3 . 诱导干细胞定向分化具有重要的医学价值。基因Pdx1在胰腺发育阶段的胰腺组织中大量表达，对胰腺定向发育和成熟有重要作用。研究者将Pdx1基因构建到含Tet诱导型启动子的基因表达载体（GV347）中，转入小鼠胚胎干细胞（ES），以期实现Pdx1基因在胚胎干细胞中的定时和定量表达。回答下列问题：
(1)培养ES时，应将ES置于________的混合气体的CO₂培养箱中培养。CO₂的主要作是______。
(2)提取胰腺细胞的总mRNA，经过_______过程可获得cDNA。为特异性的扩增Pdx1基因的cDNA，需要设计引物，引物与Pdx1基因cDNA的_________端碱基序列互补配对。为使基因表达载体能成功表达Pdx1蛋白和绿色荧光蛋白的融合蛋白，应将__________（填“含”或“不含”）终止子的cDNA插入到GV347的限制酶切割位点（如下图）。

注：Tet诱导的启动子是在四环素存在条件下，可以激活基因表达。
(3)将重组载体导入ES，然后将细胞置于含有_________的培养基内培养，以筛选出成功导入载体的细胞。当四环素存在时，有利于______与Tet诱导的启动子结合，驱动下游序列转录出mRNA。可通过观察________来确定目的基因是否翻译。
(4)研究者检测了不同条件处理下的Pdx1表达量（如下表所示），证明转基因细胞能定时表达Pdx1。图2中①②③应分别为______、______、______。

组别	1	2	3	4
细胞类型	ES	①	ES	PDX1+
四环素	有	②	无	③
融合蛋白表达量	-	++++	-	-

注：ES为非转基因的胚胎干细胞；PDX1+为转入表达载体的胚胎干细胞：“+”越多表示表达量越高，“-”表示未表达。
(5)为验证可通过改变四环素浓度实现对Pdx1表达量的控制，研究者用一系列浓度梯度的四环素溶液处理PDX1+。预期结果是______________。

5 . 科学家将鼠抗人大肠癌单克隆抗体基因（ND-1）与酵母胞嘧啶脱氨酶基因（CD）融合，在大肠杆菌中成功地表达了单链抗体与酶的融合蛋白，这类蛋白的疗法称为由抗体介导的酶解前药疗法（ADEPT）。ND-1—CD融合基因的构建方法如图所示。下列有关叙述合理的是（　　）   

A．图中产物一和产物二的获得至少需要经过2次扩增循环

B．图中杂交链延伸生成ND-1——CD融合基因的过程应不用加入引物

C．获得的融合基因在构建好基因表达载体后可直接被正常状态的大肠杆菌吸收

D．该融合蛋白应是利用抗体部分特异性的识别人大肠癌细胞并将酶带到靶部位

6 . 里德·罗伯茨发现非洲慈鲷科鱼同时拥有XY和ZW两套性染色体。当W染色体不存在时，为XY型性别决定；有W染色体时为雌性。雌性非洲慈鲷科鱼的性染色体只存在三种组成：ZZXX、ZWXY、ZWXX。科学家将一个荧光蛋白基因导入到了性染色体组成为ZWXY非洲慈鲷科鱼的性染色体中并表达。下列说法错误的是（　　）

A．雄性非洲慈鲷科鱼的性染色体组成只有ZZXY

B．非洲慈鲷科鱼可能存在染色体组成YY致死现象

C．各种性染色体组成比例相同的非洲慈鲷科鱼自由交配，子代的性别比例为雌：雄=1：1

D．转基因鱼与与雄鱼交配若子代雌鱼中荧光鱼所占比例为3/4，雄鱼中荧光鱼所占比例为1/2，则说明荧光蛋白基因被整合到X染色体上

7 . 白地霉侵染是导致柑橘酸腐病的主要原因，实验证明桔梅奇酵母对白地霉具有生物防治能力。已知铁是真菌生长的必需元素，是胞内重要酶活性中心的组成部分。普切明酸是桔梅奇酵母产生的一种水溶性铁螯合剂，能快速在培养基中扩散并与其中的Fe³⁺形成稳定红色复合物。研究配制的含有不同浓度FeCl₃的培养基如下表所示。实验结果为桔梅奇酵母菌落周围出现红色抑菌圈，随FeCl₃浓度增大，抑菌圈红色加深但变窄，如下图所示。相关叙述正确的是（       ）

