1 . (一）科学家用植物细胞杂交方法，将番茄的原生质体和马铃薯的原生质体融合，成功地培育出了“番茄-马铃薯”杂种植株，如图1所示，其中①～⑤表示过程，英文字母表示细胞、组织或植株。育种工作者还利用番茄进行了如下三组实验如图2。据图回答下列问题：

(1)实现过程②的原理是_____________，从④到⑤需要更换新的培养基，原因是_____________。
(2)过程②后，在光学显微镜下观察融合的活细胞中有供体的_____________（细胞器）存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。
(3)若番茄细胞内有m条染色体，马铃薯细胞含n条染色体，则“番茄-马铃薯”细胞内最多含_____________条染色体；若杂种细胞培育成为“番茄-马铃薯”植株为四倍体，则此杂种植株的花粉经离体培育得到的植株属于_____________倍体植株。
(4)如果形成c细胞的a、b细胞都是番茄细胞，那么更简单的得到番茄植株f的处理方法是_____________处理。
（二）随着新冠疫情的持续，人类消耗了大量的一次性口罩，这些口罩不及时处理会对环境造成一定的污染。某科研人员欲筛选出能高效降解一次性口罩（主要成分是由C、H两种元素组成的聚丙烯纤维）的细菌，设计了如图所示的流程。回答下列问题：

(5)筛选目的菌的培养基应以______为唯一碳源。
(6)图中“甲”指的是_______________，目的是____________ 。
(7)已知目的菌分解聚丙烯纤维需要多种酶的共同参与，如果用凝胶色谱法分离其中的酶，相对分子质量小的酶移动速度______。目的菌比酶分子大得多，工厂化降解聚丙烯纤维时，通常采用______法来固定目的菌。影响目的菌降解聚丙烯纤维效果的因素有温度、pH以及_________________等（答出两点即可）。
(8)若在3个细菌培养基平板上均接种稀释倍数为10⁵的土壤样品0.1mL，培养一段时间，平板上菌落数分别为35个、33个、34个，则可推测每克土壤样品中的细菌数为______个。运用这种方法统计的结果往往较实际值偏小，原因是_______________。

2 . 目前市场上果酒越来越受人们的青睐。请回答下列与果酒制作有关的问题：
(1)葡萄酒制作过程中，在没有严格灭菌的条件下，通过控制温度和______的措施，使酵母菌大量繁殖而成为优势菌种。纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即稀释涂布平板法和_______。
(2)固定化酵母细胞可以用来生产果酒，固定酵母细胞常用_______法，该方法常用的载体有_______（答出一种）。与常规果酒发酵相比，利用固定化的酵母菌进行发酵的优点是_______（答出两点）。
(3)可以利用超市买来的新鲜红葡萄自制果酒，在榨汁前对葡萄进行的操作是______，在发酵过程中，随着酒精度数的提高，发酵液逐渐呈现深红色，原因是_____。

3 . 回答下列（一）、（二）小题：
（一）山楂果浆黏度大，含有丰富的果胶。为提高山楂果汁的产量，某兴趣小组从土壤中分离产果胶酶的微生物，并探究温度对果胶酶活性的影响，进行了下列实验。
(1)若要分离产果胶酶菌株，需配制以_____为唯一碳源的培养基，该培养基能分离目的菌株的原因是_____。
(2)将从果园采集的土壤放入适量的_____中，振荡混匀制成土壤悬液，备用。
①为获得均匀分布的单菌落，先将土壤悬液进行_____处理，然后将处理后的土壤悬液接种于_____（物理状态）培养基上。该方法也可用于测定产果胶酶菌的数量，但测定的菌体数量通常比实际值_____。
②由于酶在水溶液中很不稳定，且不利于工业化使用。因此采用固定化酶技术，固定果胶酶时，将海藻酸钠和果胶酶的混合液注入CaCl₂溶液后，形成凝胶珠，若形成的凝胶珠偏大将导致_____使酶的作用效率下降。
（二）干扰素是一种糖蛋白，具有抗病毒、抗细胞分裂和免疫调节等多种生物学功能，是治疗病毒性肝炎和肿瘤的药物。传统生产干扰素的方法是从人血液中提取，产量极低，治疗费用大。下图是科学家利用大肠杆菌生产人体干扰素的操作过程如下：

