2 . 蜘蛛丝由于其出色的强度、韧性、弹性、生物可降解性等，使得它有广泛的用途。MaSp2是蜘蛛丝中综合性能最优异牵引丝的主要组成蛋白。研究人员通过比对分析金纺蜘蛛MaSp2蛋白的N-端重复区的12段相似的氨基酸序列，得出一段重复度较高的核心氨基酸序列，根据大肠杆菌密码子的偏好性，用氨基酸序列推出基因序列（MaSp2基本单元基因—Spin基因）。设计5段存在互补序列的引物（表1），采用重叠延伸PCR技术（图1）对该基因进行人工合成，并在该基因的两端各加上两个酶切位点（表2）。将获得的Spin基因与载体pET28a通过酶切、连接形成重组质粒表达载体pET28a-Spin。请回答下列问题：

(1)图1中重叠延伸PCR中的引物3和引物4分别对应表1中的____；Spin基因中的限制酶a和限制酶c分别对应表2中的____。
(2)重叠延伸PCR反应体系中除5种引物序列及含Mg²⁺的缓冲液外，还需添加____。
(3)过程1需要用到的酶有____。
(4)图2所示为研究人员利用同尾酶无缝拼接技术，将合成好的Spin基因片段继续拼接，得到Spin2、Spin4、Spin8、Spin16、Spin32串联体，并将相应片段克隆至表达载体pET28a，构建相应表达盒。单酶切1和单酶切2所用的限制酶分别是____；Spin2串联体和Spin4串联体分别含有____个限制酶BfaⅠ的识别序列。

(5)将构建好的表达盒导入处于____的大肠杆菌BL21中获得MaSp2蛋白表达菌体。将菌体接种至____（选填“液体培养基”“固体培养基”）中培养。运用SDS-PAGE蛋白电泳分析MaSp2蛋白表达情况，结果如下图。

M：Marker
1：空载体对照
2：工程菌 pET28a-Spin32 纯化蛋白
3：工程菌 pET28a-Spin16 纯化蛋白
4：工程菌 pET28a-Spin8 纯化蛋白
结果说明：____串联体重组蛛丝蛋白能够正确表达，随着蛋白分子量的提高，蛋白异源表达的难度也逐渐____。

5 . 在光反应中，电子和质子传递途径如图1所示。有氧呼吸第三阶段电子和质子传递途径如图2所示。其中A、B表示物质，①~③表示过程。请回答下列问题：

   

(1)图1中PSI和PSII镶嵌在叶绿体的____上，它们以串联的方式协同完成电子由____（物质）释放，最终传递给____（A），合成了B。
(2)图1中光照驱动下，伴随着电子的传递通过PQ将叶绿体基质中H⁺转运至____，H⁺通过____方式进入叶绿体基质，光反应产生的____用于暗反应中C₃的还原。
(3)图2中②过程中的电子供体是____，释放的电子最终被____接受生成水。①③过程的ATP合成酶的作用是____。
(4)在酸性环境中，2，4-二硝基苯酚（DNP）能结合并携带质子顺浓度梯度跨过线粒体内膜，从而破坏膜内外质子的浓度梯度，使能量以热能形式散失。DNP曾被不良商家作为减肥药售卖，它可能对人体产生的危害有____。