25. 盐胁迫会影响植物的生长,可用转基因技术提高植物的耐盐能力。mybx是响应盐胁迫的关键转录因子,其功能缺失突变体对150mmol·L
-1的NaCl高度敏感。HKT1基因表达的Na
+转运蛋白介导Na
+从木质部导管到木质部薄壁细胞的运输,减少木质部的Na
+含量,从而提高植物的耐盐能力。科研人员构建HKT1基因的表达载体获得HKT1基因表达菌体,构建过程如图所示。四种限制酶的识别序列及切割位点如表所示。回答下列问题:
限制酶 | HindⅢ | BamHI | XhoI | BglⅡ |
识别序列及切割位点 | A↓AGCTT | G↓GATCC | C↓TCGAG | A↓GATCT |
(1)将拟南芥细胞破碎提取RNA时,需要在溶液中加入
___________,以防止RNA降解。过程③要选择合适的限制酶切割含HKT1基因的DNA片段,应选用的表中的限制酶是
___________。
(2)过程⑤将重组质粒导入大肠杆菌。在筛选含有HKT1基因的大肠杆菌时,除必要的营养物质,还需要在培养基中添加
___________。提取重组质粒A将其导入农杆菌,用农杆菌侵染拟南芥mybz突变体花序,农杆菌的作用是
___________。
(3)检测转HKT1基因拟南芥mybr突变株是否表达出Na
+转运蛋白时,可用
___________技术进行检测。若Na
+转运蛋白高度表达,还需要进一步鉴定其抗性程度,实验的思路是
___________。