1 . 某研究小组将一组相同圆纸片放入不同浓度的麦迪霉素（一种抗生素）溶液中浸泡后，放在均匀地接种了大肠杆菌的培养基上培养，实验结果如下图。请分析并回答下列问题:

(1)在制备固体培养基时需加入的凝固剂，常用的是___________。
(2)图中出现透明圈的原因是________________________________________________________________。
实验结果表明，对大肠杆菌抑制作用最明显的是浓度为_______号（填图中序号）的麦迪霉素。
(3)该实验中，使用_____________________法接种大肠杆菌，在培养和接种大肠杆菌时要注意进行无菌操作。
(4)实验室还有另外一种接种法，即______________法，此种方法对接种环至少需进行______次灼烧灭菌。接种后盖上皿盖，需将平板__________，再放入培养箱培养。
(5)若该研究小组欲筛选能分解尿素的细菌，应使用以_______为唯一碳源的培养基，并加入_______________，便于进一步鉴定此菌。

2 . 自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中N₂的细菌，将玉米种子用自生固氮菌拌种后播种，可显著提高产量并降低化肥的使用量。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如下图。请回答下列问题：

(1)步骤①土样应取自当地_____（填“表层”或“深层”）土壤；步骤②需充分振荡20 min，主要目的是_____；步骤③将土壤悬浮液稀释了_____倍。
(2)下列为两种培养基的配方，步骤④应选其中的_____培养基，并加入琼脂后进行高压蒸汽灭菌、倒平板。纯化培养时，需同时进行未接种培养基的培养，目的是_____。
Ashby培养基：甘露醇（C₆H₁₄O₆） 10 g，KH₂PO₄ 0．2 g，MgSO₄·7H₂O 0．2 g，NaCl 0．2 g，K₂ SO₄ 0．3 g，CaCO₃ 5 g，蒸馏水1 000 mL。
LB培养基：蛋白胨10 g，酵母膏5g，NaCl 10 g，蒸馏水1000 mL，pH 7．0～7．2．
(3)将纯化的固氮菌置于完全培养液中扩大培养48 h，经离心后收集下层细胞并转移至箱定培养基中进行固氮能力的测定，筛选出固氮能力最强的菌种CM12，为进一步鉴定其固氮能力，科研人员选用发芽一致的玉米种子进行3组盆栽实验，30 d后测定土壤微生物有机氮含量，结果如下图。

N：尿素处理组[每盆土壤中浇灌50 mL有氮全营养液（在1000 mL无氮植物营养液中加入0．12 g尿素）]；CM12：自生固氮菌CM12处理组（每盆土壤浇灌50 mL接种自身固氮菌的无氮植物营养液）。
①对照组（CK）的处理为_____。
②实验结果表明，用尿素处理和接种固氮菌CM12处理均能显著增加土壤微生物有机氮含量。与尿素处理组相比，CM12处理组土壤微生物有机氮含量增加了约_____（保留l位小数）%。
③自生固氮菌较共生固氮菌（如根瘤菌）的应用范围更广，原因是_____。

3 . 科研人员通过实验研发含盐低，同时又保持产品质量与风味的腐乳，过程如下：①筛选分离菌种；②菌种扩大培养；③将含菌种的液体喷洒在豆腐块上，然后培养､装瓶､腌制；④腐乳品质评定：通过氨基酸态氮含量和感官评价对腐乳品质进行综合评定，结果如图｡请分析回答｡

(1)豆腐块为毛霉的生长提供的营养物质有_____｡腐乳制作的原理主要是利用微生物产生的_____酶水解蛋白质和脂肪｡
(2)步骤①中，将待筛选的菌种接种到特定的选择培养基上进行分离，挑选菌种接种于酪蛋白培养基上筛选出_____酶活力高的毛霉菌株｡
(3)步骤②菌种扩大培养时先将毛霉接种在斜面培养基上，此时的培养基中需要添加_____做为凝固剂｡培养一段时间后将菌种制成悬液，加一定浓度的盐水调节菌种数｡这些培养基都需要经过_____灭菌｡
(4)步骤③中，装瓶时需加入卤汤，在配置卤汤时，一般将酒的含量控制在_____左右｡步骤④中，水解产生的氨基酸态氮含量可代表_____｡
(5)据图分析，盐含量为_____左右适宜制作腐乳｡盐含量不宜过低，其原因是盐含量过低_____｡

4 . 对某品牌的一次性口罩和饮用水中的微生物进行检测，通过分析微生物的种类和数量来确定口罩和饮用水的合格性。准确取1g（近似1mL）样品，剪碎后加入到99mL无菌水中充分混匀，过程如下图，回答下列问题。

