1 . 某小组为研究真菌基因m的功能，构建了融合表达蛋白M和tag标签的质粒，请结合实验流程回答下列问题：

(1)目的基因的扩增
①提取真菌细胞______，经逆转录获得cDNA，进一步获得基因m片段。
②为了获得融合tag标签的蛋白M，设计引物P2时，不能包含基因m终止密码子的编码序列，否则将导致______。
③热启动PCR可提高扩增效率，方法之一是：先将除TaqDNA聚合酶（Taq酶）以外的各成分混合后，加热到80℃以上再混入酶，然后直接从94℃开始PCR扩增，下列叙述正确的有______
A．Taq酶最适催化温度范围为50～60℃
B．与常规PCR相比，热启动PCR可减少反应起始时引物错配形成的产物
C．两条子链的合成一定都是从5′端向3′端延伸
D．PCR产物DNA碱基序列的特异性体现了Taq酶的特异性
(2)重组质粒的构建
①将Sma I切开的载体A与添加同源序列的m混合，用特定DNA酶处理形成黏性末端，然后降温以促进______，形成A-m结合体。将A-m结合体导入大肠杆菌，利用大肠杆菌中的DNA聚合酶及______酶等，完成质粒的环化。
②若正确构建的重组质粒A—m仍能被Sma I切开，则Sma I的酶切位点可能在______。
(3)融合蛋白的表达
①用含有尿嘧啶的培养基培养URA3基因缺失型酵母，将其作为受体菌，导入质粒A-m，然后涂布于无尿嘧啶的培养基上，筛选获得目的菌株，其机理是______。
②若通过抗原一抗体杂交实验检测到酵母蛋白中含tag标签，说明______，后续实验可借助tag标签进行蛋白M的分离纯化。

2 . 根据新冠病毒致病机制及人体免疫反应特征研制新冠疫苗，广泛接种疫苗可以快速建立免疫屏障，阻击病毒扩大。图1为新冠病毒入侵细胞后的增殖示意图，图2为人体免疫应答产生抗体的一般规律示意图。请据图回答下列问题。

(1)图1中，新冠病毒通过S蛋白与细胞表面的ACE2受体结合，侵入细胞释放出病毒的（+）RNA，在宿主细胞中经____________合成病毒的RNA聚合酶。
(2)在RNA聚合酶的作用下，病毒利用宿主细胞中的原料，按照__________原则合成（-）RNA。随后大量合成新的（+）RNA。再以这些RNA为模板，分别在____________大量合成病毒的N蛋白和S、M、E蛋白。
(3)制备病毒灭活疫苗时，先大量培养表达___________的细胞，再接入新冠病毒扩大培养，灭活处理后制备疫苗。细胞培养时需通入CO₂，其作用是______________。
(4)制备S蛋白的mRNA疫苗时，体外制备的mRNA常用脂质分子包裹后才用于接种。原因一是人体血液和组织中广泛存在__________，极易将裸露的mRNA水解，二是外源mRNA分子不易进入人体细胞产生抗原。
(5)第一次接种疫苗后，人体内识别到S蛋白的B细胞，经过增殖和分化，形成的________细胞可合成并分泌特异性识别__________的IgM和IgG抗体（见图2），形成的______细胞等再次接触到S蛋白时，发挥免疫保护作用。

(6)有些疫苗需要进行第二次接种，据图2分析进行二次接种的意义是________。

3 . 正常人体在黎明觉醒前后肝脏生糖和胰岛素敏感性都达到高峰，伴随胰岛素水平的波动，维持机体全天血糖动态平衡，约50%的Ⅱ型糖尿病患者发生“黎明现象”（黎明时处于高血糖水平，其余时间血糖平稳），是糖尿病治疗的难点。请回答下列问题。

(1)人体在黎明觉醒前后主要通过___________分解为葡萄糖，进而为生命活动提供能源。
(2)如图所示，觉醒后人体摄食使血糖浓度上升，葡萄糖经GLUT2以__________方式进入细胞，氧化生成ATP，ATP/ADP比率的上升使ATP敏感通道关闭，细胞内K⁺浓度增加，细胞膜内侧膜电位的变化为______________，引起钙通道打开，Ca²⁺内流，促进胰岛素以____________方式释放。
(3)胰岛素通过促进____________、促进糖原合成与抑制糖原分解、抑制非糖物质转化等发挥降血糖作用，胰岛细胞分泌的___________能升高血糖，共同参与维持血糖动态平衡。
(4)Ⅱ型糖尿病患者的靶细胞对胰岛素作用不敏感，原因可能有：_____________（填序号）
①胰岛素拮抗激素增多   ②胰岛素分泌障碍     ③胰岛素受体表达下降       ④胰岛素B细胞损伤   ⑤存在胰岛细胞自身抗体
(5)人体昼夜节律源于下丘脑视交叉上核SCN区，通过神经和体液调节来调控外周节律。研究发现SCN区REV-ERB基因节律性表达下降，机体在觉醒时糖代谢异常，表明“黎明现象”与生物钟紊乱相关。由此推测，Ⅱ型糖尿病患者的胰岛素不敏感状态具有_____________的特点，而_____________可能成为糖尿病治疗研究新方向。

