2 . 柑橘酸腐病是由白地霉菌引起的柑橘贮藏期常见的病害之一。抗菌肽是一种抑菌活性强、无环境污染的生物多肽。为研究抗菌肽对白地霉菌的抑菌效果，现用金属打孔器在多个长势相似柑橘果实的相同部位打孔，每个打孔处接种相同体积的处理液，比较15天后的病斑直径，各组处理及结果见表。下列相关叙述错误的是（　　）

组别	1	2	3	4	5
接种处理方式	接种一定体积的白地霉菌孢子悬浮液	抗菌肽溶液与白地霉菌孢子悬浮液混合后直接接种	先加入抗菌肽溶液，2h后接种白地霉菌孢子悬浮液	X	抗菌肽溶液液白地霉菌孢子悬浮液混合，培养2h后接种
15天后病斑直径/mm	41.3	13.9	29.3	28.7	11.2

A．金属打孔器在每次打孔前需进行灼烧灭菌，目的是防止杂菌污染

B．表中X应为先接种白地霉菌孢子悬浮液，2h后再加入抗菌肽溶液

C．抗菌肽与白地霉菌孢子悬浮液先后加入的抑菌效果强于混合加入的抑菌效果

D．实验结束后5个组别使用的柑橘不能立即丢弃

3 . 限制酶是重组DNA技术中重要的工具酶，如下表为几种限制酶的识别序列及其切割位点，由此推断，下列说法错误的是（　　）

限制酶名称	识别序列和切割位点	限制酶名称	识别序列和切割位点
BamHⅠ	5'-G↓GATCC-3'	KpnⅠ	5'-CGTAC↓C-3'
EcoRⅠ	5'-C↓AATTC-3'	Sau3AⅠ	5'-↓GATC-3'
HindⅡ	5'-GTN↓RAC-3'	SmaⅠ	5'-CCC↓GGG-3'
BglⅡ	5'-A↓GATCT-3'	Acc65Ⅰ	5'-G↓GTACC-3'

注：N为C或T，R为A或G。

A．表中只有HindⅡ、SmaⅠ两种限制酶可形成平末端

B．BamHⅠ和Sau3AⅠ切割产生的DNA片段，经DNA连接酶连接后可以重新被Sau3AⅠ切割

C．Acc65Ⅰ和KpnⅠ切割产生的黏性末端序列无法配对

D．分别用Sau3AⅠ和BglⅡ切割同一种随机序列DNA，前者得到的片段数往往少于后者

4 . 单链全人源抗体scFv由轻链1/2的可变区（VL）、重链1/4的可变区（VH）通过短肽连接构成。借助噬菌体展示技术制备单克隆scFv的过程为：首先从已免疫B细胞中提取mRNA先后进行RT-PCR（逆转录PCR）、重叠PCR，制得由VL-Linker-VH构成的融合基因scFv库（图1，其中6个箭头表示重叠PCR过程中引物结合部位，scFv的首尾各含有一个由6个核苷酸组成的限制酶识别序列），其次将scFv库与噬菌粒（图2，是由质粒的部分基因与噬菌体的部分基因构成）连接成表达载体库，再在噬菌粒表达载体库转染TG1等大肠杆菌的基础上，用辅助噬菌体协助感染，获取表面展示有scFv的噬菌体库（图3，该噬菌体的遗传物质为带有scFv的单链环状DNA），最后采用亲和层析柱对噬菌体抗体库进行筛选，获得特定的单克隆scFv。   

(1)下列①～⑥是图1中引物，其中1R为①，则1F、R分别为________、________，scFy首端限制酶识别序列为________。
①5'-GATCGCCCCGCATGCCGCGAGAGCCACTGACGAGTCCGC-3'
②5'-GCGGCATGCGGGGCGATCGCGTGACTGCCAGTGCTGTCC-3'
③5'-GTATACCATATGCGCCGCCGCCGCCGCCGCCGCCGCCGC-3'
④5'-CAGCCTGCGCCCGTTTGCGTCCGAGCCATGCCAC-3'
⑤5'-GTGGCATGGCTCGGACGCAAACGGGCGCAGGCTG-3'
⑥5'-ATTTCTCGAGTTACTTGGAGGCAGTCATGAAGCTG-3'
(2)噬菌粒表达载体中，质粒复制原点的作用是________，被噬菌粒表达载体转染的大肠杆菌在含有________（物质）的培养基中才能表达scFv。
(3)噬菌体复制原点的作用是________，启动其发挥作用的蛋白质启动因子是由________指导、在________上合成的；为保证展示scFv噬菌体的遗传物质为带scFv的单链环状DNA，辅助噬菌体必须具有的缺陷是________。
(4)固定在亲和层析柱上用于结合特定scFv的配体是________。
(5)与传统鼠源单克隆抗体相比，单克隆scFv的优点是________。

