1 . （一）某种物质S（一种含有C、H、N的有机物）难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解S．研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株，且细菌降解S后会在菌落外周形成透明圈。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和S，乙的组分为无机盐、水、S和Y。
(1)实验时培养基通常采用_________的方法进行灭菌．乙培养基中的Y物质是_________。甲、乙培养基均属于_________培养基。

(2)实验中初步估测M中细菌细胞数为2×10⁷个/mL，若要在每个平板上涂布0.1ml稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释_________倍．培养过程中定期取样并用_________的方法进行菌落计数，评估菌株增殖状况．用平板培养细菌时一般需要将平板_________（填“倒置”或“正置”）．
(3)最后从平板中挑选_________的菌落，其降解S的能力较强。
（二）胰岛素的生产由提取动物胰岛素，发展到了利用基因工程生产重组人胰岛素。

(4)为避免目的基因任意连接和载体自身环化，应选用上图_________酶处理目的基因和载体。
(5)构建的基因表达载体除目的基因、标记基因外，还必须有_________、_________、_________等。
(6)利用奶牛设计乳腺生物反应器生产人胰岛素，为使人胰岛素基因在奶牛乳腺中特异表达，构建基因表达载体时应将目的基因与奶牛乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，并选用_________为受体细胞。

2 . 杂交瘤细胞可用于生产单克隆抗体。下列有关杂交瘤细胞克隆化培养的叙述，错误的是（       ）

A．杂交瘤细胞的克隆化培养过程中不需要考虑细菌污染问题

B．杂交瘤细胞可以在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖

C．以单个杂交细胞为起点克隆培养形成的细胞群体可称为单抗细胞株

D．培养过程中杂交瘤细胞失去产生抗体的能力可能是发生了突变或染色体片段丢失

3 . 啤酒是以大麦为主要原料，添加啤酒花（一种草本植物），经酵母菌发酵制成的。其工业化生产的主要流程为：

回答下列问题：
(1)利用_________处理大麦，可以使大麦种子无须发芽就可以产生淀粉酶。加啤酒花后煮沸的目的是_________。
(2)流程图中步骤“A”的操作为_________，充氧气的作用是_________。发酵的最适条件应为__________。
(3)77℃保温30分钟处理类似于巴氏消毒法，该操作既可以杀死啤酒中的微生物，还可以_________。
(4)若要进一步研究淀粉酶的特性，需从发芽大麦种子中提取和分离淀粉酶，主要步骤是原料处理→___________→纯化→纯度鉴定。鉴定淀粉酶纯度的方法常用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，凝胶中加入SDS的作用是__________，同时SDS所带的大量负电荷大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，从而可以使测定的结果只是单条肽链的分子量且电泳迁移率完全取决于分子量的大小。

4 . 某生物实验室为培养大肠杆菌制备了LB培养基，其营养构成如表。下列叙述错误的是（       ）

组分	胰化蛋白胨	酵母提取物	NaCl	H2O
含量（g）	10	5	10	定容至1000mL

A．该培养基采用高压蒸汽灭菌效果最好

B．NaCl既可以提供无机盐，又可以调节渗透压

C．酵母提取物可提供碳源、磷酸盐和维生素等营养

D．灭菌前需用稀盐酸将培养基的pH调至3.6~4.6

5 . 下列关于微生物的分离与培养实验的叙述，正确的是（　　）

A．高压蒸汽灭菌加热结束后，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖

B．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上

C．为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落

D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底

6 . 地球上的植物每年产生的纤维素超过70亿吨，其中40%～60%能被土壤中的某种微生物分解利用。某科研小组欲调查某地土壤中纤维素的利用情况，对土壤中分解纤维素的细菌进行分离和纯化培养。回答下列问题：
(1)取该地的土壤约10g作为样本，立即装于纸袋内，此纸袋使用前需要经过_______处理。将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1mL上清液加入盛有9mL______的试管中，按照上述操作稀释到10³倍。取0.1mL菌液接种到4个培养基上，培养一段时间后，统计菌落数分别为25、33、39、42个。则1g土壤中活菌数量为___________个。
(2)配制培养基筛选分解纤维素的细菌，为检验培养基及培养皿灭菌是否合格，可采取的措施是____。
(3)为筛选出分解纤维素的细菌，培养基中应添加________为唯一碳源。刚果红能够与纤维素形成红色复合物，可用其鉴定纤维素分解菌。研究人员在刚果红培养基平板上观察到几株有透明降解圈的菌落（如下图）。降解圈大小与纤维素酶的___________有关，图中降解纤维素能力最强的菌株是______（填图中序号）。

7 . 棉花是一种重要的经济作物，但是棉花全株含有对动物生长繁殖存在潜在危害的有毒物质——棉酚，限制了以棉花秸秆为原料来生产青贮饲料的应用。研究人员试图以棉花田的土壤为分离基质，利用以棉酚为唯一碳源的培养基，分离出高效分解棉酚的菌株。下列叙述不正确的是（　　）

A．稀释涂布平板法或平板划线法均可用来分离纯化棉酚分解菌

B．分离过程中所用的以棉酚为唯一碳源的培养基属于选择培养基

C．分离过程中所用的接种工具、培养工具以及培养基都需要高压蒸汽灭菌

D．对分离纯化得到的菌株进行计数时可采用稀释涂布平板法或显微计数法

8 . 柴油是重要的燃料油之一，泄漏或不当排放会造成环境污染。研究者从被柴油污染的土壤中获取了柴油降解菌。下列叙述正确的是（　　）

A．为获得柴油降解菌，需选用以柴油为唯一碳源的培养基

B．实验过程中所用的培养基和土壤样液均需进行严格灭菌

C．用稀释涂布平板法分离菌落时，涂布前需将涂布器直接放在酒精灯上进行灼烧灭菌

D．可以逐步提高培养基中的柴油浓度来筛选对高浓度柴油耐受性更强的柴油降解菌

9 . 下列有关培养基的叙述，正确的是（       ）

A．同一种物质可能既作为碳源又作为氮源，所有碳源都能提供能量

B．培养基配置好后，应先分装再用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌处理

C．带菌培养基必须加热后才能倒掉

D．微生物生长不可缺少的有机物有氨基酸、维生素和蛋白胨等

10 . 大肠杆菌是寄生于人和动物肠道中的细菌，其代谢产物能与染料伊红美蓝反应，便菌落呈紫黑色。检测水样是否符合饮用水卫生标准时，常用滤膜法测定大肠杆菌的数目，流程如图所示：用滤膜过滤待测水样→水样中的细菌留在滤膜上→将滤膜转移到伊红美蓝培养基（EMB培养基）上培养一统计菌落数目。

(1)过滤待测水样需要用到滤杯、滤膜和滤瓶，其中需要进行灭菌处理的是_________。
(2)从功能上划分，EMB培养基属于__________培养基，为检测该培养基灭菌是否彻底，对于该培养基应采用的检测方法是_________。
(3)为检测严重污染的水体中大肠杆菌数量，将水样适当稀释后，取样涂布在上述平板中，应选择颜色为_________的菌落进行计数。该方法通过统计平板上的菌落数来推测样品中的活菌数，其原理是__________。
(4)该同学进一步思考，利用滤膜法也可以测定待测水样中其他微生物的数目。他取了两份水样，一份待测水样来自变酸的果酒，从中检测到两种微生物，它们在结构上的主要区别是__________。另一份来自湖泊，若要通过测量蓝藻的数目来研究“水华”，则培养基配方中必须添加__________（从“水”“无机盐”“碳源”“氮源”中选填）。