(3)若干扰素基因核苷酸序列是未知的，我们可以建立一个包括目的基因在内的_____，从中找到想要研究的目的基因。
(4)①过程表示在人体淋巴细胞中获得干扰素mRNA后，经_____过程获得干扰素基因甲。
(5)②③④过程表示利用PCR（_____反应）技术扩增基因甲（其中②表示在95℃下，双链DNA解旋成为单链DNA），请说出利用该过程进行DNA克隆不同于体内DNA复制的方面是_____（说出两点）。
(6)在利用甲、乙获得丙的过程中，常用两种限制酶同时切割甲和乙，避免发生_____，而获得更多的所需重组质粒。将重组质粒导入大肠杆菌之前，需用Ca²⁺处理，使细胞处于_____的生理状态，称为感受态。完成导入一段时间后，从大肠杆菌细胞中提取蛋白质，采用_____技术进行检测，若有杂交带出现则表明干扰素基因成功表达。
(7)与传统提取的干扰素相比较，利用大肠杆菌生产的干扰素缺乏糖链的原因是_____。

4 . 固定化技术实现了酶或细胞的重复利用，节约成本，还有利于产物提纯，提高产品质量。下列关于“α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测”实验的相关叙述错误的是（       ）

A．α-淀粉酶可以被固定化的原因之一是其不能溶于水

B．筛选高效分泌α-淀粉酶枯草杆菌时培养基pH不宜高于7．5

C．石英砂并非是α-淀粉酶的唯一介质

D．固定化酶柱放置在4℃冰箱中保存是因为低温酶的结构不易被破坏

5 . （一）乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类革兰氏阳性细菌的总称，经革兰氏染色后呈紫色。分离乳酸菌常用MRS固体培养基：蛋白5g、牛肉膏5g、酵母提取物2.5g、柠檬酸二铵1g、水500mL、乙酸钠2.5g、K₂HPO₄ 1 g、MNSO_4.●4H₂O 0.125g、琼脂12.5g、MgSO_4●7H₂O 0.29g、CaCO₃5g、葡萄糖10g。请回答：
(1)MRS培养基中琼脂的作用是____。MRS培养基需要用高压蒸汽灭菌法灭菌，灭菌时设置的压力和时间分别为_____、_____。灭菌后制作平板用于实验，对平板进行无菌检测的方法是______。使用涂布法分离乳酸菌，培养后发现平板上形成的单菌落周围会产生CaCO₃溶解圈，溶解圈大小能够反映_______。
(2)若用革兰氏染色法对大肠杆菌进行染色，结果______ （填“是”或“否”）呈紫色。
(3)用乳酸菌制作酸乳时，可对乳酸菌进行固定化处理，方法为：称取适量海藻酸钠配成水溶液，加入乳酸菌并搅拌均匀，以一定速度滴入CaCI₂溶液中形成凝胶，使其凝固成珠状。上述采用的固定方法是_______，凝胶珠捞出后要用无菌水冲洗，目的是洗去______。
(4)乳酸菌可用于泡菜制作。在对泡菜制作过程中的亚硝酸盐定量检测时，若样液测定时的比色杯光程小于制作标准曲线时的比色杯光程，则测得的样液中亚硝酸盐含量___ （填“偏大”或“偏小”或“不影响”）；若泡菜样液测得的OD值过大，超出标准曲线，则最适宜的做法是___。
（二）下图表示某研究小组为研究水稻B基因表达对其卵细胞的影响的设计思路，其中Luc基因表达的荧光素酶能够催化荧光素产生荧光。

请回答：
(5)图中水稻B基因编码蛋白的序列和Luc基因拼接时，必须使用______酶，其作用是______。融合基因必须连接到启动子和终止子之间，其中启动子是______的结合位点。
(6)当愈伤组织细胞受到损伤时会分泌酚类物质吸引农杆菌移动过来，Ti质粒上的T-DNA可以_______。
(7)愈伤组织通过调节营养物质和生长调节剂的适当配比，可以诱导出______，由此再生出新植株。为获得植物克隆的成功，应尽量选择______的基因型。
(8)图中第一次鉴定筛选的目的是筛选出______。若借助Luc基因的表达产物来完成图中第二次鉴定筛选，则具体方法是_______ 。
(9)从转基因植株未成熟种子中分离出胚，观察到细胞内仅含一个染色体组，判定该胚是由未受精的卵细胞发育形成的，而普通水稻的卵细胞是不进行发育的，这表明水稻B基因的表达能使其卵细胞___，而B基因在普通水稻卵细胞中是___ （填“表达”或“不表达”的）。