5 . 为研制抗病毒A的单克隆抗体，课题组以小鼠为实验对象设计右图所示制备流程。请分析回答。
   
(1)
针对脾脏柔软、细胞易分散的特点，课题组选用________（液体）冲洗脾脏分离脾内细胞，获得的细胞2主要指________，其有多种的原因之一是病毒A有________。与植物体细胞杂交相比较，特有的诱导细胞1、2融合的方法是________，能诱导的原因是________。
(2)筛选1所用培养基的主要作用是抑制（细胞）的增殖，选出的细胞3用96孔板进行和筛选2；筛选2依据的基本原理是________，形成________（现象）表明检测为阳性；由于检测结果为阳性的孔内________，因此筛选2要经过多次筛选。细胞4在体外培养时________（填“悬浮”或“贴壁”）生长增殖。

7 . Ⅰ、如图分别表示生命体内生物大分子的部分结构模式图，请据图回答：
(1)   甲图所示化合物遇碘呈________色，该化合物的单体是________。
(2)乙图所示化合物合成过程中形成的③键为________，常用________试剂鉴定该类化合物。
(3)丙图所示化合物形成过程中，脱水缩合生成的化学键是[       ]________，图示________键是维系其空间结构的重要化学键。
(4)II、如图示利用A、B、C三组平板从土壤中筛选、鉴定尿素分解菌的部分过程。请在下表空白处填写相应内容，完成实验操作与分析。

   

操作步骤	简要操作过程	操作目的、结果、分析
平板A制作、接种、培养	称5.0g牛肉膏、10.0g蛋白胨、5.0g NaCl、10.0g琼脂及一定量酚红加入1000mL蒸馏水中，调pH，分装，①________，倒平板（全营养培养基），接种菌种，……。	平板A在实验中的作用②________。
平板B、C制作、接种、培养	称1.4g KH2PO4、2.1g NaH2PO4、0.2g MgSO4·7H2O、10g葡萄糖、1.0g尿素、10.0g琼脂及一定量酚红加入1000mL蒸馏水中，……，用③________（接种工具）对B、C平板分别接种菌液、无菌水，盖好皿盖将培养皿倒置并在皿底作标记，适宜环境中培养。	C平板的结果表明④________。
结果观察	培养至菌落数稳定后，观察三组平板中菌落情况。	B平板中菌落周围出现⑤________，若某菌落周围没有出现该现象，可判断这种菌落的菌体能利用⑥________作为氮源。

8 . 图1表示融合PCR技术的过程示意图（P1～P4表示引物），图2表示融合后产物的电泳图。请回答下列问题：

(1)图1设计引物的前提是________，引物的作用是________。第一阶段中PCR至少进行________次循环，才能获得步骤1中的产物，第二阶段中引物2与引物3部分碱基的________关系使得两DNA能成功“搭桥”连接起来。
(2)PCR技术的原理是________，若通过融合PCR技术将启动子、目的基因、终止子拼接起来，需要设计________种引物。
(3)若要对A、B融合基因继续进行PCR扩增，则图1中的M、N处位置所需要的引物分别是________。最终扩增出64个融合基因，理论上该过程消耗了________个引物。
(4)图2分离和鉴定扩增产物的常用方法是________。若PCR反应没有扩增出任何产物，则可能的原因是________（至少两点）。

9 . 人心肌细胞中的肌钙蛋白由三种结构不同的亚基组成，即肌钙蛋白T（cTnT）、肌钙蛋白I（cTnI）和肌钙蛋白C（cTnC），其中cTnI在血液中含量上升是心肌损伤的特异性指标。为制备抗cTnI的单克隆抗体，科研人员完成了以下过程。请据图分析回答下列问题：

(1)细胞培养中，培养液常用___方法灭菌。每隔2周用cTnI作为抗原注射小鼠1次，共注射3次，其目的是___，最后一次免疫后第3天，取脾脏内部分组织制成细胞悬液与骨髓瘤细胞诱导融合，常用的化学诱导因素是___。
(2)甲、乙、丙中，只含杂交瘤细胞的是___，②过程表示将乙细胞接种到多孔培养板上，进行抗体阳性检测，之后稀释、培养、再检测，并多次重复上述操作，其目的是筛选获得___。
(3)酶联免疫吸附双抗体夹心法是医学上常用的定量检测抗原的方法，具体原理如图所示：

据图分析，固相抗体和酶标抗体均能与抗原结合，这是由于不同抗体能与同一抗原表面的不同部位结合。该检测方法中，酶标抗体的作用是___，可通过测定产物量来判断待测抗原量。