1 . 实时荧光RT-PCR可用于新型冠状病毒的核酸检测，RT-PCR是将RNA逆转录（RT）和cDNA聚合酶链式扩增反应相结合的技术，其原理是：在PCR复性过程中探针和引物一起与模板结合，探针两侧分别带有荧光基团和抑制荧光发出的淬灭基团，新链延伸过程中，DNA聚合酶会破坏探针，导致荧光基团与淬灭基团分离而发出荧光。利用RT-PCR进行核酸检测的相关过程如下图所示。下列说法错误的是（       ）

   

A．做RT-PCR之前，需要先根据新冠病毒的cDNA核苷酸序列合成引物和探针

B．如果检测结果有强烈荧光信号发出，说明被检测者没有感染新型冠状病毒

C．RNA不能作为PCR扩增的模板，需将样本中的RNA反转录为DNA后再扩增

D．还可以检测病毒的外壳或病毒引发产生的抗体，其原理都是抗原—抗体杂交

2 . 巢式PCR是指先后用外内引物扩增目的基因的方法。其原理为：先以比目的基因大的DNA片段为模板，用外引物（F1，R1）进行扩增，获得大量含目的基因的中间产物，再以扩增后的中间产物为模板，用内引物（F2，R2）扩增目的基因，如图所示。下列说法错误的是（       ）   

A．两对引物的碱基序列不相同，但均应为单链DNA片段

B．第二轮PCR反应能否进行，是对第一轮PCR反应正确性的鉴定

C．由于和两套引物都互补的靶序列较少，该技术可大大提高扩增的特异性

D．如果两套引物一起加入反应体系中，外引物的复性温度应显著低于内引物

4 . 我国科学家经多年研究，筛选出高产紫杉醇的细胞，通过植物细胞培养技术可获得大量紫杉醇，实现紫杉醇的工厂化生产。为提高红豆杉细胞培养物中紫杉醇的产量，研究人员构建紫杉醇合成关键酶基因（Bapt基因）的超表达载体，并将其导入红豆杉细胞，其具体流程如下：
(1)Bapt基因的获取：提取红豆杉的mRNA，并通过逆转录得到其cDNA，利用PCR技术以图1中的cDNA片段为模板扩增Bapt基因，扩增的前提是___，需要的引物有___（从A、B、C、D四种引物中选择）。上述过程中，用1个图1所示片段产生2个双链等长的子代Bapt基因片段至少要经过___次循环。

(2)构建Bapt基因的超表达载体并将其导入受体细胞：在超量表达Bapt基因载体的构建中，所用DNA片段和Ti质粒的酶切位点（注：图中所示限制酶切割后形成的黏性末端各不相同）如图2所示。强启动子能被___识别并结合，驱动基因持续转录。Ti质粒中的T-DNA在培育转基因红豆杉中的作用是___。为使DNA片段能定向插入T-DNA中，可用PCR技术在DNA片段的两端添加限制酶识别序列，M、N端添加的序列所对应的限制酶分别是___。

(3)构建Bapt基因的超表达载体，需用到相应限制酶和DNA连接酶，其中连接酶作用的底物为图3中的___（填“A”或“B”或“A和B”）。

6 . 为了发展生态农业，某地农民分别建立了庭院生态系统和以鱼食昆虫杂草—鱼粪肥田为基础设计的稻鱼共生系统，其中图为庭院生态系统结构图。表为稻鱼共生系统和水稻单作系统的温室气体排放量（表中单位：kgCO₂·eq/hm²）。下列说法正确的是（　　）

生产方式	化肥		农药	饲料		合计
	氮肥	复合肥		小麦	玉米
水稻单作	459.0	1578.5	51.5	0	0	2089
稻鱼共生	278.2	1116.2	43.2	222.6	265.5	1925.7

A．相比稻鱼共生系统，水稻单作系统是没有消费者的，所以自我调节能力差

B．稻鱼共生系统增强了土壤肥力，其设计体现了循环、协调等生态学基本原理

C．流入该庭院生态系统的能量是生产者固定的太阳能

D．该生态系统的结构包括生产者、消费者、分解者及非生物的物质与能量

7 . 常规种植的棉花（陆地棉）含有棉酚，棉酚主要分布在茎、叶、苞片、铃壳及种子里的许多黑色细小的腺体中。棉酚具有一定毒性，为培育棉酚含量低且品质好的棉花杂种植株，科研人员将某种棉酚含量低的野生棉（2n=2X=26）与品质好的陆地棉（2n=4X=52）进行了不对称体细胞杂交。
(1)科研人员首先制备了野生棉和陆地棉的悬浮细胞，用_______________酶分别处理，各自获得有活力的原生质体。
(2)用一定剂量的紫外线处理野生棉原生质体，破坏部分染色体。用流式细胞仪测定上述各种原生质体细胞的DNA含量，结果如图1所示。未经处理的野生棉、紫外线处理后的野生棉、陆地棉细胞的检测结果依次为图中_______________（选填图1中字母）。

(3)将紫外线处理后的野生棉原生质体与陆地棉原生质体用化学诱导剂_______________诱导融合，形成的融合细胞经过_______________再生，成为完整细胞，进而分裂和脱分化形成_______________组织，经过_______________形成完整的再生植株。
(4)科研人员选取再生植株及双亲的根尖进行解离、_______________、_______________后压片并制成临时装片，显微镜下对_______________期的细胞进行观察，比较染色体的形态和数目，分析再生植株的染色体变异类型。
(5)用特定的方法对陆地棉和野生棉基因组DNA进行扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种植株的鉴定。图2是用同样的方法对双亲及再生植株1～6进行扩增的结果。据图特定条带判断，再生植株1～6中确定为杂种植株的有_______________。

