1 . PCR技术是在DNA聚合酶作用下，在体外进行DNA大量扩增的一种分子生物技术。下列相关叙述错误的是（       ）

A．扩增过程中，延伸的温度大于复性的温度，而小于变性的温度

B．设计引物时需要避免引物之间形成碱基互补配对，而造成引物自连

C．PCR扩增时，复性所需温度的设定与引物的长度和碱基组成无关

D．采用PCR技术对一个DNA进行扩增，第n次循环共需要引物2n个

2 . 玻尿酸是一种重要的医用材料，研究人员欲将玻尿酸合成酶基因H导入到枯草芽孢杆菌中以获得能生产玻尿酸的转基因工程菌。图1中的DNA中虚线中间的部分是H基因。H基因以a链为转录模板链。载体质粒P₀（如图2所示）具有四环素抗性基因（tet^R）和氨苄青霉素抗性基因（amp^R），A为木糖诱导型启动子，其中EcoRV酶切位点的识别序列为5'-GATATC-3'，Xbal酶切位点的识别序列为5'-TCTAGA-3'。回答下列问题。

(1)以图1中的DNA分子为模板，通过PCR扩增基因H，并且在引物中添加相应限制酶切位点，则与b链结合的引物序列为5'-_____-3'。
(2)基因表达载体含有启动子，启动子是指_____。将构建好的重组质粒转入经_____处理的枯草芽孢杆菌。为筛选出含有重组质粒的枯草芽孢杆菌菌落，在培养平板中添加了抗生素（如下表所示），得到C₁、C₂、C₃三类菌落。

菌落类型 平板类型	C1	C2	C3
无抗生素	+	+	+
氨苄青霉素	+	+	-
四环素	+	-	-
氨苄青霉素+四环素	+	-	-

根据表中结果判断，应选择的菌落是_____（填表中字母）类，另外两类菌落质粒导入情况分别是_____。
(3)进行现代工业发酵时，在发酵罐加入适宜的培养基外，还需严格控制_____（至少答出两点）等发酵条件。利用转基因工程菌发酵获得玻尿酸的过程可以分为两个阶段：第一阶段菌体生长阶段，第二阶段产物生产阶段。在第一阶段培养基是以蔗糖为唯一碳源。第二阶段需要添加_____以诱导产生更多的玻尿酸。

3 . 多不饱和脂肪酸（PUFAs）是人体必需脂肪酸，为解决猪肉中PUFAs含量不足的问题，研究者从线虫中获得控制PUFAs合成的必需酶基因fat1。培育转fat1基因猪，操作过程如图所示。图中GFP基因表达出绿色荧光蛋白。据图回答下列问题：

(1)用PCR技术在体外扩增目的基因时，PCR扩增仪中要加入缓冲液、目的基因、_________（至少答两点）等。
(2)从图中可知，在构建基因表达载体时，为克服目的基因自身环化（即线性DNA的末端相互连接，变圆环），以及便于目的基因与载体的连接，切割含目的基因的DNA和载体的限制酶应选用_________。
(3)构建的基因表达载体中，GFP基因的作用是_________。
(4)猪成纤维细胞在培养瓶中培养时，除必须保证环境是无菌、无毒外，还必须定期_________，以防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成伤害。培养到一定程度后，需要分瓶再继续培养，分瓶后的培养过程称为_________，操作时首先用_________等处理成细胞悬液。
(5)经检测，fat1基因成功整合在猪基因组DNA后，若想获得该转基因动物，需经过胚胎移植过程，该过程需对受体进行_________处理，移植胚胎后需要对受体进行是否妊娠的检查。

4 . 苏云金杆菌能产生具有杀虫能力的Bt毒素蛋白。下图是一种转Bt毒素蛋白基因棉花的重组DNA形成过程示意图，下列叙述错误的是（       ）

A．可通过设计特异性引物，利用PCR技术特异性获取和扩增Bt毒素蛋白基因

B．经过①②得到的重组质粒，目的基因转录的产物可能不同

C．取棉花叶片组织与重组Ti质粒共培养，经组织培养并筛选后可获得抗虫棉

D．可用相应抗体进行抗原-抗体杂交，检测Bt毒素蛋白基因是否成功表达

5 . 野生黑芥细胞核具有黑腐病抗性基因，花椰菜细胞质具有高产基因。某研究小组用野生黑芥、花椰菜两种植物细胞进行体细胞杂交，以获得高产抗黑腐病的杂种植株，流程如图1。

