21. 荧光蛋白GFP在紫外线或蓝光激发下会发出绿色荧光,这一特性可以用于检测细胞中目的基因的表达。科研团队将人β-酪蛋白基因与GFP基因连接,获得了β-酪蛋白-GFP融合基因(简称甲),将其插入质粒P0,构建了基因表达载体P1,其部分结构如图所示,图中E1、E2为两种限制酶酶切位点。回答下列问题:
(1)构建融合基因甲时需要将β-酪蛋白基因编码链(转录时与模板链互补的DNA单链)的
___端与GFP基因编码链的
___端相连。为保证甲的完整性及其与质粒PO正确连接,实验中选择的限制酶E1和E2必须满足的条件是
___(答两点)。基因表达载体P1除了具有图示结构外,还应具备的结构有
___。
(2)若编码β-酪蛋白的DNA片段序列是:5′-TTCGCTTCT……CAGGAAGGA-3′,扩增该基因时,在PCR仪中加入的引物的碱基序列为
___。
(3)科研团队将P1转入山羊乳腺细胞后,在该细胞中观察到了绿色荧光。为获得能生产β-酪蛋白的山羊,还应该完成的主要工作包括:将能够产生绿色荧光的
___移入
___中,体外培养至
___时期,再进行胚胎移植等。其中,进行体外胚胎培养时所需的气体环境是
___。
(4)检查生产人β-酪蛋白的转基因山羊是否培育成功,还需要进行分子水平的检测,利用PCR技术可以检测
___(答两点)。