3 . 波斯鲟是一种洄游性鲟类，在海洋和淡水河流之间洄游，其鳃上有氯细胞，氯细胞膜上的Na⁺-K⁺-ATP泵能够运输Na⁺，K⁺离子，维持渗透压稳定。波斯鲟在进入海水环境后，血浆渗透压迅速升高到高于海水渗透压，15天后降低到海水渗透压水平。下图是不同体重的波斯鲟从淡水转移到海水中，波斯鲟鳃中Na⁺-K⁺-ATP泵荧光强度（A图）和Na⁺-K⁺-ATP泵活性（B图）的变化。其中2~3g的波斯鲟幼鱼对海水的适应能力显著强于1~2g的波斯鲟幼鱼。下列叙述正确的是（       ）

   

A．从进入海水到血浆与海水渗透压相等，波斯鲟的细胞处于失水状态

B．波斯鲟主要通过增加Na⁺-K⁺-ATP泵的数量来适应海水环境

C．刚进入海水中渗透压升高有助于维持波斯鲟的正常生命活动

D．Na⁺-K⁺-ATP泵通过排出多余的Na⁺来维持渗透压稳定

4 . Mstl是一种蛋白激酶，高脂饮食会持续激活 Mstl 基因导致心肌损伤。为探究上述机制，科研人员利用CRISPR/Cas9 技术敲除小鼠的Mst1 基因，过程如图1 所示，请回答下列问题：

   

(1)科研人员分别设计sgRNA基因的正向序列与反向序列，使二者退火形成sgRNA基因，其中sgRNAl基因正向序列为5’ACCGCACC^......GGCC3’其设计依据有_____，sgRNAl基因反向序列为5’_____3’。
(2)与sgRNA基因相比， sgRNA特有的化学成分有_____。应将sgRNA基因序列插入载体_____之间，利于其表达。
(3)过程①需要_____酶，过程②通过_____（技术） 将两个载体导入到野生型小鼠的受精卵中，表达出sgRNA和Cas9核酸酶，组装后切割Mstl基因。
(4)有研究人员优化了实验方法：在体外合成sgRNA和Cas9 mRNA，利用脂质体包裹导入受精卵，该过程sgRNA和Cas9mRNA进入细胞的方式为_____。与上图相比，该方法能较快启动基因敲除，原因是_____。
(5)科研人员利用野生型小鼠和Mstl基因敲除小鼠进行了下列各组实验，培养一段时间后，分别检测各组小鼠的Drpl （促进线粒体进行碎片化分裂的蛋白） 和β- actin（细胞中含量稳定，作为对照） 表达水平，结果如图2。

   

由图可知，高脂饮食条件下，Mstl通过_____，从而引起心肌的损伤。

5 . 发菜是一种陆生多细胞丝状蓝藻。科研人员测定了不同的pH对发菜细胞（从发菜藻体中分离获得）光合放氧速率和呼吸耗氧速率的影响，结果如下图。请回答下列问题：

   

(1)发菜细胞中催化二氧化碳固定的酶分布在_____，C₃ 的还原需要光反应提供_____。
(2)取发菜细胞培养液置于液相氧电极反应室中，以3~6min为间隔，交替进行_____处理，循环三次，测定溶氧量变化，计算光合速率和呼吸速率。
(3)有人认为pH为4时发菜细胞不能进行光合作用，你是否同意他的观点？ 请说明理由。_____。
(4)过酸和过碱的环境通过影响_____，从而影响了发菜的光合作用和呼吸作用。根据实验结果可知，发菜细胞光合作用对_____环境有较强的适应能力。
(5)为了探究不同浓度磷酸盐对发菜细胞光合速率和呼吸速率的影响，科研人员进行了如下实验。请补全表格：

实验步骤的名称	实验操作的要点
①_____	将完全培养基配方中的K₂HPO₄去除，代之以等摩尔浓度的②_____（填“NaCl”或“KCl”或“Na₂HPO₄”）。
培养、收集发菜细胞	将发菜细胞接种于无磷培养基中培养10d， 通过③_____（技术） 收集发菜细胞。
分组实验	将收集的发菜细胞分组接种于添加了④_____的培养基中继续培养 24h。
测定相关指标	测定各组发菜细胞的光合速率和呼吸速率。

6 . 一个肿瘤中常有两种癌细胞，一种是以糖酵解为主要产能方式，另一种是以线粒体氧化为主要产能方式。研究发现多种癌细胞高表达MCT1、MCT4载体，连接两种癌细胞，形成协同代谢，促进肿瘤的发生与发展，如下图。相关叙述错误的是（       ）

A．糖酵解、TCA循环过程都能产生ATP和［H］

B．理论上A型癌细胞摄取葡萄糖的速率高于B型

C．三羧酸循环消耗O2量等于产生CO2量

D．MCT1、MCT4共转运乳酸和H+能调节胞内pH和代谢平衡

8 . 非洲猪瘟病毒(ASFV)可感染家猪及野猪，病死率高达100%。抗原蛋白的选择和单克隆抗体的制备是相关疫苗研发的基础。CP312R 是ASFV 中最具免疫原性的蛋白之一。我国学者利用基因工程和细胞融合技术，成功制备了CP312R 蛋白和相应单克隆抗体。
请回答：
(1)获取目的基因。
通过访问互联网，检索________获得CP312R蛋白基因序列，采用_______ 法合成目的基因。
(2)设计引物与扩增目的基因。
根据目的基因序列，设计和合成引物。据下表分析，引物1、引物2上分别添加了_____、_______限制酶识别序列。

限制酶及识别序列		（引物名称及序列5′→3′）
EcoRⅠ	5′GAATTC3′	引物1：CTAGTCTAGAATGACTACCCACATCTTCCACGCTG
PstⅠ	5′CTGCAG3′
XbaⅠ	5′TCTAGA3′	引物2：AAACTGCAGTTAGTGGTGATGGTGGTGGTGGTGGTGGTGAGCGATAGCGATTTG

PCR 扩增时，应选耐高温的_______聚合酶。
A. 以DNA为模板的RNA                                   B. 以RNA为模板的RNA
C. 以DNA为模板的DNA                                     D. 以RNA为模板的DNA
(3)重组质粒的构建与鉴定。
经两种限制酶切割后的目的基因和质粒在 DNA连接酶的作用下通过_______键连接起来，能正确表示这个过程的图像是_______ (填写序号)。

重组质粒经双酶切、电泳分离后，若电泳结果出现_______个条带表明重组质粒构建成功。电泳时，琼脂糖凝胶作为介质起到_______的作用，_______起到电泳指示剂的作用。若电泳时指示剂过早迁移出凝胶，下列调整措施合理有哪些? _______。
A. 调整电泳的时间       B. 调整指示剂上样量       C. 调整加样孔朝向正极
D. 调整电泳仪电压和温度          E. 调整凝胶中琼脂糖的浓度
(4)CP312R 蛋白与单克隆抗体的制备。
利用基因工程制备的CP312R 蛋白作为_______，刺激小鼠使其发生免疫反应：诱导从小鼠脾脏分离的______与骨髓瘤细胞融合； 融合得到的杂交瘤细胞必需经过________和________，才能获得足够数量的能产生所需抗体的杂交瘤细胞。与体外培养获得单克隆抗体相比，从小鼠腹水中提取单抗的优点是________。 (答出2点即可)