成分	MgSO4	NaH2PO4	蛋白胨	FeCl3溶液	水	琼脂
用量	5g	7g	15g	500mL	7g	20g

A．实验中使用的培养基pH呈弱碱性，其中琼脂不是营养物质

B．白地霉采用了平板划线法，桔梅奇酵母采用了涂布平板法

C．白地霉不能利用与普切明酸结合后的铁是出现红色抑菌圈的原因

D．补足Fe3+可以使桔梅奇酵母对白地霉的抑制效果逐渐减弱

8 . 常规种植的棉花（陆地棉）含有棉酚，棉酚主要分布在茎、叶、苞片、铃壳及种子里的许多黑色细小的腺体中。棉酚具有一定毒性，为培育棉酚含量低且品质好的棉花杂种植株，科研人员将某种棉酚含量低的野生棉（2n=2X=26）与品质好的陆地棉（2n=4X=52）进行了不对称体细胞杂交。

(1)科研人员首先制备了野生棉和陆地棉的悬浮细胞，用___酶分别处理，各自获得有活力的原生质体。
(2)用一定剂量的紫外线处理野生棉原生质体，破坏部分染色体。用流式细胞仪测定上述各种原生质体细胞的DNA含量，结果如图1所示。未经处理的野生棉、紫外线处理后的野生棉、陆地棉细胞的检测结果依次为图中___（选填图1中字母）。
(3)将紫外线处理后的野生棉原生质体与陆地棉原生质体用化学诱导剂___诱导融合，形成的融合细胞经过___再生，成为完整细胞，进而分裂和脱分化形成___组织，经过___形成完整的再生植株。科研人员选取再生植株及双亲的根尖制成临时装片，显微镜下进行观察，比较染色体的形态和数目，分析再生植株的染色体变异类型。
(4)用特定的方法对陆地棉和野生棉基因组DNA进行扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种植株的鉴定。图2是用同样的方法对双亲及再生植株1～6进行扩增的结果。据图特定条带判断，再生植株1～6中确定为杂种植株的有___。
(5)对杂种植株可通过观察___，筛选出低酚的杂种植物。

9 . 限制酶是基因工程中必需的工具之一，下图表示六种限制酶的识别序列及切割位点。下列说法正确的是（       ）

限制酶	识别序列和切割位点
BamH I	5'-G↓GATCC-3'
Sau3 A I	5'-↓GATC-3'
Acc65 I	5'-G↓GTACC-3'
Bgl Ⅱ	5'-A↓GATCT-3'
Kpn I	5'-GGTAC↓C-3'
EcoR I	5'-G↓AATTC-3'

A．若某基因的1个位点被EcoR I切割，能断开4个磷酸二酯键

B．分别用Sau3A Ⅰ和Bgl Ⅱ切割同一种随机序列DNA，前者得到的片段数往往多于后者

C．BamH I和Sau3A I切割产生的DNA片段，经DNA连接酶连接后不能重新被Sau3AI切割

D．Acc65 Ⅰ和Kpn Ⅰ切割产生的DNA片段，经DNA连接酶连接后可以重新被Acc65Ⅰ切割

10 . 乙肝病毒表面主蛋白是由H基因控制合成。下图是将H基因导入某酵母菌生产乙肝疫苗的过程。5′A和3′TT分别是该酵母菌中某基因的启动子和终止子，此启动子还能使外源基因在酵母菌中高效表达，3′A是该基因下游的序列。科学家将改造过的P质粒与H基因连接形成重组质粒，再在重组质粒特定部位酶切，形成的重组DNA片段可以整合到酵母菌染色体上，最终实现H基因的表达。下列叙述错误的是（　　）

A．构建重组质粒时，可在H基因两侧分别接上SnaBⅠ和AvrⅡ的识别序列

B．用含有氨苄青霉素的培养基可以筛选出含有H基因的酵母菌

C．步骤1中，将重组质粒先导入大肠杆菌的目的是复制出大量重组质粒

D．步骤3中，用BglⅡ对重组质粒进行酶切可以获得图示的重组DNA片段