1 . 我们的生活离不开传统发酵技术制作的食品，酸奶、果酒、果醋、泡菜等极大地满足了人们对饮食多元化的需求。下列相关叙述错误的是（       ）

A．制作酸奶与制作泡菜控制发酵的气体条件是一致的

B．酿果酒时无需对葡萄严格消毒，原因是缺氧、酸性的发酵液抑制了其他微生物的生长

C．变酸的酒表面和制作泡菜的坛内都会有白膜出现，都是醋酸菌大量繁殖形成的

D．家庭制作的泡菜因早期亚硝酸盐含量高而不宜过早食用，需等到亚硝酸盐含量较低后食用

2 . 乳糖不耐受患者肠道内的乳糖无法被身体吸收利用，进而被部分大肠内的菌群利用，其代谢产物包含较多气体和酸类，导致身体不适。下列相关叙述不合理的是（　　）

A．患者消化道内缺乏乳糖酶

B．乳糖为肠道菌群提供氮源

C．乳糖水解成葡萄糖和半乳糖

D．乳糖耐受和不耐受属于相对性状

3 . （一）回答与甘蔗醋制作有关的问题：
(1)为了获得酿造甘蔗醋的高产菌株，以自然发酵的甘蔗渣为材料进行筛选。首先配制醋酸菌选择培养基：将适量的葡萄糖、KH₂PO₄、MgSO₄溶解并定容，调节pH，再高压蒸汽灭菌，经_____后加入3%体积的无水乙醇。然后将10g自然发酵的甘蔗渣加入选择培养基，振荡培养24h。用_____将少量上述培养液涂布到含CaCO₃的分离培养基上，在30℃培养48h。再挑取分离培养基上具有_____的单菌落若干，分别接种到与分离培养基成分相同的_____培养基上培养24h后，置于4℃冰箱中保存。
(2)优良产酸菌种筛选。将冰箱保存的菌种分别接入选择培养基，培养一段时间后，取合适接种量的菌液在30℃、150r/min条件下振荡培养。持续培养至培养液中醋酸浓度不再上升，或者培养液中_____含量达到最低时，发酵结束。筛选得到的优良菌种除了产酸量高外，还应有_____（答出2点即可）等特点。
(3)制醋过程中，可将甘蔗渣制作成固定化介质，经_____后用于发酵。其固定化方法为_____。
（二）回答与基因工程和植物克隆有关的问题：
(4)天然农杆菌的Ti质粒上存在着一段DNA片段（T-DNA），该片段可转移并整合到植物细胞染色体上。为便于转基因植物在组织培养阶段的筛选，设计重组Ti质粒时，应考虑T-DNA中要有可表达的目的基因，还需要有可表达的_____。
(5)结合植物克隆技术进行转基因实验，为获得转基因植株，农杆菌侵染的宿主一般要选用具有优良性状、较高的遗传稳定性、_____及易被农杆菌侵染等特点的植物材料。若植物材料对农杆菌不敏感，则可用_____的转基因方法。
(6)利用带侧芽的茎段获得丛状苗的过程与利用茎段诱导产生愈伤组织再获得丛状苗的过程相比，前者总培养时间短，且不经历_____过程，因而其遗传性状稳定，是大多数植物快速繁殖的常用方法。
(7)与发芽培养基相比，配制转基因丛状苗生根培养基时，可根据实际情况适当添加_____，促进从状苗基部细胞分裂形成愈伤组织并进一步分化形成_____，最终形成根。还可通过改变MS培养基促进生根，如_____（A．提高蔗糖浓度B．降低培养基浓度C．提高大量元素浓度D．不添加琼脂）。

4 . 大肠杆菌是人和动物的肠道寄生菌，在一定条件下会引起胃肠道等局部组织感染。检验水样中大肠杆菌数目是否符合生活饮用水卫生标准，常用滤膜法测定，其操作流程如图。大肠杆菌的代谢产物能与伊红美蓝（EMB）培养基的指示剂反应，菌落呈黑色。下列对实验操作的分析，正确的是（       ）
   

