1 . 为确定某致病细菌对不同抗生素的敏感性，研究人员设置了四组实验：分别将含有A、B、C、D四种抗生素（含量相同）的滤纸片均匀置于同一平板上的不同位置，放在培养箱中培养一定时间后，观察其透明圈的大小，实验结果如下表。回答下列问题：

实验组别	抗生素种类	实验结果
1	A	滤纸片周围出现透明圈
2	B	滤纸片周围没有出现透明圈
3	C	滤纸片周围的透明圈比含A的小
4	D	滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落

(1)在微生物培养过程中，获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染，用平板培养细菌时一般需要将平板倒置，其原因是__________.
(2)实验需使用涂布器接种，接种前涂布器的灭菌方法为__________。该实验中，宜使用__________方法接种细菌，在培养和接种细菌时要特别注意进行无菌操作。
(3)根据实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素种类为__________；在排除杂菌污染的情况下，第4组实验说明细菌对抗生素D产生了__________。
(4)该实验还缺少一组空白对照，请尝试补充：__________。

2 . 某兴趣小组按如图方法对没有加工的鲜奶进行细菌检测。有关叙述正确的是（       ）

   

A．用湿热灭菌法对该实验中的鲜奶进行灭菌

B．若培养基需要调节pH，应该在灭菌后培养基凝固前立即进行

C．若3个培养皿中菌落数为35、33、34，则鲜奶中细菌数为3.4×106个/mL

D．对鲜奶中细菌计数，常采用稀释涂布平板法，统计的结果往往比实际值偏高

4 . 中药渣富含纤维素，如图所示，某研究小组欲从中药渣肥堆中筛选分解纤维素的菌株，以期为纤维素酶制剂的研制提供基础。回答下列问题：

(1)在培养过程中，获得纯净纤维素分解菌的关键是____；因此，在配制培养基后，需对A和B培养基进行____灭菌。
(2)往往需要利用A培养基进行多次培养，目的是____。利用B培养基培养的目的是____。
(3)若要验证B培养基具有选择作用，则需要设计一组对照组，对对照组的处理是____。实验结果是：接种48h后，实验组B培养基上的微生物在____（答出3点）等方面表现出稳定的菌落特征。
(4)刚果红透明圈直径和纤维素菌落直径的比值越大，说明纤维素分解菌分解纤维素的能量越____（填“强”或“弱”）。

5 . 微生物在培养基中的生长情况可以用多种方法测定。有些是简洁的测定方法，如测定培养液的浊度，因为培养液的浊度通常与细胞密度成正比。常用的方法是直接或间接地计算培养基中的微生物细胞的数目，如稀释涂布平板法就是一种常见的测定培养基中活细胞密度的方法。
(1)对培养基进行灭菌时最常用的方法是______。
(2)稀释涂布平板法操作时，需要将培养物用_____进行梯度稀释，然后接种到平板上，一段时间后，统计平板上的_____。
(3)通过稀释涂布平板法统计样品中微生物数目比显微镜直接计数统计到的数量_____（填“多”或“少”），其原因是____。
(4)一般在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液不宜过多，原因是_____。

6 . 某科研所从腐烂的葡萄皮及醋醅、葡萄汁、自酿葡萄酒中筛选出一株性能优良的醋酸菌M12，其分离纯化步骤如下：
样品→富集培养→分离纯化→定性实验→定量实验→菌种鉴定。
请回答下列问题：
(1)从腐烂的葡萄皮及醋醅、葡萄汁、自酿葡萄酒中筛选出醋酸菌，其依据是____。
(2)醋酸菌的代谢类型是____，其呼吸的场所是____，发酵时需要将温度控制在____℃。
(3)分离培养醋酸菌M12时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，常用的灭菌方法有____（至少答两种）。
(4)某同学尝试用从超市买来的食醋中分离醋酸菌，结果没有得到任何菌落，原因是____。
(5)培养醋酸菌时在培养基中加入95%的酒精，其作用是____。为测试M12的耐酒精能力，请简要说明实验设计的思路：____。

7 . 大丽轮枝菌（一种丝状真菌）是引起棉花黄萎病的主要病原菌。为观察大丽轮枝菌对棉花根的侵染路径，研究人员利用绿色荧光蛋白基因（sGFP）转染大丽轮枝菌，培育出表达绿色荧光蛋白的转基因菌株，主要过程如下。分析回答下列问题：
   
(1)PCR扩增sGFP的原理是______，该过程需要根据______设计特异性引物序列，在PCR反应体系中，添加的dNTP可提供______。
(2)由图可知：为保证sGFP基因可以在大丽轮枝菌细胞中表达，需将sGFP插入______之间。
(3)图中b链的黏性末端碱基序列（5'→3'）为______。
(4)过程②需要的工具酶是______。
(5)过程③中需要配制细菌培养基，配制时要在培养基灭菌并冷却到80℃左右后，再加入潮霉素溶液，潮霉素不能与培养基一同灭菌的原因是______。用该培养基筛选培养农杆菌，得到多个菌落，提取全部细菌质粒DNA，用BamHI和HindⅢ完全酶切，可以得到______种长度不同的DNA片段。
(6)将导入重组质粒的农杆菌加入大丽轮枝菌的孢子细胞悬液中，在适宜条件下完成转染后利用滤膜过滤得到孢子细胞，再在真菌培养基上培养获得菌落，最终通过检测______筛选出绿色荧光蛋白旺盛表达的大丽轮枝菌。

8 . 菠萝果肉中含有较丰富的维生素B和C。菠萝果酒味佳，且具有清热解渴﹑消暑提神、化食止泻的功效，深受人们的喜爱。工业上生产菠萝酒的步骤大致如下：原料选择→榨汁→调节糖度和酸度→发酵→调酒度→装瓶
回答下列问题：
(1)榨汁前需先将原料果用90℃热水浸泡5分钟，这样做的目的是_____________。
(2)发酵酿制前加入一定量的白砂糖调节糖度，目的是_____________。菠萝酒制作的原理：_____________（用反应式表示）。
(3)在菠萝酒的制作过程中，研究人员进行了相关研究，其结果如图所示：

①请为以上研究拟一个课题：_____________。
②制作菠萝酒的最佳初始糖度和酵母菌接种量分别是_____________。
③酵母菌接种量在1.1%~～1.4%时，酒精度呈下降趋势，感观评分低，原因是_____________。

9 . 下列各选项中，两个实验所用试剂作用相同的是（       ）

A．“观察植物细胞有丝分裂”和“低温诱导植物染色体数目变化”实验中，盐酸的作用

B．“检测生物组织中的还原糖”和“检测生物组织中的蛋白质”实验中，NaOH的作用

C．“体验制备细胞质膜的方法”和“显微镜观察叶绿体”实验中，蒸馏水的作用

D．“稀释涂布平板法培养微生物”和“检测细胞中脂肪”实验中，酒精的作用

10 . 某种物质A（一种含有C、H、N的有机物）难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解A。研究人员按照如图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解A的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和A，乙的组分为无机盐、水、A和B、下列表述正确的是（       ）

A．乙组分的B物质为琼脂，为了提高准确度，实验需设平行重复实验，无需另外设置空白对照

B．实验时，淤泥及盛有培养基的摇瓶通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌

C．步骤③的接种工具是接种环，菌落数目稳定时，大小不同的菌落形成的起始时间一般不同

D．实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为1.5×107个/mL，若要在每个平板上涂布0.1mL稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过150个，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释104倍