25. 许多植物病毒运动蛋白可以增加植物胞间连丝的通透性,介导病毒核酸的转移。黄瓜花叶病毒(CMV)是一种寄主范围非常广泛的植物病毒,已有研究表明黄瓜花叶病毒运动蛋白(CMP)介导了病毒核酸分子在植物细胞间的转移。GFP是在水母细胞中表达的一种绿色荧光蛋白。研究人员拟构建CMP-GFP融合基因,并将其转入工程菌中大量合成CMP-GFP融合蛋白,以追踪病毒运动蛋白对植物胞间连丝物质运输中的生理功能。图1表示利用PCR技术获取融合基因的过程。图2表示pUC质粒,Amp²是氨苄青霉素抗性基因;LacZ基因编码产生的β-半乳糖苷酶能分解β-半乳糖苷,产生蓝色物质,使菌落呈现蓝色,否则菌落为白色;SmaI、NcoI、EcoRI、Pst1是4种限制酶,它们切割产生的黏性末端均不相同。
(1)构建CMP-GFP融合基因设计引物时,需要把CMP基因的对应终止密码子的3个碱基去掉,原因是
___________。质粒上终止子的作用是
___________。
(2)若对图1过程中形成的CMP-GFP融合基因进行大量扩增,需要的酶是
___________,可以使用的引物是图中的
___________。若从以下四个引物中选择其中两个作为引物P2和引物P3的组成部分,应选择
___________(填序号)。
①:5’-CGGGGATCCATACATATGAGTAAA-3’
②:5’-ACCTTGGAAAGCCATTTTGTATAGTTCATC-3’
③:5’-ACAGGATCCTATAGATATAG-3’
④:5’-GATGAACTATACAAAATGGCTTTCCAAGGT-3’
(3)为了使CMP-GFP融合基因能够正确插入pUC质粒中,需要在构建融合基因时在所需引物的
___________(填“5’”或“3’”)端添加限制酶
____________的序列。将构建成功的重组质粒导入大肠杆菌中,在添加了氨苄青霉素和β-半乳糖苷的培养基中菌落的生长状况和菌落颜色分别是
______________。