1 . 为确定某致病细菌对不同抗生素的敏感性，研究人员设置了四组实验：分别将含有A、B、C、D四种抗生素（含量相同）的滤纸片均匀置于同一平板上的不同位置，放在培养箱中培养一定时间后，观察其透明圈的大小，实验结果如下表。回答下列问题：

实验组别	抗生素种类	实验结果
1	A	滤纸片周围出现透明圈
2	B	滤纸片周围没有出现透明圈
3	C	滤纸片周围的透明圈比含A的小
4	D	滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落

(1)在微生物培养过程中，获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染，用平板培养细菌时一般需要将平板倒置，其原因是__________.
(2)实验需使用涂布器接种，接种前涂布器的灭菌方法为__________。该实验中，宜使用__________方法接种细菌，在培养和接种细菌时要特别注意进行无菌操作。
(3)根据实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素种类为__________；在排除杂菌污染的情况下，第4组实验说明细菌对抗生素D产生了__________。
(4)该实验还缺少一组空白对照，请尝试补充：__________。

2 . 为探究细菌对抗生素的耐药性，某研究小组将含有相同且适宜浓度的青霉素滤纸片I~III分别贴在涂有大肠杆菌的琼脂平板上，对照贴不含青霉素的滤纸片。在适宜条件下培养16小时，结果见图。后续实验选择抑菌圈中合适的菌，多次重复以上过程。关于该实验操作，下列叙述错误的是（       ）

A．测量和记录三个抑菌圈的直径并计算平均值

B．进行后续实验应取抑菌圈边缘的菌作为测试菌

C．随重复实验次数增加，青霉素抑菌的直径变大

D．实验完毕后需将细菌、培养基等材料高温灭菌处理

3 . 某兴趣小组按如图方法对没有加工的鲜奶进行细菌检测。有关叙述正确的是（       ）

   

A．用湿热灭菌法对该实验中的鲜奶进行灭菌

B．若培养基需要调节pH，应该在灭菌后培养基凝固前立即进行

C．若3个培养皿中菌落数为35、33、34，则鲜奶中细菌数为3.4×106个/mL

D．对鲜奶中细菌计数，常采用稀释涂布平板法，统计的结果往往比实际值偏高

4 . 四环素是放线菌产生的一种广谱抗生素，既可以用来进行动物疾病的治疗，还可以作为饲料的添加剂促进动物生长。然而，四环素的化学结构稳定，在动物体内并不能被完全吸收转化，大部分以尿液形式排出体外，易在环境中积累，造成污染。某研究人员欲从养鸡场粪便堆肥中筛选对四环素具有一定降解能力的菌株。回答下列问题：
(1)筛选四环素降解菌时，培养基除了加入碳源、氮源、水和无机盐外，还需加入___________，培养基配制后需进行___________灭菌。从用途上分析，该培养基属于___________培养基。
(2)若对四环素降解菌进行分离计数，需要将含有四环素降解菌的菌液采用___________法接种于固体培养基表面，选用该法的原因是_____________，所有操作都应在_____________附近进行。
(3)在培养四环素降解菌时，往往同时将一未接种的平板置于恒温箱中一起培养，目的是_____。
(4)该科研人员利用显微镜直接计数四环素降解菌，结果往往偏大，原因可能是___________。

6 . 中药渣富含纤维素，如图所示，某研究小组欲从中药渣肥堆中筛选分解纤维素的菌株，以期为纤维素酶制剂的研制提供基础。回答下列问题：

(1)在培养过程中，获得纯净纤维素分解菌的关键是____；因此，在配制培养基后，需对A和B培养基进行____灭菌。
(2)往往需要利用A培养基进行多次培养，目的是____。利用B培养基培养的目的是____。
(3)若要验证B培养基具有选择作用，则需要设计一组对照组，对对照组的处理是____。实验结果是：接种48h后，实验组B培养基上的微生物在____（答出3点）等方面表现出稳定的菌落特征。
(4)刚果红透明圈直径和纤维素菌落直径的比值越大，说明纤维素分解菌分解纤维素的能量越____（填“强”或“弱”）。

