1 . 在某地的农业生产中，研究人员发现了一种广泛使用的除草剂在土壤中不易被降解，且长期使用会导致土壤被污染。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下图程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂是一种含氮有机物，在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）。下列相关叙述正确的是（       ）

A．只有长期使用该除草剂的土壤中才含有能降解该除草剂的细菌

B．筛选能降解该除草剂的细菌的培养基中该除草剂是唯一的氮源

C．图中操作Ⅰ的接种方法为平板划线法，该方法可用于细菌计数

D．经过一段时间的培养，培养皿中应该只存在有透明圈的菌落

2 . 植物内生菌是一定阶段或全部阶段生活于健康植物的组织和器官内部的真菌或细菌，普遍存在于高等植物中。
(1)放线菌也是一种常见的内生菌，能抑制病原菌的生长。研究人员利用两种不同类型的放线菌获得新型工程菌，过程如下：
   
收集上述两种菌丝体，加入________（填“纤维素酶”或“溶菌酶”）处理，分离原生质体，将两种原生质体悬液等量混合，加入适量促融剂处理一段时间。终止反应并洗涤后，取一定量混合液接种于________（填“固体”或“液体”）培养基中培养。根据菌落特征，选出性状稳定的融合菌株。
(2)某真菌的w基因可编码一种高效降解纤维素的酶，已知图中w基因转录方向为从左往右。为使放线菌产生该酶，以图中质粒为载体，进行转基因。
   

限制酶	BamH I	EcoR I	Mfe I	Kpn I	HindⅢ
识别序列和切割位点	G↓GATTC	G↓AATTC	C↓AATTG	GGTAC↓C	A↓AGCTT

①限制酶主要是从________中分离纯化出来的。应使用限制酶________切割图中质粒，使用限制酶________切割图中含w基因的DNA片段，以获得能正确表达w基因的重组质粒。
②与质粒中启动子结合的酶是________。启动子通常具有物种特异性，在质粒中插入w基因，其上游启动子应选择________启动子（选填“植物”、“真菌”、“放线菌”）。
③W基因转录的模板链是________。利用PCR技术对W基因进行扩增的原理是________，子链的延伸方向是________。
④研究人员欲对W基因的mRNA进行RT-PCR，已知其mRNA的序列为5'-UGAACGCUA…（中间序列）…GUCGACUCG-3'。为了便于将扩增后的基因和载体成功构建成重组质粒，用于PCR扩增的引物应为________。
A.5'-TGAACGCTA…        B.5'-CGAGTCGAC…
C.5'-GAATTCTGA…        D.5'-AAGCTTCGA…

3 . 工程菌的高密度发酵受到溶氧等多种因素的制约。透明颤菌血红蛋白（vgb）能从微氧环境中摄取氧，提高胞内有效氧浓度，从而促进低溶氧条件下细菌的生长繁殖。研究人员根据Genbank公布的vgb基因及其启动子的序列信息，人工合成目的基因（含vgb启动子Pvgb及vgb编码区DNA片段），插入克隆载体质粒pUC57得到质粒pUC57-vgb。从pUC57中回收vgb启动子及编码区片段，再插入表达载体pET28a，得到重组质粒pET-vgb。将重组质粒导入大肠杆菌即得到适合低氧发酵的工程菌。部分过程如下图1所示，回答下列问题：
   
注：M为指示分子大小的标准参照物；小于0.2kb的DNA分子条带未出现在图中
(1)启动子Pvgb受环境中溶氧调节，当溶氧跌至20%以下时，Pvgb激活，合成vgb，这种启动子称为______________。
(2)提取pUC57-vgb，通过PCR技术扩增目的基因。扩增时需在两种引物的_______（填5′或3′）端分别添加BamHI和HindIII识别序列。PCR反应体系中需加入Mg²⁺离子，目的是____________________________。
(3)将构建好的重组质粒导入大肠杆菌时，需要用Ca²⁺处理大肠杆菌细胞，使细胞处于______________的生理状态。
(4)将转化后的大肠杆菌接种在含卡那霉素的培养基上进行培养，随机挑取菌落（分别编号为1、2、3、4）培养并提取质粒，用BamHI和HindIII两种限制酶进行酶切，酶切产物经琼脂糖凝胶电泳分离。电泳结果如图2所示。
①在凝胶中DNA分子的迁移速率与____________________________（列举两点）有关。
②含目的基因的重组质粒很可能是_______号菌落的质粒。
(5)为进一步验证低氧发酵的工程菌是否构建成功，将（4）中挑选的菌种接种到液体培养基中培养，同时培养_______菌种作对照。在摇床上_______（填“低速”或“高速”）震荡培养，一段时间后检测菌体密度。

5 . 聚羟基脂肪酸酯（PHA）是由嗜盐细菌合成的一种胞内聚酯，它具有类似于合成塑料的理化特性，废弃后易被生物降解，可用于制造无污染的“绿色塑料”。科学家从某咸水湖中寻找生产PHA的菌种，流程图如下。下列叙述正确的是（       ）

   

