26. 人血清白蛋白(HSA)具有重要的医用价值,传统获取HSA的方法只有从人血浆中制备。科学家们利用基因工程技术,培养出一种转基因山羊,其乳腺上皮细胞可以合成HSA并分泌到乳汁中,再从其乳汁中提取HSA,大致过程如图所示。回答下列问题:
注:图中tet
R表示四环素抗性基因,amp
R表示氨苄青霉素抗性基因,BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ表示三种限制酶。
(1)若要体外获得大量的HSA基因,则可采用PCR技术。该技术的前提是要根据一段已知目的基因的
______设计引物。
(2)将图中的HSA基因插入载体,需要用到的限制酶是
______;过程①常用的方法是
______;筛选含有重组载体的受精卵时首先需要在含
______的培养基中进行培养。
(3)为了获得更多的转基因山羊,科学家常采用
______技术,在获得二分胚的时候,分割时要注意将囊胚的
______均等分割,否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。
(4)为检测羊基因组中是否含有HSA基因可采用
______技术。
(5)相比于传统获取HSA的方法,通过上图过程培育的转基因山羊来生产HSA显著提高了生产效率,但该过程也存在一定的局限性,即转基因山羊必须是雌性的,且须等转基因山羊发育到泌乳期才能获取HSA。有科学家提出,若使HSA基因在山羊的膀胱上皮细胞中特异性表达,即可克服该局限性。为达到此目的,在构建基因表达载体时,需要将
______与HSA基因重组在一起。