4 . 线粒体对维持旺盛的光合作用至关重要。下图示叶肉细胞中部分代谢途径，虚线框内示“草酰乙酸/苹果酸穿梭”，请据图回答下列问题。

(1)叶绿体在___上将光能转变成化学能，参与这一过程的两类色素是_____。
(2)光合作用时，CO₂与C₅结合产生三碳酸，继而还原成三碳糖（C₃），为维持光合作用持续进行，部分新合成的C₃必须用于再生______；运到细胞质基质中的C₃可合成蔗糖，运出细胞。每运出一分子蔗糖相当于固定了___个CO₂分子。
(3)在光照过强时，细胞必须耗散掉叶绿体吸收的过多光能，避免细胞损伤。草酸乙酸/苹果酸穿梭可有效地将光照产生的______中的还原能输出叶绿体，并经线粒体转化为______中的化学能。
(4)为研究线粒体对光合作用的影响，用寡霉素（电子传递链抑制剂）处理大麦，实验方法是:取培养10~14d大麦苗，将其茎浸入添加了不同浓度寡霉素的水中，通过蒸腾作用使药物进入叶片。光照培养后，测定，计算光合放氧速率（单位为µmolO2•mg^-1chl•h^-1，chl为叶绿素）。请完成下表。

实验步骤的目的	简要操作过程
配制不同浓度的寡霉素丙酮溶液	寡霉素难溶于水，需先溶于丙酮，配制高浓度母液，并用丙酮稀释成不同药物浓度，用于加入水中
设置寡霉素为单一变量的对照组	①_______________
②_______________	对照组和各实验组均测定多个大麦叶片
光合放氧测定	用氧电极测定叶片放氧
③_______________	称重叶片，加乙醇研磨，定容，离心，取上清液测定

5 . 为提高一株石油降解菌的净化能力，将菌涂布于石油为唯一碳源的固体培养基上，以致死率为90%的辐照剂量诱变处理，下列叙述不合理的是（       ）

A．将培养基分装于培养皿中后灭菌，可降低培养基污染的概率

B．涂布用的菌浓度应控制在30~300个/mL

C．需通过预实验考察辐射时间对存活率的影响，以确定最佳诱变时间

D．挑取培养基上长出的较大单菌落，给纯化后进行降解效率分析

6 . 数据统计和分析是许多实验的重要环节，下列实验中获取数据的方法合理的是（       ）

编号	实验内容	获取数据的方法
①	调查某自然保护区灰喜鹊的种群密度	使用标志重捕法，尽量不影响标记动物正常活动，个体标记后即释放
②	探究培养液中酵母菌种群数量的变化	摇匀后抽取少量培养物，适当稀释，用台盼蓝染色，血细胞计数板计数
③	调查高度近视（600度以上）在人群中的发病率	在数量足够大的人群中随机调查
④	探究唾液淀粉酶活性的最适温度	设置0℃、37℃、100℃三个温度进行实验，记录实验数据

A．实验①

B．实验②

C．实验③

D．实验④

7 . 下表和图为外加激素处理对某种水稻萌发影响的结果。萌发速率（T₅₀）表达最终发芽率50%所需的时间，发芽率为萌发种子在总数中的比率。“脱落酸一恢复”组为1.0mmol/L脱落酸浸泡后，洗去脱落酸。下列相关叙述正确的是（       ）

激素浓度（mmol/L）	平均T50（h）
	赤霉素	脱落酸
0	83	83
0.01	83	87
0.1	82	111
1.0	80	未萌发
2.5	67	未萌发

A．0.1mmol/L浓度时，赤霉素的作用不显著，脱落酸有显著抑制萌发作用

B．1.0mmol/L浓度时，赤霉素促进萌发，脱落酸将种子全部杀死

C．赤霉素仅改变T50，不改变最终发芽率

D．赤霉素促进萌发对种子是有益的，脱落酸抑制萌发对种子是有害的

9 . 为了推进乡村振兴，江苏科技人员在某村引进赤松茸，推广“稻菇轮作”露地栽培模式，如下图所示，相关叙述正确的是（       ）

A．当地农田生态系统中引进的赤松茸，是该系统中的生产者之一

B．该模式沿袭了“无废弃农业”的传统，菌糠和秸秆由废弃物变为了生产原料

C．该模式充分利用了水稻秸秆中的能量，提高了能量传递效率

D．该模式既让土地休养生息，又增加了生态效益和经济效益