1 . 人乳铁蛋白是一种重要的药用保健蛋白，需经过内质网和高尔基体加工后才具备活性。下图表示利用乳腺生物反应器生产人乳铁蛋白的部分过程，图中Tet^r表示四环素抗性基因，Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，五种限制酶的识别序列及切割位点如表所示。回答下列问题：

限制酶	BamHⅠ	HaeⅢ	BclⅠ	Sau3AⅠ	NotⅠ
识别序列及切割位点	G↓GATCC CCTA↑GG	GG↓CC CC↑GG	T↓GATCA ACTAG↑T	↓GATC CTAG↑	GC↓GGCCGC CGCCGG↑CG

(1)图中质粒上的Amp^r和Tet^r作为标记基因，其作用是__________________。在基因工程中作为载体的质粒应具备的基本条件有_________（至少答出2点）。
(2)若选用牛作为转基因动物，可将人乳铁蛋白基因与________________的启动子等调控组件重组在一起，可通过____________方法将基因表达载体导入受精卵中，然后使其发育成转基因动物。
(3)要将人乳铁蛋白基因插入质粒，若只允许使用一种限制酶，应选择的限制酶是_______，若BamH Ⅰ酶切的DNA末端与Bcl Ⅰ酶切的DNA末端连接起来，形成有6个碱基对序列的连接部位，对于该部位，这两种酶____________（填“都不能”或“只有一种能”）切开。
(4)利用PCR技术扩增目的基因时，若扩增后得到了32个人乳铁蛋白基因，则该过程共需要_____个引物。PCR引物应该添加在识别序列的__________（填“3′或5′”）端。PCR扩增的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定，下列叙述中正确的有__________。
A．PCR反应体系中需加入耐高温的DNA聚合酶，该酶主要在复性过程起作用
B．待测样品中DNA分子的大小和构象、凝胶的浓度等都会影响DNA在电泳中的迁移速率
C．进行电泳时，带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动
D．琼脂糖溶液中加入的指示剂利于DNA在紫外灯下被检测

2 . 生物技术与工程学相结合，可研究、设计和加工生产各种生物工程产品。下列有关叙述正确的有（       ）
①用花药培养得到单倍体植株需要用到植物组织培养技术
②由iPS细胞产生的特定细胞，可以在新药的测试中发挥重要作用
③胚胎移植作为胚胎工程的最后技术环节，推动了胚胎工程其他技术的研究和应用
④PCR反应过程可以在PCR扩增仪中自动完成，而后常用琼脂糖凝胶电泳来鉴定PCR的产物
⑤利用基因工程技术的生物反应器，可以让哺乳动物批量生产相应的药物
⑥蛋白质工程仅以蛋白质结构为基础，逆中心法则进行，就可以改造或制造新的蛋白质

A．2项

B．3项

C．4项

D．5项

3 . 下图表示利用PCR技术扩增目的基因的部分过程，其原理与细胞内DNA复制类似。下列叙述错误的是（　　）

A．用于PCR的引物长度通常为20~30个核苷酸，在设计引物时，应尽量避免引物自身或引物之间发生碱互补配对，影响扩增的效果

B．从理论上推测，第n轮循环后同时含有引物A、B的DNA分子占的比例为（2n-1）/2n

C．在第三轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段

D．PCR的产物一般可以利用琼脂糖凝胶电泳技术来鉴定，DNA分子的大小和构象、凝胶的浓度都会影响DNA在凝胶中的迁移速率

4 . 下列关于PCR扩增DNA片段及电泳鉴定的叙述，错误的是（　　）

A．在凝胶中DNA分子的迁移速率主要和DNA分子的大小、构象等有关

B．PCR扩增产物一般可通过琼脂糖凝胶电泳来进行鉴定

C．反应过程中的每一轮循环依次包括变性、复性、延伸三步

D．耐高温的DNA聚合酶只能从引物的5′端开始连接脱氧核苷酸

5 . 新型冠状病毒肆虐全球，直至今日，疫情在很多国家仍没有得到有效控制。图1为新型冠状病毒的结构示意图，其中蛋白S（刺突糖蛋白）通过与人体黏膜细胞表面的ACE2受体结合而进入细胞，蛋白M能刺激机体产生免疫反应；图2是科研人员研制新型冠状病毒疫苗的一条技术路线。请据图回答有关问题：