6 . 下列关于传统发酵技术的叙述正确的是（       ）

A．为了提高果醋的产量，可将醋酸杆菌进行固定化处理

B．制作果酒时应适时排气，后期可延长排气间隔时间

C．利用果酒制作果醋时需降低温度，以利于醋酸发酵

D．泡菜发酵初期，乳酸菌代谢旺盛，乳酸含量增加

7 . 啤酒是以大麦为主要原料经酵母菌发酵制成的，其工业化生产的简易流程如下：①大麦种子发芽，释放淀粉酶；②加热杀死种子胚但不使淀粉酶失活；③将干燥的麦芽碾磨成麦芽粉；④糖化并过滤得麦汁；⑤麦汁蒸煮；⑥加入酵母菌，发酵；⑦过滤，77℃保温30分钟；⑧过滤、分装啤酒进行出售。请回答：
(1)大麦种子萌发过程中，受细胞分裂素、____________等激素的影响，后者可增加促进淀粉酶的形成，便于动员贮藏的养分
(2)流程④若利用一定量的麦芽本身所含的酶进行糖化，则影响糖化的主要因素除pH、温度等环境因素外，还有__________________（答出2点）。流程⑤蒸煮的目的是______________，从而杀菌并稳定麦汁组分，保证最终产品的质量。流程⑥在加入酵母菌前为避免高温杀死菌种，需将麦汁进行____________。
(3)生产过程中需对啤酒酵母进行质量检测包括出芽率、耐酒精度、细胞数等。检测不同发酵阶段的酵母细胞数可采用的方法有_______________或者____________。为使酵母可长时间连续使用、提高设备利用率、发酵条件易于控制，生产上可利用___________进行发酵。
(4)可在相关标准范围内，加入适量的添加剂如单宁、硅胶、鱼胶等，改善啤酒的泡沫、风味和非生物稳定性并使啤酒澄清。此外，可使用_____________使其澄清。

8 . 回答下列（一）、（二）小题：
（一）回答果酒与果醋制作有关的问题：
(1)用干酵母作为发酵菌酿制果酒时，需先将适量干酵母放在小烧杯中，加入少量温水（＜40℃）和一小撮蔗糖制成_____，待其出现_____，表明干酵母已活化。
(2)酵母菌在生长繁殖和进行发酵时，会产生少量尿素，尿素会与酒精反应生成有害物质，可用脲酶处理予以分解，但在实际生产过程中不宜直接将脲酶加入酒体中，原因有_____（答出1点），可将脲酶和海藻酸钠混合，用注射器滴入凝结液中形成珠粒，这种固定化酶的方法称为_____。
(3)用果酒酿制果醋时，发酵瓶中先装八分满的经_____处理的锯末，然后加入含有醋杆菌的_____使醋杆菌附着在锯末上，成为固定化醋杆菌。采用固定化醋杆菌而不是固定化酶进行醋酸发酵的主要原因是_____。
(4)为进一步测定果醋中还原糖的含量，可以在发酵产物中加入还原糖显色剂，用光电比色法测定显色产物的光密度值，并将测定值与_____比对，计算其含量。
（二）棉花是重要的经济作物，近年来由于虫害频发导致减产严重。研究人员将某细菌的抗虫基因C转入棉花细胞内，成功获得了抗虫转基因棉花，在一定程度上减少了杀虫剂的使用，减少了环境污染，提高了作物的产量和质量。请回答下列有关问题
(5)提取某细菌总RNA，分离纯化出 _____，经逆转录形成互补的DNA（cDNA），再利用PCR技术选择性扩增C基因的cDNA．PCR过程中DNA先后经历高温变性→复性→延伸过程，故反应体系中需加入 _____酶。
(6)常用农杆菌与经 _____后的外植体共培养一段时间完成转化，需先将C基因的cDNA插入到Ti质粒的T﹣DNA上并导入农杆菌，有利于 _____。若要检测目的基因是否反向插入，_____（填“能”或“不能”）根据带标记的目的基因单链作探针的核酸分子杂交结果判断。
(7)为培育出抗虫转基因棉花植株，应将外植体 _____到适宜培养基经脱分化形成愈伤组织上，再分化形成胚状体，并逐渐发育成完整植株。若发现培育得到的试管苗呈黄叶，可能原因是再分化过程中未给予 _____条件或培养基成分问题等。
(8)除了转基因植物外，我国已培育出转基因动物鱼、转基因瘦肉猪等动物新品种，特别是利用转基因动物作为 _____，生产医用蛋白和多肽的研究成果喜人。