(6)对杂种植株可通过观察_______________，筛选出低酚的杂种植物。

8 . 与普通玉米相比，甜玉米细胞中可溶性糖向淀粉的转化较慢，从而导致可溶性糖含量高，汁多质脆，研究发现这与甜玉米G蛋白含量较高有关。为提高甜玉米的商品价值，科研人员培育出了超量表达G蛋白的转基因甜玉米新品种。在超量表达G基因载体的构建中，所用DNA片段和Ti质粒的酶切位点如图1、2所示。

(1)图1中强启动子是一段特殊序列的DNA片段，位于基因的_______，驱动基因持续转录，该转录过程中模板链的5'端位于_______（填“M”或“N”）端。
(2)图2所示载体为农杆菌的Ti质粒，当农杆菌侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的_______转移到被侵染的细胞，并且将其整合到_______。
(3)结合图1和图2，为使DNA片段能定向插入Ti质粒中，可用PCR技术在DNA片段的两端添加限制酶识别序列，M、N端添加的序列分别是限制酶_______、_______的识别序列。
(4)外植体经脱分化过程形成的愈伤组织放入农杆菌液（含重组Ti质粒）浸泡后，进行植物组织培养时培养基中需加入_______进行筛选，最终获得玉米植株Y₁、Y₂、Y₃，通过对3个植株的G蛋白表达量和还原糖的含量进行测定，发现Y3植株的G蛋白表达量最多，但却不是还原糖含量最多的植株，原因可能是_______。
(5)为了进一步提高甜玉米中淀粉的含量，科研人员提出通过降低淀粉酶合成有关基因的表达实现生产目标。研究人员研究发现吗啉反义寡核苷酸是一种RNA剪接抑制剂，将其注入植物细胞内会使基因表达受阻，科研人员将吗啉反义寡核苷酸导入玉米的受精卵中起到明显效果。针对它的具体作用，科研人员提出以下假说：
假说1：导致RNA前体上内含子1的对应序列不能被剪。
假说2：导致RNA前体上内含子1和外显子2的对应序列同时被剪切。

为了验证上述假说，分别从受精卵发育后3天的实验组和对照组胚细胞中提取_______，逆转录形成cDNA。若假说1成立，使用下图所示引物2和引物4进行PCR后电泳的结果为_______（填字母）。
A． 实验组有目的条带　    B． 实验组无目的条带
C． 对照组有目的条带　    D． 对照组无目的条带
若要证明假说2成立，需要选择如图所示引物_______进行PCR。

9 . 在两种光照强度下，不同温度对某植物CO₂吸收速率的影响如下图。回答下列问题：

   

(1)光合作用是______的过程，包括多个阶段，请以下方框中画出卡尔文循环示意图________。
(2)该实验的可变因素是______，CO₂吸收速率代表______（净/总）光合速率。
(3)在低光强下，CO₂吸收速率随叶温升高而下降的主要原因是______。M点代表的生物学含义是______。CP点时，低光强下的总光合速率______（大于/小于/等于/无法判断）高光强条件下。
(4)20℃时，若将该植物突然从高光强条件转至低光强条件下，则短期内叶肉细胞中三碳酸的含量会______，一段时间后三碳酸的含量会______。研究发现，将35℃、高光强条件下的植物，转至黑暗条件下，在一段时间内叶肉细胞仍能产生蔗糖，原因是______。

10 . 虾青素可由β-胡萝卜素在β-胡萝卜素酮化酶（BKT）和β-胡萝卜素羟化酶（CRTR-B）的作用下转化而来，具有抗衰老、增强免疫、保护心血管等功能。杜氏盐藻是单细胞浮游植物，生长快，易培养，能大量合成β-胡萝卜素。科研人员利用“无缝克隆技术”（如图1）构建含BKT基因和CRTR-B基因的表达载体（如图2，3），导入杜氏盐藻，以实现虾青素的工厂化生产，回答下列问题。

(1)获取目的基因：雨生红球藻是天然虾青素重要来源，提取雨生红球藻的总DNA为_______，设计特异性引物扩增BKT基因和CRTR-B基因，此过程需要_______酶的催化。
(2)构建转化载体：
①PCR获取抗除草剂基因过程中，为确保基因两端具有所需同源序列，需在引物的一端添加对应的同源序列。若将来需要将抗除草剂基因能够从重组质粒中切除，还需要在基因两侧加入限制酶识别序列，则扩增抗除草剂基因时，设计的引物序列（5’→3’）为_______。
A．同源序列＋抗除草剂基因部分序列＋限制酶识别序列
B．同源序列＋限制酶识别序列＋抗除草剂基因部分序列
C．抗除草剂基因部分序列＋限制酶识别序列＋同源序列
②科研人员利用“无缝克隆技术”同时将BKT基因和CRTR-B基因插入质粒，形成的重组质粒对应部位如图2所示，推测此过程扩增BKT基因所用的引物为_______；扩增CRTR-B基因所用的引物为_______。
③最终形成的重组质粒如图3所示，其中atpA启动子和psbA启动子均为杜氏盐藻叶绿体启动子，选用内源性启动子的目的是_______。
(3)准备受体细胞：选取初始杜氏盐藻涂布到杜氏盐藻固体培养基进行培养，一段时间后，挑取生长状态良好的单藻落到杜氏盐藻液体培养基中继续培养。两次培养的目的分别为_______、_______。
(4)目的基因导入及相关检测：采用基因枪法将重组质粒导入杜氏盐藻叶绿体，一段时间后，先用含_______的培养基初筛已转化的杜氏盐藻，然后采用_______技术检测是否成功表达产生_______。