(1)新型冠状病毒能通过蛋白S感染人的黏膜细胞，却不能感染人的皮肤细胞，其根本原因是_____。
(2)图2中过程①为_____，该过程所需要的酶的合成原料由_____提供。其中的目的基因指的是_____，欲扩增出该目的基因，前提是要设计出特异性引物，引物是指_____。
(3)pVAX1是一种可以应用于人体的载体质粒，它在与目的基因一起构建疫苗Ⅱ时，一般需要使用两种限制酶切割目的基因和pVAX1，这样做的目的是_____。
(4)判断大肠杆菌中是否插入目的基因，采用的检测方法是_____（写出一种）

6 . 生长激素在治疗激素分泌过少的矮小症方面有积极的作用，为了批量生产生长激素，可以采用转基因技术将控制生长激素合成的基因转移到微生物细胞内。请回答下列相关问题：
(1)该技术流程的核心步骤是_____。
(2)①获取生长激素基因时可以使用PCR技术扩增，该技术的一个循环中所需温度最低的步骤是_____。
下表是用于扩增的两种引物序列，请据表回答相关问题：

引物名称	引物序列（5'-3'）
引物1	TTCGATGTTGAGGGTGCTCAT
引物2	TCACACCAGTTGAAAATCCTAATTG

引物1对应的模板链序列（5'-3'）为_____。
A.AAGCTACAACTCCCACGAGTA
B.ATGAGCACCCTCAACATCGAA
C.AGTGTGGTCAACTTTTTAGGATTAAC
D.CAATTAGGATTTTTCAACTGGTGTGA
②下图为生长激素基因的部分序列，请问引物1和引物2对应的位置是_____、_____。

③假设加入的模板数为a，引物能与模板上唯一基因序列特异性结合，理论上n次循环需要消耗引物2的数量是_____。
(3)目的基因和质粒常使用双酶切法会避免出现_____、_____等问题。（写出两种原因）

7 . 下列有关“DNA粗提取与鉴定”、“DNA片段的扩增及电泳鉴定”实验的叙述中，错误的是（       ）

A．可将提取到的白色丝状物与二苯胺试剂充分混匀，沸水浴加热后变蓝

B．PCR反应体系中需加入耐高温的DNA聚合酶，该酶可在延伸过程中起作用

C．琼脂糖溶液混合的核酸染料与DNA分子结合，便于在紫外灯下观察

D．DNA的粗提取与鉴定实验中可利用DNA不溶于酒精而某些蛋白质溶于酒精来粗提DNA

8 . 科学家常用PCR特异性地快速扩增目的基因，下列关于PCR技术的叙述，正确的有（　　）

A．与细胞内DNA复制相比，PCR用的DNA聚合酶最适温度较高

B．PCR技术的过程包括变性、复性和延伸三步

C．PCR过程中消耗引物的量与循环次数无关

D．PCR反应需要在一定的缓冲液中才能进行

9 . 抗凝血酶Ⅲ是一种药用蛋白，对预防和治疗静脉血栓、心肌梗死、脑血管病变具有重要作用。为了提高抗凝血酶Ⅲ的产量，科研人员设计利用崂山奶山羊乳腺生物反应器制备抗凝血酶Ⅲ，并获得了成功。制作崂山奶山羊乳腺生物反应器的流程如图1所示。回答下列问题：

(1)获取了抗凝血酶Ⅲ基因后，需要通过PCR技术对该基因进行扩增，扩增的原理是____，扩增抗凝血酶Ⅲ基因的过程中一般不需要使用解旋酶，原因是____。
(2)图1过程③在基因工程操作步骤中属于____，切割质粒DNA的工具酶是____，能将特定部位的两个核苷酸之间的____断开。操作工程中需要将抗凝血酶Ⅲ基因插入到启动子与____之间，其中启动子的作用是____。
(3)获取重组质粒后，将重组质粒导入受精卵。从崂山奶山羊A的卵巢中获取卵子和从崂山奶山羊B的睾丸中获取精子，其中精子要进行____处理才具备受精的能力。图1中步骤④常用的方法是____。

10 . 中国科学家在广西获得了一块距今2.4万年的古大熊猫化石。将该化石中提取到的线粒体DNA 通过测序分析和比较，发现古大熊猫与现存大熊猫的相关 DNA 序列高度相似，且大熊猫与熊类有共同的远古祖先。下列叙述，不合理的是（　　）

A．化石证据结合分子生物学分析，可为大熊猫进化提供更可靠的证据

B．化石中提取的线粒体DNA 通过PCR 进行扩增，作为测序的材料

C．该研究对获得大熊猫和熊类远古父系祖先的相关信息有直接帮助

D．造成现存大熊猫与古大熊猫基因差异的根本原因是发生了突变