1 . 科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstI、SmaI、HindⅢ、Alul四种限制性内切核酸酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（amp'为抗氨苄青霉素基因），其中①~④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，甲、乙表示相关结构或细胞。请据图作答：

(1)基因工程中常用质粒作为载体，将基因送入受体细胞中。作为运载体的质粒除了必须有复制原点、标记基因之外，通常还需要有_________，图中的标记基因是_________，其主要作用是_________。
(2)基因工程中核心步骤是_________，在此过程中，为使目的基因定向插入运载体中，本实验中应该选用限制酶_________对鱼抗冻蛋白基因和质粒进行切割。
(3)培育出的番茄植株是否具有抗冻性状，可采用鉴定方法是_________。
(4)PCR技术是获取目的基因的主要手段。PCR扩增目的基因时设计引物序列的主要依据是_________，若一个该DNA分子在PCR仪经过4次循环，产物中共有_________个等长的目的基因片段，PCR产物通常采用_________法来鉴定。
(5)研究人员采用了如下图巢式PCR技术获取抗冻蛋白基因，巢式PCR是一种变异的聚合酶链反应（PCR），使用两对PCR引物扩增完整的片段。第一对PCR引物（也称外引物）扩增片段和普通PCR相似。第二对引物称为巢式引物（因为他们在第一次PCR扩增片段的内部，也称内引物）结合在第一次PCR产物内部，使得第二次PCR扩增片段短于第一次扩增。

相比于常规PCR，巢式PCR获得错误目标产物概率__________，分析其原因是___________。

2 . 2018年1月25日，我国研究人员在世界上率先利用去甲基化酶（Kd4d）的mRNA，经体细胞核移植技术培育出第一批灵长类动物-食蟹猴，流程如图1所示，①~⑥表示过程，该动物可作为研究癌症等人类疾病的动物模型。请分析回答：

(1)采集雌性食蟹猴卵母细胞，在体外培养至_______，通常使用_______方法去除卵母细胞的细胞核，将成纤维细胞注入去核卵母细胞，用电融合法使两细胞融合形成重构胚胎，用________激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程。
(2)重构胚具有发育成完整个体的能力，重构胚的细胞核与细胞质中的遗传物质分别来源于________、________，图1过程②中去掉卵母细胞核的目的是________。
(3)研究人员在确定去甲基化酶（Kd4d）的mRNA的作用时，做了两组实验，其中A组用正常培养液培养融合细胞，B组用正常培养液培养注入了Kd4d的mRNA的融合细胞，实验结果如图2所示。分析实验数据可知，Kd4d的mRNA的作用是________。
(4)体细胞核移植技术与诱导多功能干细胞（iPS细胞）都可以生成干细胞，iPS细胞主要通过向受体细胞内导入特定基因或蛋白质，诱导受体细胞转化为类似胚胎干细胞的状态，体细胞核移植技术与iPS细胞生成干细胞的过程有什么不同________，克隆猴与传统的动物模型（如小鼠）相比，在开发治疗人类疾病新药物上的优势是________。

3 . 果酒、果醋、味精都是利用发酵技术生产的。味精（也叫谷氨酸钠），工业生产中常用微生物发酵法制取。下图表示谷氨酸棒状杆菌合成谷氨酸的部分代谢途径。

请回答以下问题：
(1)制作果酒和果醋时，利用到的主要微生物分别是________和__________，与前者相比，后者在结构上的显著特点是_________。
(2)谷氨酸发酵的培养基成分有豆饼水解液、玉米浆、尿素、硫酸镁、生物素等，从物理性质看，该培养基属于________培养基；从营养成分分析，尿素主要为谷氨酸棒状杆菌的代谢提供__________。要测定谷氨酸棒状杆菌的数量，可采用的计数方法有显微镜直接计数法和_________，前者计数的结果比后者计数的结果值更__________（填“大”或“小”）。
(3)研究发现：在无氧条件下，谷氨酸棒状杆菌代谢产物是乳酸或琥珀酸，谷氨酸棒状杆菌在发酵过程中要不断地通入无菌空气，并不断搅拌。当培养基中碳氮比为4：1时，菌体大量繁殖而产生的谷氨酸少；当碳氮比为3：1时，菌体繁殖受抑制，但谷氨酸的合成量大增。发酵过程中，搅拌的作用是_________，由此推出谷氨酸发酵应控制的发酵条件是_________。
(4)由图可知，谷氨酸棒状杆菌体内若积累了较多的谷氨酸，则会抑制谷氨酸脱氢酶的活性使谷氨酸产量下降。如何进一步提高谷氨酸的产量，请提出相关的解决思路________。