7 . 微生物在培养基中的生长情况可以用多种方法测定。有些是简洁的测定方法，如测定培养液的浊度，因为培养液的浊度通常与细胞密度成正比。常用的方法是直接或间接地计算培养基中的微生物细胞的数目，如稀释涂布平板法就是一种常见的测定培养基中活细胞密度的方法。
(1)对培养基进行灭菌时最常用的方法是______。
(2)稀释涂布平板法操作时，需要将培养物用_____进行梯度稀释，然后接种到平板上，一段时间后，统计平板上的_____。
(3)通过稀释涂布平板法统计样品中微生物数目比显微镜直接计数统计到的数量_____（填“多”或“少”），其原因是____。
(4)一般在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液不宜过多，原因是_____。

8 . 某科研所从腐烂的葡萄皮及醋醅、葡萄汁、自酿葡萄酒中筛选出一株性能优良的醋酸菌M12，其分离纯化步骤如下：
样品→富集培养→分离纯化→定性实验→定量实验→菌种鉴定。
请回答下列问题：
(1)从腐烂的葡萄皮及醋醅、葡萄汁、自酿葡萄酒中筛选出醋酸菌，其依据是____。
(2)醋酸菌的代谢类型是____，其呼吸的场所是____，发酵时需要将温度控制在____℃。
(3)分离培养醋酸菌M12时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，常用的灭菌方法有____（至少答两种）。
(4)某同学尝试用从超市买来的食醋中分离醋酸菌，结果没有得到任何菌落，原因是____。
(5)培养醋酸菌时在培养基中加入95%的酒精，其作用是____。为测试M12的耐酒精能力，请简要说明实验设计的思路：____。

9 . 回答下列（一）、（二）小题：
（一）实验表明，细菌中芽孢杆菌降解率最高，真菌中毛霉降解率最高，且两者混合效率更佳。回答与固定化混合菌对土壤中苯并芘（BaP）降解效果有关的问题：
(1)高效降解菌筛选试验：土壤过2mm筛后，分装培养瓶中，每瓶30g，_____℃高压蒸汽灭菌_____，冷却后，在无菌条件下移入一定量的BaP丙酮溶液，放置过夜。再按10%量接种菌悬液，通过灭菌棉塞控制通气量，以不加菌液为对照，随时补加无菌水，使土壤水分为30%，置25℃恒温箱中避光培养，分别在每隔7d取样测定_____。
实验中BaP的降解结果都有一个共同的趋势：前28d降解转化速度快，随后则出现缓慢的反应趋势。
(2)固定化混合菌的制备：将蛭石载体处理后，再接种游离的____，随着混合菌的生长，部分微生物自然固定在载体上，培养结束后用_____洗涤固定化混合菌细胞数次，便制得固定化混合菌，以_____为对照，通过两者质量差计算蛭石对微生物的吸附量。
（二）回答与转基因雷公藤培育过程有关的问题：
(3)将含_____酶的混合液在55℃水浴锅中活化，0.22μm微孔滤膜过滤 灭菌。取雷公藤悬浮细胞，加入酶混合液，黑暗条件下 悬浮培养以分离原生质体。
(4)原生质体的活力检测采用台盼蓝染色法（台盼蓝可穿透死细胞的细胞膜，使死细胞中的DNA着色，但无法进入活细胞内），原生质体活力的计算方法为：_____占该视野下原生质体总数的百分比。
(5)由于原生质体来源于黑暗条件下培养的雷公藤悬浮细胞，因此其细胞中不含_____。将原生质体与含_____ 的植物表达载体质粒混合，在黑暗条件下完成转化后，再用激光作扫描光源的显微镜观察，统计发出绿色荧光的原生质体数占观察到的所有原生质体数的百分比，以此确认原生质体的转化效率。

10 . 某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功筛选到能高效降解化合物A的细菌（目的菌）。实验的主要步骤如下图所示。请分析回答下列问题：

(1)培养基中加入化合物A的目的是___，这种培养基属于___培养基。
(2)目的菌生长所需的氮源和碳源来自培养基中的___。实验需要振荡培养，由此推测目的菌的代谢类型是___。
(3)对培养基进行灭菌的常用方法是___。用稀释涂布平板法测定细菌数目时，实际活菌数要比测得的数目___。
(4)某同学计划统计污水池中目的菌的总数，他选用稀释倍数为10⁴、10⁵、10⁶的稀释液进行涂布，每种稀释液都设置了3个培养皿。从设计实验的角度看，还应设置的一组对照实验是___，此对照实验的目的是___。
(5)培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量___（填“增加”或“减少”）的培养液，接入新的培养液中连续培养，使目的菌的数量___（填“增加”或“减少”）。
(6)实验结束后，使用过的培养基应该进行___处理后才能倒掉，这样做的目的是防止造成___。