1 . 植物内生菌是一定阶段或全部阶段生活于健康植物的组织和器官内部的真菌或细菌，普遍存在于高等植物中。
(1)放线菌也是一种常见的内生菌，能抑制病原菌的生长。研究人员利用两种不同类型的放线菌获得新型工程菌，过程如下：
   
收集上述两种菌丝体，加入________（填“纤维素酶”或“溶菌酶”）处理，分离原生质体，将两种原生质体悬液等量混合，加入适量促融剂处理一段时间。终止反应并洗涤后，取一定量混合液接种于________（填“固体”或“液体”）培养基中培养。根据菌落特征，选出性状稳定的融合菌株。
(2)某真菌的w基因可编码一种高效降解纤维素的酶，已知图中w基因转录方向为从左往右。为使放线菌产生该酶，以图中质粒为载体，进行转基因。
   

限制酶	BamH I	EcoR I	Mfe I	Kpn I	HindⅢ
识别序列和切割位点	G↓GATTC	G↓AATTC	C↓AATTG	GGTAC↓C	A↓AGCTT

①限制酶主要是从________中分离纯化出来的。应使用限制酶________切割图中质粒，使用限制酶________切割图中含w基因的DNA片段，以获得能正确表达w基因的重组质粒。
②与质粒中启动子结合的酶是________。启动子通常具有物种特异性，在质粒中插入w基因，其上游启动子应选择________启动子（选填“植物”、“真菌”、“放线菌”）。
③W基因转录的模板链是________。利用PCR技术对W基因进行扩增的原理是________，子链的延伸方向是________。
④研究人员欲对W基因的mRNA进行RT-PCR，已知其mRNA的序列为5'-UGAACGCUA…（中间序列）…GUCGACUCG-3'。为了便于将扩增后的基因和载体成功构建成重组质粒，用于PCR扩增的引物应为________。
A.5'-TGAACGCTA…        B.5'-CGAGTCGAC…
C.5'-GAATTCTGA…        D.5'-AAGCTTCGA…

2 . 近期在“科学号”考察船对南中国海科考中，中国科学家采集了某海域1146米深海冷泉附近沉积物样品，分离、鉴定得到新的微生物菌株——拟杆菌新菌株并进一步研究了其生物学特性。有关说法错误的是（　　）

   

A．培养基接入沉积物样品后，需要在低温厌氧培养一段时间才能获得含拟杆菌的培养物

B．在以纤维素为唯一碳源时可以得到纯种培养的拟杆菌新菌株

C．将采集的样品置于各种培养基中培养，仍有很多微生物不能被分离筛选出来，推测其原因可能是某些微生物只有利用深海冷泉中的特有物质才能生存

D．藻类细胞解体后难降解的多糖物质，通常会聚集形成碎屑沉降到深海底部，推测拟杆菌新菌株为异养生物，作为分解者起作用

3 . 将两种氨基酸营养缺陷型大肠杆菌（菌株a和b）进行如下图所示实验。下列叙述正确的是（　　）

   

A．实验中接种至培养基方法是平板划线法

B．基本培养基出现的少量菌落一定是单菌落

C．基本培养基中包含菌株a和b的生长因子

D．菌株a和b需要的生长因子有所不同

4 . 下列关于生物实验的叙述正确的是（       ）

A．施旺、施莱登运用不完全归纳法得出一切动植物都由细胞发育而来

B．果酒发酵过程中，每隔12h左右打开瓶盖，释放酵母菌发酵产生的CO2

C．拜尔的实验在黑暗中进行是为了排除光照对胚芽鞘尖端合成生长素的影响

D．分别用含有35S和32P的两种培养基培养细菌，再用上述细菌分别培养病毒，检测子代病毒的放射性可区分是DNA病毒还是RNA病毒

5 . 如图所示为面包霉体内合成氨基酸的途径。若在发酵工程中利用面包霉来大量合成氨基酸A

应采取的最佳措施是（       ）

A．改变面包霉的细胞膜通透性

B．在高温高压下进行发酵

C．对面包霉进行诱变处理，选育出不能合成酶③的菌种

D．对面包霉进行诱变处理，选育出不能合成酶②的菌种

6 . 某学者利用“影印培养法”研究大肠杆菌抗链霉素性状产生的原因，先将原始菌种接种到1号培养基上，培养出菌落后，将灭菌绒布在1号上印模，绒布沾上菌落并进行转印，使绒布上的菌落按照原位接种到2号和3号培养基上。待3号上长出菌落后，在2号上找到对应的菌落，然后接种到不含链霉素的4号培养液中，培养后再接种到5号培养基上，并重复以上操作。实验过程如图所示。下列相关叙述正确的是（       ）

A．大肠杆菌抗链霉素的突变是发生在与链霉素接触之后

B．在操作规范的情况下，5中观察到的菌落数可能大于初始接种到该培养基上的活菌数

C．4号和8号培养液中，大肠杆菌抗链霉素菌株的比例逐渐增大

D．该实验缺乏对照实验，无法确定抗链霉素性状属于可遗传变异

7 . 野生型大肠杆菌能够在基本培养基中生长，突变菌株A和突变菌株B由于不能自己合成某些营养素，而不能在基本培养基上生长。科学工作者利用菌株A和菌株B进行了如下两个实验。实验一：将菌株A和菌株B混合后，涂布于基本培养基上，结果如图1；实验二：将菌株A和菌株B分别置于U型管的两端，中间由过滤器隔开。加压力或吸力后，培养液可以自由流通，但细菌细胞不能通过。经几小时培养后，将菌液A、B分别涂布于基本培养基上，结果如图2。下列推测错误的是（       ）

A．菌株A和B的代谢产物不能改变彼此的遗传特性

B．混合培养的菌株不一定都能在基本培养基上生长

C．不同菌株间接触后才可能交换遗传物质

D．菌株A和菌株B含有相同的突变基因

8 . 细菌X合成的tcel蛋白和tcil蛋白使其在与其他细菌的竞争中占优势，其中tcel蛋白是一种有毒性的分泌蛋白。研究人员利用野生型细菌X及其不同突变体进行了如下实验：在固体培养基表面放置一张能隔离细菌的滤膜，将一种菌（下层菌）滴加在滤膜上后再放置第二张滤膜，滴加等量的另一种菌（上层菌），共同培养后，对上、下层菌计数得到的结果如图所示。下列叙述正确的是（       ）

A．实验中的培养皿、固体培养基和滤膜均需要进行消毒处理

B．对上、下层菌计数可以将滤膜菌体稀释后采用血球计数板计数

C．由甲、乙，丙三组结果可推测tcil蛋白能够中和tcel蛋白的毒性

D．野生型细菌X在与tcel—tcil双突变体和tcel突变体的竞争中均占优势