实验。抗原的选择和制备过程为：将EV71灭活病毒、EV71外壳蛋白VP1和VP2、非EV71蛋白注射到小鼠体内，多次免疫后，取上述各组小鼠的血清和未免疫小鼠血清，测定抗体与抗原的结合强度，结果如下图所示。

(1)EV71免疫的小鼠血清抗体_____（填“是”或“不是”）单一抗体，据图分析判断依据是_____。
(2)制备抗EV71单克隆抗体时，选用_____免疫的小鼠的B细胞效果最佳。单克隆抗体的制备流程图如下：

(3)相比较植物细胞，诱导融合动物细胞特有的方法是_____，融合后将获得_____种细胞（只考虑细胞两两融合的情况）。用选择性培养基对融合后的细胞进行筛选目的是获得_____。将其接种到96孔板，进行_____培养和_____，目的是获得_____。
(4)图中体外的扩大培养，是从_____中获取大量的单克隆抗体。除此之外还可以使用的方法是_____，该单克隆抗体具有的优点是能准确识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性识别，并且可大量制备。

5 . 花椰菜（2n=18，用MM表示）属十字花科，经人工长期定向选育，对黑腐病无抗性。黑芥（2n=16用，NN表示）为花椰菜近缘野生种，对黑腐病等多种常见病害具有抗性。我国科学家将黑芥叶肉原生质体和花椰菜下胚轴原生质体融合，获得了抗黑腐病的杂合新植株（过程如下图）：请回答下列问题：

(1)利用酶解法去除细胞壁获取原生质体，图①表示原生质体融合的过程，融合原理是_____，诱导过程常用的物理方法是_____（两种），融合成功的标志是_____。
(2)图②是图①经脱分化后形成的愈伤组织。由图②经_____过程形成图③，细胞呈现特定的结构和功能，该过程的实质是_____，原理是_____。
(3)给予光照，在培养一定天数后，用显微镜观察细胞中是否存在_____（细胞器），作为早期鉴别杂合细胞的标志，初步筛选出融合细胞。获得的融合细胞染色体组成为_____（用字母M和N表示），染色体数为_____，染色体组数为_____。
(4)请说出鉴定新植株是否抗黑腐病的方法_____。
(5)与传统的有性杂交方法相比，植物体细胞杂交技术的主要优点是_____。

6 . 某性别决定为XY型的昆虫灰体和黑体、红眼和白眼分别由等位基因A（a）和B（b）控制，已知体色基因位于常染色体上。为研究其遗传机制，进行了两组杂交实验，结果见下表：

杂交编号及亲本	子代表型及比例
Ⅰ（红眼♀×红眼♂）	F1	红眼：白眼=2：1
Ⅱ（灰体红眼♀×灰体白眼）	F1	3灰体红眼：1黑体红眼：3灰体白眼：1黑体白眼

回答下列问题：
(1)依据杂交Ⅰ实验结果，可以确定______为显性性状。但无法确定等位基因是位于常染色体上，还是X染色体上。若要判断基因的位置，还需要统计子一代眼色与性别的关系。
①若______，则基因位于常染色体上。
②若______，则基因位于X染色体上。
杂交Ⅰ子代红眼与白眼的比例不为3：1的原因是____________。
(2)若眼色基因位于X染色体上，则杂交Ⅱ中亲本基因型为______。若F₁灰体红眼雌雄个体随机交配，产生的F₂有______种表型，F₂中灰体红眼个体所占的比例为______。

7 . 下图甲表示真核生物细胞中有机物的组成和功能，图乙表示组成细胞内某化合物的单体。回答下列问题：

(1)写出图中横线上相应的元素：①___________，②___________。
(2)动物细胞内，物质E是_______。选用花生种子检测物质F时，检测试剂是________，若不借助显微镜，实验材料的处理为________；若借助显微镜，实验材料的处理为_______。
(3)图乙中，化合物b对应图甲中物质_______(填字母)；若a为核糖，则化合物b构成的大分子物质主要分布于________中。

8 . 下图甲表示某基因型为AaBB的雄性动物细胞处于有丝分裂某个时期的细胞图像，图乙是该动物产生的一个精细胞，图丙表示该动物细胞分裂过程中相关物质的变化。回答下列问题：

(1)该动物初级精母细胞中四分体的数目是___________个；图甲细胞对应图丙的___________段。
(2)图甲细胞中，已知基因A位于染色体1上，则染色体3上所含的基因是___________。图乙所示的精子在其产生过程中染色单体间可能发生了___________；根据染色体的类型，绘出来自同一个次级精母细胞的精子染色体组成图___________。
(3)图丙中，bc段形成的原因是___________；若是雌性动物，在减数分裂过程中对应de段的细胞名称是___________。
(4)若将该生物一个精原细胞放在含有³H标记的胸腺嘧啶脱氧核苷酸的培养基中进行一次有丝分裂，然后在不含放射性标记的培养基中完成减数分裂(不考虑染色体片段互换)，则产生的一个子细胞中被³H标记的脱氧核苷酸单链可能有___________条。

9 . 科研人员将麦胚细胞裂解后，细胞内容物被释放出来，再用RNA水解酶预处理，获得了真核无细胞蛋白质合成体系。向该反应体系中添加所需的原料和能源物质，就能实现细胞外蛋白质的合成。无细胞蛋白质合成体系的构建过程如图所示，已知tRNA和rRNA不易被水解。回答下列问题：

       

(1)裂解麦胚细胞时，可以先用___________(填酶的名称)和果胶酶处理，以去除细胞壁，然后再将细胞置于蒸馏水中。向细胞裂解液中加入RNA水解酶预处理的主要目的是___________。
(2)合成蛋白质时，除了加入模板DNA分子和能源物质外，还需要分别加入___________作为基因表达的原料，另外还可以加入RNA聚合酶，以加快___________的速率。
(3)若向该体系中加入RNA作为模板，以脱氧核苷酸为原料，则该体系模拟的是___________过程，此时还需要加入___________以催化该过程的发生。
(4)向无细胞蛋白质合成体系中加入DNA分子有个别碱基对存在差别时，可能翻译出完全相同的蛋白质，其原因是___________。

10 . “基因编辑婴儿”露露和娜娜的诞生引发了巨大的争议。基因编辑技术能够让人类对目标基因进行“编辑”，实现对基因中特定DNA片段的敲除、加入等。请回答下列有关问题：
(1)露露和娜娜的诞生借助了试管婴儿技术，包括体外受精、早期胚胎培养和胚胎移植等技术。精子需经过______处理才能与发育至______期的卵子结合形成受精卵。
(2)露露和娜娜的CCR5基因中被敲除了32个碱基对，使得T细胞不能正常表达某种膜蛋白，从而使HIV无法识别并攻击T细胞。敲除CCR5基因中32个碱基对，类似于______酶的作用，敲除后产生的DNA片段末端通常有两种形式即______，并通过______酶连接起来。
(3)基因编辑技术引起的变异属于______。