4 . 如图是将人的生长激素基因导入细菌B制造“工程菌”的示意图。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因。判断下列说法错误的是（       ）

   

A．将重组质粒导入细菌B常用的方法是Ca+处理法

B．将完成导入过程后的细菌涂布在含有四环素的培养基上，能生长的只是导入了质粒A的细菌

C．将完成导入过程后的细菌涂布在含有氨苄青霉素的培养基上，能生长的既有导入普通质粒A的细菌又有导入重组质粒的细菌

D．目的基因成功表达的标志是受体细胞能在含氨苄青霉素的培养基上生长

5 . 抗体—药物偶联物（ADC）通过将细胞毒素与单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。ADC组成及作用机制如图，下列叙述错误的是（       ）

A．药物没有特异性，抗体的特异性是ADC能选择性作用于肿瘤细胞的关键。

B．ADC进入肿瘤细胞的运输方式为胞吞

C．接头的主要作用是保证药物不会脱落

D．ADC中药物的作用是通过诱发肿瘤细胞坏死而杀死肿瘤细胞

6 . CRISPR/Cas9是一种生物学工具，能够通过“剪切和粘贴”脱氧核糖核酸（DNA）序列的机制来编辑基因组。这套系统源自细菌的防御机制，是一种对任何生物基因组均有效的基因编辑工具。CRISPR-Cas9基因组编辑系统由向导RNA（也叫sgRNA）和Cas9蛋白组成向导RNA识别并结合靶基因DNA，Cas9蛋白切断双链DNA形成两个末端。这两个末端通过“断裂修复”重新连接时通常会有个别碱基对的插入或缺失，从而实现基因敲除，如图所示。CRISPR-Cas9基因组编辑技术有时存在编辑出错而造成脱靶。下列叙述错误的是（       ）

   

A．对不同目标DNA进行编辑时，使用Cas9蛋白和“不同”的sgRNA进行基因编辑

B．Cas9蛋白相当于限制酶，能作用于脱氧核糖和碱基之间的化学键

C．CRISPR-Cas9基因组编辑系统使细菌获得抵抗噬菌体的能力

D．可能其他DNA序列含有与sgRNA互补配对的序列，造成sgRNA错误结合而脱靶

7 . 为了对重金属污染的土壤进行生物修复，研究者将从杨树中克隆的重金属转运蛋白（HMA3）基因与外源高效启动子连接，导入杨树基因组中（如图）。为检测获得的转基因杨树苗中是否含有导入的HMA3基因，同时避免内源HMA3基因的干扰，在进行PCR扩增时，应选择的引物组合是（       ）

A．①+③

B．③+④

C．③+②

D．①+④

8 . 如图为形成cDNA过程和PCR扩增过程示意图。据图分析，下列说法不正确的是（       ）

A．③④⑤过程分别为变性、复性和延伸阶段

B．催化②⑤过程的酶都是DNA聚合酶，⑤中DNA聚合酶能耐高温

C．①过程需要的是RNA聚合酶

D．④过程需要冷却至50℃左右

9 . 下列选项中所比较的两个项目的原理不相似的是

A．植物原生质体融合与动物体细胞杂交

B．利用乳腺生物反应器生产产品和利用膀胱生物反应器生产产品

C．利用小分子化合物诱导成纤维细胞生成iPS细胞与利用激素诱导胡萝卜韧皮部细胞生成愈伤组织

D．琼脂糖凝胶电泳分离DNA与纸层析法分离色素滤液中的光合色素

10 . 一种双链DNA分子被三种不同的限制酶切割，切割产物通过电泳分离，用大小已知的DNA片段的电泳结果作为分子量标记（图左边一列）。关于该双链DNA，下列说法错误的是（       ）

   

A．呈环状结构

B．其NotI切点与EcoRI切点的最大距离为2kb

C．有一个NotI和两个EcoRI切点

D．分子质量大小为10kb