A．步骤②可用稀释涂布平板法接种到含合成塑料的选择培养基上

B．步骤③所用的培养基中营养物质浓度越高，对嗜盐菌的生长越有利

C．扩大培养所用的培养基应加入琼脂，放置摇床上培养，以便于挑取菌落获得纯化菌株

D．挑取菌落时，应取多个菌落并分别测定嗜盐菌的PHA含量

6 . 近期在“科学号”考察船对南中国海科考中，中国科学家采集了某海域1146米深海冷泉附近沉积物样品，分离、鉴定得到新的微生物菌株——拟杆菌新菌株并进一步研究了其生物学特性。有关说法错误的是（　　）

   

A．培养基接入沉积物样品后，需要在低温厌氧培养一段时间才能获得含拟杆菌的培养物

B．在以纤维素为唯一碳源时可以得到纯种培养的拟杆菌新菌株

C．将采集的样品置于各种培养基中培养，仍有很多微生物不能被分离筛选出来，推测其原因可能是某些微生物只有利用深海冷泉中的特有物质才能生存

D．藻类细胞解体后难降解的多糖物质，通常会聚集形成碎屑沉降到深海底部，推测拟杆菌新菌株为异养生物，作为分解者起作用

7 . 下列关于生物实验的叙述正确的是（       ）

A．施旺、施莱登运用不完全归纳法得出一切动植物都由细胞发育而来

B．果酒发酵过程中，每隔12h左右打开瓶盖，释放酵母菌发酵产生的CO2

C．拜尔的实验在黑暗中进行是为了排除光照对胚芽鞘尖端合成生长素的影响

D．分别用含有35S和32P的两种培养基培养细菌，再用上述细菌分别培养病毒，检测子代病毒的放射性可区分是DNA病毒还是RNA病毒

8 . 某学者利用“影印培养法”研究大肠杆菌抗链霉素性状产生的原因，先将原始菌种接种到1号培养基上，培养出菌落后，将灭菌绒布在1号上印模，绒布沾上菌落并进行转印，使绒布上的菌落按照原位接种到2号和3号培养基上。待3号上长出菌落后，在2号上找到对应的菌落，然后接种到不含链霉素的4号培养液中，培养后再接种到5号培养基上，并重复以上操作。实验过程如图所示。下列相关叙述正确的是（       ）

A．大肠杆菌抗链霉素的突变是发生在与链霉素接触之后

B．在操作规范的情况下，5中观察到的菌落数可能大于初始接种到该培养基上的活菌数

C．4号和8号培养液中，大肠杆菌抗链霉素菌株的比例逐渐增大

D．该实验缺乏对照实验，无法确定抗链霉素性状属于可遗传变异

9 . 细菌X合成的tcel蛋白和tcil蛋白使其在与其他细菌的竞争中占优势，其中tcel蛋白是一种有毒性的分泌蛋白。研究人员利用野生型细菌X及其不同突变体进行了如下实验：在固体培养基表面放置一张能隔离细菌的滤膜，将一种菌（下层菌）滴加在滤膜上后再放置第二张滤膜，滴加等量的另一种菌（上层菌），共同培养后，对上、下层菌计数得到的结果如图所示。下列叙述正确的是（       ）

A．实验中的培养皿、固体培养基和滤膜均需要进行消毒处理

B．对上、下层菌计数可以将滤膜菌体稀释后采用血球计数板计数

C．由甲、乙，丙三组结果可推测tcil蛋白能够中和tcel蛋白的毒性

D．野生型细菌X在与tcel—tcil双突变体和tcel突变体的竞争中均占优势

10 . 某研究小组进行了稻田固氮、解磷、解钾筛选及其复合菌剂对土壤培肥作用的系列实验。
(1)菌株筛选：从土壤中筛选出具有固氮、解磷和解钾能力的3种菌株，A、B、C，需选用的培养基分别为表中的_____________。

类型	组成
甲	甘露醇、KH2PO4、NaCl、MgSO4、CaSO4、CaCO3，pH7.2
乙	蔗糖、NaH2PO4、（NH4）2SO4、FeCl3、CaCO3、钾长石粉，pH7.2
丙	葡萄糖、NaCl、KCl、MgSO4、（NH4）2SO4、Ca3（PO4）2，pH7.2

（注：钾长石粉是一种富钾的铝硅酸盐矿物制成的粉末，其主要化学成分为SiO₂、K₂O、Al₂O₃、CaO等）
(2)菌株鉴定：将上述筛选出的菌株用____________法分别接种到固氮、解磷和解钾培养基培养，观察菌落的____________等特征，对菌株进行种属鉴定。为保证鉴定结果准确无误，关键是要做到____________。
(3)复合菌株拮抗实验将3种菌液混合培养，计数各阶段各菌株数量。简要写出测定活菌数的实验思路____________。
(4)复合菌剂接入水稻土壤及移栽发芽种子，水稻苗生长及生物量等情况见下表。实验中，添加腐熟牛粪的原因可能是____________，实验可得出的结论是____________。

处理	苗长（cm）	鲜重（g/株）	干重（mg/株）
复合菌剂+腐熟牛粪	14.6	0.355	32.6
腐熟牛粪	13.1	0.263	24.3
空白对照	11.9	0.204	18.1

(5)将复合菌剂用于农业生产，其优越性是_____________（写出两点）