(1)步骤④的培养基中除含有水、无机盐外还应有______、______成分。培养基灭菌常用______锅进行灭菌。在进行灭菌时，压力达到设定要求而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因______。
(2)步骤⑤常采用平板划线的方法进行接种，此过程中所用的接种工具是______，操作时采用______灭菌的方法。对于优良菌种，菌种的传代和保存至关重要，______是菌种保存的重要条件。
(3)测定水样是否符合饮用水卫生标准，常用滤膜法测定大肠杆菌的数目。滤膜法的大致流程：用滤膜过滤待测水样→水样中的细菌留在滤膜上→将滤膜转移到伊红美蓝的培养基（EMB培养基）上培养→统计菌落数目。流程示意图如下图所示。其中，指示剂伊红美蓝可使大肠杆菌菌落呈紫黑色。请据图回答问题：

a．将完成过滤之后的滤膜紧贴在EMB培养基上，这属于微生物培养中的接种操作。从功能角度分析，EMB培养基属于______培养基，为检测培养基灭菌是否彻底，对于固体培养基应采用的检测方法是______。
b．某生物兴趣小组的某同学尝试按照上述方法进行测定，无菌操作下将10mL待测水样加入到90mL无菌水中，稀释后的菌液通过滤膜法测得EMB培养基上的菌落数平均为80，紫黑色菌落数平均为45，则推测1L街测水样中的大肠杆菌数目为______。该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要____________。

7 . 土壤中含有能将难溶性磷酸盐转变成植物可以吸收和利用的可溶性磷的优良菌株Q。图1是某同学利用平板划线法分离菌株Q的示意图，图2是分离鉴别菌株Q的结果。固体培养基中难溶性磷酸盐在菌株Q的作用下溶解，会在菌落周围形成透明圈，透明圈直径（D）与菌落直径（d）的比值（D/d）代表微生物溶解难溶性磷酸盐的能力大小。下表是初步筛选出的三种优良菌株。下列说法错误的是（       ）

菌株	透明圈直径（D）	菌落直径（d）
M-3-01	18.8	12.3
B3-5-6	20.7	8.0
T-4-01	9.1	6.5

A．在牛肉膏蛋白胨培养基上进行图1操作后培养可获得图2

B．图1所用方法不能用于计数样品中活菌的数目

C．图1中，整个过程需要对接种环至少进行6次灼烧

D．根据实验结果分析溶解难溶性磷酸盐能力最强的菌株是B3-5-6

9 . 解磷菌是一种能将土壤中植物不能利用的磷转化为植物可以利用磷的功能微生物(主要为细菌)，在提高土壤中有效磷含量、促进磷循环方面发挥着重要作用。解磷菌能分解含磷化合物使得菌落周围出现透明圈。下图为从某植物根际土壤中筛选出高效解磷菌的部分流程示意图，步骤Ⅰ表示将1 g土壤加入100 mL灭过菌的PVK培养基培养。36 h后，取10 mL培养液接种于100 mL PVK培养基继续富集培养；连续富集培养3次后进行实验步骤ⅡⅣ(B、C中培养基的营养成分与A相同)。请据图回答：

(1)用于培养解磷菌的培养基在接种前需要通过_________法进行灭菌。从成分上看，与A相比，B中多了____________(填物质名称)。
(2)在操作Ⅱ、Ⅲ中，采用的接种方法分别是___________、____________。
(3)为了尽快观察到解磷菌培养的实验结果，应将接种了样品的平板倒置于___________中培养，并同时在另一平板上接种无菌水作为对照进行实验。
(4)在固体培养基中分离培养出解磷菌后，需通过测量___________________直径，比较它们的比值以确定其解磷能力从而筛选出目标菌株。
(5)分离出的解磷菌，需通过分子鉴定以确定种属关系。常用的方法是对细菌的核糖体RNA(16S rRNA)所对应的16S rDNA进行序列分析(基因公司测序)，在测序前一般采用菌落PCR的方法进行扩增。

①在PCR实验的具体操作时，按照事先设计好的配方用_______________向微量离心管中依次加入各组分，按照上图的设计设置好PCR程序，其中a表示________________。
②在进行菌落PCR时，首先根据____________两端的脱氧核苷酸序列来设计引物。已知相关的上游引物序列为5'-GCAATGCGTAGCCTCT—3'，则下游引物的序列最合适的是_______。
a． 5'—ACAATATGTATAATCT—3' b． 5'—TCATGAGCGCATAGTT—3'
c． 5'—GCAATGCGTGCATTGC—3' d． 5'—AGAGGCTACGCATTGC—3'
③PCR 扩增时，除加入16S rDNA作为模板、引物外还需要加入________________等，如果将其复制20次，需要引物________对。

10 . 乳酸菌常用于制作酸奶、泡菜等发酵食品。某研究小组对乳酸菌的分离、培养及其抗药性进行相关的研究，回答下列问题：

(1)在分离、培养乳酸菌时配制培养基必须加入_____四类主要的营养物质。对培养基进行灭菌的常用方法是_____ 。
(2)接种微生物的方法有很多，图中的接种方法为_____。用该方法统计样本菌落数后求出平均值，所得数据需要乘以10ⁿ后，才可表示乳酸菌的数量（单位：个/L），这里的n=_____。
(3)研究小组为了检测某品牌酸奶中乳酸菌对青霉素、四环素的耐药性，进行了如下实验，请完善实验操作步骤：
步骤1：取三组培养基编号，分别加入_____。
步骤2：向三组培养基中分别接种等量待检测的乳酸菌菌种。
步骤3：将接种后的三组培养基和一个未接种的培养基都置于适宜温度等条件下培养一定时间，观察比较培养基中菌落生长情况。放置未接种培养基的目的是_____。
(4)在泡菜发酵过程中会产生亚硝酸盐， 为了把握取食泡菜的最佳时机，在腌制过程中要注意控制腌制时间、温度和_____以降低亚硝酸盐的含量。研究小组定期测定亚硝酸盐含量的方法是_____。