1 . 四环素（）属于有机化合物，是一类广谱抗生素，在动物体内不能被完全吸收，在环境中会严重影响土壤生态环境和植物生长，对人类健康构成潜在危害。为快速有效地清除环境中的四环素残留，科研人员进行了如下图所示操作，欲从土壤中筛选四环素高效降解微生物。回答下列问题：

   

(1)用于培养能分解四环素的微生物的培养基成分有___、氮源、水、无机盐等，该培养基需要经过___（填灭菌方法）后才能使用。
(2)科研人员取土壤样品加入无菌水中置于30℃、150r·min^-1恒温摇床上进行振荡培养，富集结束后运用___法获得单菌落，挑选平板上菌落外观形态___（填“相同”或“不同”）的单菌落，获得四环素降解微生物，再进一步分离纯化。
(3)若选择稀释倍数为的菌液进行计数，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液后，平板中的菌落数分别为36、38、40，则每克土壤中含有的菌落数为___个，该方法统计的数目比实际活细菌少，原因是___。

2 . 黑索金是一种危险的污染物，会渗入到土壤和饮用水中。柳枝稷是一种可修复部分土壤污染物的植物，但其吸收黑索金的能力很弱，研究者利用基因工程技术，导入XplA基因可提高柳枝稷修复黑索金污染土壤能力，据此回答相关问题：

(1)欲获得转基因柳枝稷植物，还需要将图中的农杆菌细胞感染___细胞，再经过___技术培养出植株。
(2)将XplA基因与质粒构建表达载体时，应选择___和___两种酶进行酶切，与只用一种酶切割相比，优点是___。
(3)为了筛选含有目的基因的农杆菌，应先培养在含有___的培养基A上，再培养在含有___的培养基B中。若某农杆菌在培养基A、B中都长出菌落，则___（填“是”或“不是”）含有目的基因的农杆菌。
(4)从个体水平思考，写出鉴定柳枝稷是否具有分解黑索金的实验思路___。

6 . 穴位（学名腧穴），是脏腑、经络气血输注出入的特殊部位，也是针灸、推拿等疗法的主要施术部位，，多为神经末梢密集或较粗的神经纤维经过的地方。针灸中不同针法（刺激形式和刺激量）可兴奋不同类型和数量的外周神经，达到减缓或治疗相应疾病的目的。下图1为针灸效应部分生理途径示意图，回答下列问题。
(1)针刺穴位有针感意味着_______被激活，并将信号转化为_______沿着神经纤维向神经中枢传导。针感的产生_______（填“是”或“不是”）反射活动。
(2)针灸强调“穴位有讲究，轻重不一样”，不同针法可引起不同类型的植物性神经兴奋或抑制。图2中甲、乙分别为利用细针和粗针进行针灸治疗时，针刺部位神经末梢的电位变化。细针治疗_______（填“引起”或“未引起”）动作电位，判断依据是_______。

研究还发现，针刺某穴位，A兴奋增加胰岛素分泌，B兴奋抑制胰岛素分泌，可知A、B分别为_______神经。
(3)为研究针灸对糖尿病大鼠血糖及胰岛素分泌的影响，根据下列实验材料补充完善实验思路并分析实验结果。
实验材料：健康的生长状况一致的大鼠若干只，链脲佐菌素（STZ）试剂（STZ是一种特异性破坏胰岛β细胞的药物），胰岛素制剂，电针等。
实验思路：
①制备糖尿病模型大鼠。
随机取健康的生长状况一致的大鼠若干，高糖高脂饮食4周，同时注射_______建立糖尿病模型大鼠。
②将糖尿病模型大鼠，随机均分为A、B、C三组。
A组：糖尿病模型大鼠，正常饮食。
B组：糖尿病模型大鼠， _______，正常饮食。
C组：糖尿病模型大鼠，选取“足三里”等穴位，每天针灸，正常饮食。
D组： _______，正常饮食。
在相同且适宜的条件下，共进行为期1个月的实验，每周测定_______。
③统计分析实验数据。
回答下列问题：
a．将实验思路补全。①_______；②_______；_______；_______。
b．设计实验结果记录表。_______
c．分析与讨论：和药物治疗比，针灸治疗糖尿病的优势在于_______，其机制可能涉及_______的调节，其中可能属于针灸对特异性体液免疫调节影响的有哪些？_______
A．针灸可促进辅助性T细胞分泌细胞因子
B．针灸可促进B细胞的活化及B细胞的增殖分化
C．针灸有利于加速效应细胞毒性T细胞诱发靶细胞凋亡
D．针灸可促进免疫球蛋白的合成和分泌

10 . 某课题组将盐生植物碱茅的抗盐碱基因（PuCAT）导入紫花苜蓿，培育紫花苜蓿新品种。回答下列问题。

   

注：图1中①④、②③为两对引物，PuCAT基因内部无SacI、BamHI、XbaI酶切位点：图2为构建表达载体的P3300质粒，Sac1、BamH1、Xba1为可以切出不同黏性末端的三种限制酶的识别位点，Bar为抗草铵膦基因，Kan^r为卡那霉素抗性基因、Amp^r为氨苄青霉素抗性基因。农杆菌对头孢霉素敏感。
(1)目的基因的获取和表达载体构建。依据_______设计引物，用PCR技术从碱茅的基因组中获取目的基因，然后与P3300质粒连接构建基因表达载体。为保证扩增出的PuCAT与P3300质粒正向连接且不出现自身环化，据图1和2分析，应分别在引物_______的5’端分别添加_______限制酶的识别序列。
(2)采用农杆菌转化法将目的基因导入苜蓿的子叶细胞。转化农杆菌时，应向培养液中添加_______以利于重组质粒进入农杆菌；然后利用含_______的选择培养基对完成转化的农杆菌进行筛选：农杆菌与紫花苜蓿子叶共培养时，重组P3300质粒上的_______可以携带PuCAT和Bar基因转移至植物细胞并整合至植物细胞的染色体DNA上：共培养后立即将子叶转移到含有_______的固体培养基上培养，以获得转化成功的子叶细胞。
(3)转基因植株的培育与检测。将完成转化的紫花苜蓿子叶接种到MS培养基中培养，经过_______或器官发生途径形成转基因植株。PCR检测转基因紫花苜蓿是否含目的基因，需用_______为阴性对照，水为空白对照，含目的基因的重组质粒为阳性对照。进一步检测目的基因表达，提取检测阳性的转基因紫花苜蓿总RNA，并使用逆转录酶，合成_______，进行PCR。经凝胶电泳检测结果为阳性，可以确定目的基因表达出了_______。