A．EMB培养基属于选择培养基，只有大肠杆菌能正常生长并形成黑色菌落

B．配制EMB培养基时，需考虑大肠杆菌所需要的营养物质及pH等条件

C．配制好的培养基一般倒置，防止冷凝水滴至培养基造成污染

D．测定前，滤杯、滤膜和滤瓶均可用干热灭菌法灭菌处理

5 . 家禽的饲料中富含谷物，纤维素是谷物的重要成分，但家禽消化道中缺少能降解纤维素的酶，阻碍了家禽对饲料的吸收与利用。研究人员利用转基因技术改造乳酸杆菌，将其添加到饲料中，以提高家禽养殖效率。枯草芽孢杆菌能分泌一种可降解纤维素的酶，这种酶由W基因编码。为在乳酸杆菌中表达W基因，需使用图1中质粒作为载体，图2为含W基因的DNA片段。回答下列问题：

(1)家禽肠道内的乳酸菌可利用葡萄糖通过细胞呼吸产生酸性物质，抑制有害细菌的生长和繁殖，维持肠道的正常功能，请写出相关的反应式：____________。
(2)利用PCR技术扩增W基因时，用到的DNA聚合酶与普通的酶相比，具有的特点是____________。扩增完成后，常采用____________法来鉴定PCR的产物。为得到含W基因的乳酸杆菌，可采用平板划线法纯化乳酸杆菌，进行划线操作要注意：____________。
(3)W基因以乙链为转录模板链，转录时mRNA自身延伸的方向为5′→3′。下表是几种限制酶的识别序列及切割位点，图1、图2标注了相关限制酶的酶切位点。为获得能正确表达W基因的重组质粒，切割质粒应选用的限制酶是________，切割含W基因的DNA片段应选用的限制酶是________。

限制酶	EcoRI	BamHI	KpnI	MfeI	HindШ
识别位点	5′G↓AATTC 3′ 3′CTTAA↓G5′	5′G↓GATCC3′ 3′CCTAG↓G5′	5′GGTAC↓C3′ 3′C↓CATGG5′	5′C↓AATTG3′ 3′GTTAA↓C5′	5′A↓AGCTT3′ 3′TTCGA↓A 5′

6 . 为获得利福平和链霉素双抗的黄色短杆菌菌株，科研人员用现有的甲、乙两种菌株进行细菌细胞融合（基本过程与植物体细胞杂交一致）。菌株甲抗利福平（Rif^r）对链霉素敏感（Str^S）。菌株乙对利福平敏感(Rif^S)但是抗链霉素（Str^r）下列叙述正确的是（       ）

A．过程①中需要用纤维素酶和果胶酶处理细菌甲和细菌乙

B．为避免原生质体失水而影响融合，应将制备好的原生质体置于低渗环境中

C．融合后的融合子有3种，可用含利福平和链霉素的液体培养基进行筛选

D．过程②体现了细胞膜的流动性，PEG同样也可以诱导动物细胞融合

8 . 细菌X合成的tcel蛋白和tcil蛋白使其在与其他细菌的竞争中占优势，其中tcel蛋白是一种有毒性的分泌蛋白。研究人员利用野生型细菌X及其不同突变体进行了实验：在固体培养基表面放置一张能隔离细菌的滤膜，将一种菌（下层菌）滴加在滤膜上后再放置第二张滤膜，滴加等量的另一种菌（上层菌），共同培养后，对上、下层菌计数得到如下图结果。下列分析不正确的是（　　）

A．实验中的培养皿、固体培养基和滤膜均需要进行消毒处理

B．对上、下层菌计数时应采用稀释涂布平板法而不能用显微镜直接计数

C．由甲、乙、丙三组结果可推测tcil蛋白能够中和tcel蛋白的毒性

D．野生型细菌X在与tcel-tcil双突变体和tcel突变体的竞争中均占优势

9 . 根瘤菌能与豆科植物共生形成根瘤，将空气中的氮气还原成氨供给植物营养。科研人员进行了土壤中根瘤菌的分离和纯化培养，实验流程如图所示。下列说法正确的是（　　）

A．步骤①土壤样品的获取过程既要遵循无菌操作原则又要进行高压蒸汽灭菌

B．步骤④选择的纯化培养基的营养成分应该包括各种营养物质

C．根据步骤④培养基上的菌落特征可判断土壤中含有不同固氮能力的根瘤菌

D．若步骤④平板上统计根瘤菌菌落数平均为150个，则每克土壤含根瘤菌约1．5×108个