回答下列问题：
(1)过程①所需的酶有___。
(2)在原生质体融合前需对原生质体进行处理，分别使野生黑芥原生质体和花椰菜原生质体的___、___（填细胞结构）失活。
(3)实验中分别用不同植物幼苗的根和叶获取植物原生质体，即用不同颜色的原生质体进行融合，主要优点是___。
(4)融合后的原生质体经过细胞壁再生，进而脱分化形成愈伤组织。过程③产生的愈伤组织只能来自杂种细胞，据实验过程分析，下列推理合理的有___（不定选）。

A．未融合的野生黑芥或花椰菜原生质体经处理后失活，无法正常生长、分裂

B．同种融合的原生质体因野生黑芥或花椰菜原生质体失活而不能生长、分裂

C．培养基含有抑制物质，只有杂种细胞才能正常生长、分裂

D．杂种细胞由于结构和功能完整，可以正常生长、分裂

(5)采用特异性引物对花椰菜和野生黑芥的基因组DNA进行PCR扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种植株的鉴定。PCR的基本步骤包括：___、___、___（按照扩增过程的顺序回答）；图2是用该引物对双亲及再生植株1～4进行PCR扩增的结果。据图2判断，再生植株1～4中是杂种植株的有___（不定选）。

6 . 控制哺乳动物的性别对于畜牧业生产具有重要的意义。SPY基因是哺乳动物Y染色体上决定雄性性别的基因，SRY—PCR胚胎性别鉴定技术是进行胚胎性别鉴定的有效方法。下列叙述错误的是（       ）

A．可利用Y精子DNA含量比X精子低的差异筛选两种精子，从而对胚胎性别进行控制

B．从Y染色体DNA分子上获取SRY基因，可用SRY基因的部分核苷酸序列作引物

C．利用SRY—PCR进行胚胎性别鉴定时，若PCR扩增成功则为雄性

D．利用PCR经过3次循环，理论上获得的SRY基因等长片段占扩增产物的一半

7 . 我国科学家用诱变剂处理野生型油菜，获得了新生叶黄化的隐性突变体。由于一个碱基对的改变，导致该突变基因上出现了一个限制酶B的酶切位点（如图所示）。该突变体与野生型杂交得F₁，F₁自交得F₂，提取F₂植株的基因组DNA→PCR→回收扩增产物→用限制酶B处理→电泳，电泳后得到的条带数最多为（       ）

   

A．0条

B．1条

C．2条

D．3条

8 . 科研人员将酵母菌的海藻糖合成酶（TPS）基因转入小麦中，以期获得具备抗旱特性的小麦。图1表示载体和预期基因表达载体的结构（注：Bar基因是抗除草剂基因），图2标注TPS基因的酶切位点以及引物结合的可能情况。

(1)本实验可选择的引物组合为________（用图2中数字表示）。为了方便构建重组质粒，所用一对引物的一端需要分别加上________酶（填图1中限制酶的名称）的识别序列。
(2)基因表达载体转入细胞后，在获得的植株叶片上涂抹除草剂，共获得7株待测个体。现对筛选出的个体进行DNA水平的检测。请填写表格，完成实验：

组别	植株编号1-7	对照组1	对照组2
模板	1-7植株DNA	__	普通小麦DNA
PCR反应	加入PCR反应体系必需物质
电泳结果	编号1、2、4、5、7植株无条带 编号3、6植株有条带	有条带	____

(3)基于上述实验结果，________（填“能”或“不能”）判定编号3、6植株转基因抗旱小麦研制成功，原因是_____________________。

9 . 某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带（引物与模板完全配对）外，还有2条非特异条带（引物和模板不完全配对）。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是（       ）

A．增加模板DNA的含量	B．延长热变性的时间
C．减少引物的长度	D．提高复性的温度

10 . 下列有关“DNA粗提取与鉴定”、“PCR扩增”、“琼脂糖凝胶电泳”实验的叙述中，正确的是（       ）

A．DNA的粗提取实验中可利用DNA在酒精中溶解度较大的特点来提取DNA

B．将提取到的丝状物与二苯胺溶液充分混匀后，溶液即可变为蓝色

C．PCR利用热变性原理来控制DNA双链的解聚和结合

D．DNA分子的迁移速率与凝胶浓度无关，与DNA分子的大小和构象有关