23. 亮氨酸脱氢酶是一类氧化还原酶,在临床生化诊断上有重要作用。有研究表明,在亮氨酸脱氢酶基因原有启动子(P
HpaII)之后加上信号肽(引导新合成的蛋白质向分泌通路转移的一段肽链)序列,可提高亮氨酸脱氢酶产量。科研人员进一步研究双启动子(P
HpaII、P
amyQ)及双启动子后再分别添加3种信号肽序列对亮氨酸脱氢酶产量的影响,主要实验流程如下图。请回答下列问题。
(1)启动子的功能是
______。组成信号肽的基本单位是
______。
(2)过程①中,PCR反应体系中添加的dNTP的功能有
______,添加的一对引物是
______。
P1:5′-GGGAAT
CATATGGGCGGCGTTCTGTTTCTG-3′
P2:5′-CCGATT
AAGCTTGGCGGCGTTCTGCATCTG-3′
P3:5′-CGC
GGATCCATAAGGCAGTAAAGAGGCTTTTG-3′
P4:5′-GCC
GGATCCACAAGGCAGTATTTACTGCCTT-3′
(3)过程②中,启动子P
amyQ能与质粒1连接的分子基础是
______。将重组质粒1导入枯草杆菌前先用Ca
2+处理枯草杆菌,其主要目的是
______。转化后的枯草杆菌一般要用稀释涂布平板法接种到添加
______的培养基上进行筛选。
(4)科研人员将质粒1、重组质粒1和3种重组质粒2分别导入枯草杆菌得到甲~戊5种重组枯草杆菌,进行发酵后提取上清液中的亮氨酸脱氢酶,酶活力测定结果如下表。
重组菌 | 甲 | 乙 | 丙 | 丁 | 戊 |
酶活力/ | 10.11 | 31.24 | 0.44 | 6.49 | 21.76 |
①结果表明,
______最有利于提高亮氨酸脱氢酶产量。
②双启动子后添加信号肽序列影响酶的表达或分泌量的原因可能有
______。
a.信号肽序列影响了亮氨酸脱氢酶基因的表达
b.信号肽序列影响了启动子转录成相应的mRNA序列
c.信号肽序列表达产物使亮氨酸脱氢酶分泌路径发生改变