1 . 苯酚是重要的化工原料，被广泛应用于酚醛树脂、炼油、焦碳、染料等的生产中，并成为这些工业废水中的主要污染物。水溶液中的苯酚可被皮肤吸收而引起中毒，含酚废水可使水中生物大量死亡。活性污泥中的微生物作为废水处理的主体，是 有毒物质分解转化的主要执行者。回答下列问题：
(1)欲选出高效分解苯酚的菌株，应从_______中取样，接着在_______(填固体或液体)培养基中选择培养，目的是_______。对培养基进行灭菌处理时，应采 用_______法。
(2)某同学采用稀释涂布平板法对高效分解苯酚的菌株进行计数，其原理是_______。
(3)在3个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为10³的稀释液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的菌落数分别为：108、114和120，因此可得出1mL初始菌液中的活菌数为_______个。使用血细胞计数板计数时，为了区分活菌和死菌可采用台盼蓝染色，对活菌计数时应选择 视野中_______的细胞进行计数。
(4)分解苯酚的关键酶是苯酚羟化酶。苯酚羟化酶经分离纯化，可用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定，该方法可使电泳迁移率完全取决于_______。生产上常常把苯酚羟化酶固定化后使用，研究发现不能用同一种技术来固定化苯酚羟化酶和其它所有酶，可能的原因是_______(答出两点即可)。

2 . 下列有关微生物培养的叙述，正确的是（       ）

A．微生物培养过程中需提供几种主要营养物质就可以满足所有微生物生长的要求

B．微生物的接种技术包括斜面接种、穿刺接种等方法，其核心都是要防止杂菌的污染，保证培养物的纯度

C．纯化培养时，培养皿应倒置放在恒温培养箱内的摇床上培养

D．观察菌落时，应将培养皿盖拿掉后在显微镜下进行观察计数

4 . 我国科学家从北极分离、鉴定出了一种耐冷细菌，过程如下：①接种在人造海水中，15℃条件下振荡培养 3 小时；②梯度稀释后将样品涂布在 TYS 培养基中(0.5%胰蛋白胨、0.1%酵母提取物、1.5%琼脂)，15℃条件下培养 7 天；③挑取生长的菌落，进行划线，15℃条件下培养后选择不同形态的菌落进行进一步的培养、鉴定和保藏。下列说法错误的是（       ）

A．TYS 培养基是含有机碳源、氮源的固体培养基

B．人造海水、培养皿等在使用前需要进行灭菌处理

C．涂布后再次划线培养的目的是进一步纯化所得菌种

D．分析所有菌落，能还原采样点所有微生物的种类与含量

5 . 在培养基配制和微生物接种的过程中，确保无杂菌污染被称为无菌操作。图中，符合无菌操作要求的有（       ）

①火焰烧瓶口并在火焰旁将培养基倒入灭菌培养皿；②菌种试管口在火焰上灼烧；③接种前灼烧接种环；④接种前培养皿在火焰上灼烧；⑤靠近火焰接种

A．①②③④

B．①②③⑤

C．①③④⑤

D．②③④⑤

7 . 养殖池中存在的有毒物质主要是氨和亚硝酸，这两种物质可被硝化细菌吸收、利用。研究人员从养殖池池泥中分离出硝化细菌并进行了计数。下列有关叙述错误的是（       ）

A．选择培养基中的唯一氮源物质是氨或亚硝酸

B．培养基的pH应调至中性或弱碱性再进行湿热灭菌

C．接种时，每次划线结束后应用酒精灯灼烧接种环

D．用稀释涂布平板法得到的菌落数目通常比活菌的实际数目多

8 . 某同学欲判断某品牌“免洗手消毒液”的消毒效果，分别在使用消毒液洗手前后在手的相同部位取样，之后接种、培养并观察统计培养基上的菌落形态和数目。下列操作错误的是（       ）

A．对配制的培养基进行高压蒸汽灭菌

B．使用无菌棉拭子从手的皮肤表面取样

C．用取样后的棉拭子在固体培养基上划线

D．接种后的培养皿要倒置，以防培养污染

9 . 回答下列与酿酒和制醋相关的问题：
(1)葡萄汁装入发酵瓶要留1/3的空间，这种做法的目的是__________________________（答出两点即可）。
(2)在发酵过程中，葡萄酒逐渐呈现出深红色的原因__________________________________。
(3)获得纯净酵母菌的关键是______________。接种酵母菌过程中，在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环的目的是_______________。通过观察菌落的形状、大小、隆起程度等方面的特征，进一步判断挑选的菌株是否为粘质沙雷氏菌。根据这些特征能对不同微生物作出判断的依据是________________。
(4)开瓶后的葡萄酒如果密封不严，会出现酸味，原因是__________________________。
(5)研究发现，经葡萄里面的糖分自然发酵而成的酒精，含量一般在10%~13%为最佳，发酵时的温度和时间会影响果酒发酵产生的酒精的含量。为了找到适合生产的最佳发酵温度和时间。请设计出探究的思路：____________________________________________。

10 . 大丽轮枝菌（一种丝状真菌）是引起棉花黄萎病的主要病原菌。为观察大丽轮枝菌对棉花根的侵染路径，研究人员利用绿色荧光蛋白基因（sGFP）转染大丽轮枝菌，培育出表达绿色荧光蛋白的转基因菌株，主要过程如下（图中a链和b链分别是相应基因转录模板链）。分析回答下列问题：

(1)过程①中，PCR扩增sGFP的原理是______________，该过程除需要根据______________设计特异性引物序列外，为保证sCFP正确插入质粒中，还需要在引物的5'端添加限制酶识别序列，图中b链的黏性末端碱基序列（5'→3'）为______________。
(2)过程②需要的工具酶是_______________。研究中将sGFP插入构巢曲霉启动子和终止子之间的目的是______________。
(3)过程③中需要配制细菌培养基，配制时要在培养基灭菌并冷却到80℃左右后，再加入潮霉素溶液，潮霉素不能与培养基一同灭菌的原因是______________。
(4)选择过程③筛选培养得到的不同农杆菌菌落，分别提取细菌质粒DNA，并用BamHI和HindⅢ完全酶切，可以得到______________种长度不同的DNA片段。
(5)将导入重组质粒的农杆菌加入大丽轮枝菌的孢子细胞悬液中，在适宜条件下完成转染后利用滤膜过滤得到孢子细胞，再在真菌培养基上培养获得菌落，最终通过检测_________________筛选出绿色荧光蛋白旺盛表达的大丽轮枝菌。