1 . 随着基因组编辑技术的发展，科学家可以通过基因敲除、插入等手段有目的地改造特定基因。影响小鼠内耳形态的基因A突变会导致遗传性耳聋，研究人员尝试对该病进行基因治疗。相关信息如图所示。

   

(1)图1表示CRISPR/Cas9基因编辑系统，该系统由sgRNA及Cas9蛋白组成。sgRNA与目标DNA结合需遵循___原则，结合后sgRNA引导Cas9蛋白切割靶序列的双链DNA，导致___键断裂。
(2)同源重组是指在DNA断裂的情况下，含有同源区段的DNA之间发生的重组。科研人员尝试利用同源重组原理对耳聋小鼠进行基因治疗。
①利用___技术扩增野生型小鼠的基因A，该技术体系需要添加引物，引物的作用是___。扩增基因A后，需将其插入到载体，载体需要具备的条件有___（答出两点即可）。科研人员尝试利用该基因表达载体与耳聋小鼠的DNA进行同源重组，效果不佳。
②在上述基础上，科研人员构建出如图2所示的腺病毒表达载体。该表达载体中引入sgRNA基因、Cas9基因和sgRNA识别序列的目的是___。
③进一步研究发现该方案可以有效纠正小鼠的突变基因，从而治疗小鼠的遗传性耳聋。人体内基因A突变也会导致遗传性耳聋，欲将该方案用于临床治疗，从安全性角度还应关注___。

2 . 研究人员将玉米的光敏色素基因A（256bp）导入到棉花体内，对获得的1~4号转基因棉花进行基因A的检测，电泳结果如图。下列叙述错误的是（       ）

A．转基因技术用到的工具有限制酶、DNA连接酶和载体

B．可采用花粉管通道法使基因A进入棉花的胚囊

C．PCR反应过程中每次循环都要经历目的不同的两次升温和一次降温

D．由电泳结果可知，1、3和4号棉花均导入基因A且培育成功

3 . 小鼠肿瘤转移抑制基因（kissl基因）仅在特定组织中表达，在雌性激素诱导下，细胞内信号传导系统可以与kissl基因启动子P的特定区域结合，激活kissl基因的转录。

(1)利用PCR技术扩增kissl基因时，设计引物的作用是______。PCR是在PCR扩增仪中自动完成的，完成以后常采用_______来鉴定PCR的产物。
(2)据图分析，在构建kissl基因表达载体时，应使用限制酶______对图1所示质粒和图2所示含kissl基因的DNA片段分别进行切割，此过程选用这两种限制酶的原因是______。
(3)研究人员扩增了不同长度的启动子片段P₁~P₅，分别构建这些片段与绿色荧光蛋白基因融合的载体，转入体外培养_______（填“含kissl基因且能表达”或“含kissl基因不能表达”或“不含kissl基因”）的小鼠细胞中，以确定不同片段的转录活性。对导入不同启动子的细胞进行绿色荧光强度检测，结果如图所示请推测哪种启动子片段的转录活性最高，并阐释你的理由_______。根据启动子P的激活机制，推测启动子P应用于基因工程的优势是_______。

   

4 . 研究发现，在某植物液泡膜上的Na⁺/K⁺逆向转运蛋白可提高其耐盐碱能力。科研人员以该转运蛋白对应的AINHX基因作为目的基因，通过转基因技术培育出了耐盐碱的马铃薯，AINHX基因两端的核苷酸序列如下表所示。下列说法正确的是（　　）

已知序列	5'-AACTATGCGCTCATGA- - - - GCAATGCGTAGCCTCT
	3'-TTGATACGCGAGTACT- - - - CGTTACGCATCGGAGA
PCR引物	①5'-TTGATACGCGAGTACT     ②5'-GCAATGCGTAGCCTCT
	③5'-AGAGGCTACGCATTGC     ④5'-AACTATGCGCTCATGA

A．构建表达载体使用的工具酶是限制酶、DNA连接酶和载体

B．利用PCR技术扩增AINHX基因时，需要选择引物③和④

C．培育耐盐碱的马铃薯时，可利用显微注射法将重组载体导入受体细胞

D．应从分子水平上对转基因马铃薯进行检测，以确定其能否表现出耐盐碱的特性

5 . 人染色体DNA中存在串联重复序列，对这些序列进行体外扩增、电泳分离后可得到个体的DNA指纹图谱。该技术可用于亲子鉴定和法医学分析。下列叙述错误的是（　　）

A．DNA分子的多样性、特异性及稳定性是DNA鉴定技术的基础

B．串联重复序列在父母与子女之间的遗传不遵循孟德尔遗传定律

C．指纹图谱显示的DNA片段属于人体基础代谢功能蛋白的编码序列

D．串联重复序列突变可能会造成亲子鉴定结论出现错误

6 . RT－PCR是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。以mRNA为模板，通过RT－PCR技术获取目的基因时，下列哪项叙述是错误的（       ）

A．加入的原料是4种脱氧核苷酸

B．加入的酶包括逆转录酶和DNA聚合酶

C．反应缓冲液中一般要添加镁离子

D．DNA 延伸时温度控制在50°C左右

7 . 苦荞中的生物类黄酮具有降血糖、血脂等功效。CHS是合成黄酮类化合物的关键酶，研究人员将经过修饰的CHS基因导入苦荞细胞中，培育出高产黄酮类苦养品系，基本过程如下图。回答下列问题：

(1)PCR技术可以快速扩增CHS基因，扩增时对目的基因起定位作用的是_________。
(2)过程①是_________，可以选择图中的__________限制酶处理目的基因和质粒。除限制酶外，该过程还需要__________酶的参与。
(3)除图中标注外，重组Ti质粒还必须含有___________等关键组件。同时，需要删除质粒上一些不必要的DNA片段，目的是____________________。
(4)据图分析，需要选择在含有_________的培养基上能形成菌落的农杆菌去感染苦荞细胞。怎样鉴定转基因苦荞是否培育成功？__________________________。

10 . 人体内一些正常或异常细胞脱落破碎后，其DNA会以游离的形式存在于血液中，称为cfDNA．近几年，结合PCR及电泳鉴定、DNA测序等技术，cfDNA在临床上得到了广泛应用。下列相关说法错误的是（　　）

A．对cfDNA进行检测，可以用于肿瘤的早期筛查

B．在琼脂糖凝胶中，cfDNA的迁移速率与cfDNA分子的大小、构象等有关

C．在进行电泳时，要预留一个加样孔，加入指示分子大小的标准参照物

D．PCR反应中设置不同的温度是为了使酶催化不同的反应