1 . 常规PCR只能扩增两引物间的DNA区段，要扩增已知DNA序列两侧的未知DNA序列，可用反向PCR技术。反向PCR技术扩增的原理如下图所示。下列叙述错误的是（       ）

A．切割M和N时选用的限制酶可以相同，也可以不同

B．环化之后产生的DNA分子没有游离的磷酸基团

C．图中引物，应选择引物1和引物4，且二者间不能互补配对

D．PCR扩增，每轮循环前应加入限制酶将环状DNA切割成线状

2 . 人乳头瘤病毒（HPV）是一种球形、微小、无包膜的环状双链DNA病毒，该病毒的持续感染是女性宫颈癌的主要发病原因。HPV的主要衣壳蛋白是L1。注射HPV疫苗作为目前唯一可以有效预防宫颈癌的方法，一直受到公众的高度关注。回答下列问题：

限制酶	识别序列和切割位点
BamHⅠ	5'-G↓GATTC-3'
EcoRⅠ	5'-G↓AATTC-3'
MfeⅠ	5'-C↓AATTG-3'
KpnⅠ	5'-GGTAC↓C-3'
HindⅢ	5'-A↓AGCTT-3'

(1)目前可以利用基因工程来制备HPV疫苗，首先需要获得L₁蛋白基因，可采用PCR的方法，反应时需要在缓冲体系中添加的物质有模板DNA、dNTP、引物、______和______。
(2)要用PCR扩增L₁蛋白基因并保证其与质粒正确连接，应设计的基因上游引物序列是（写出前10个碱基）：______。
(3)PCR经过______过程，完成一轮循环。至少经过______次循环后可以得到等长的DNA片段。经过多轮循环后，还需要使用琼脂糖凝胶电泳的方法对产物进行鉴定，电泳时影响DNA分子迁移速率的因素有____________（答两点）

3 . 抗原检测阴性但临床仍然高度怀疑新冠病毒感染的患者，医生会建议做核酸检测。该检测实际采用的技术是RT-PCR，病毒刺突蛋白编码序列如下图所示，科研人员为该PCR分别设计了引物A （5＇-CCCTGTATGGGGTTCTAA-3＇，PCR中与b链结合）和引物B （5＇-ACGACT①TTA②CTGGTGCAG-3＇），已知引物A中ATG对应起始密码子，引物B中TTA对应终止密码子，标记基因可以插入刺突蛋白编码序列的首端或末端。下列叙述错误的是（       ）

A．图中a链的方向是自左向右为5＇→3＇

B．转录过程中b链作为模板连

C．若标记基因需要插入引物B的①或②位置中，则应选择②位置

D．获取新冠病毒的遗传物质后直接进行PCR扩增以节省出报告时间

4 . PCR技术在生物工程中应用广泛，PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。 下列有关叙述正确的是（       ）

A．PCR技术需要的引物是双链DNA

B．PCR反应体系中应加入解旋酶.

C．PCR第n次循环需要2n个引物

D．DNA在凝胶电泳中的迁移速率只有DNA大小决定

5 . 下列有关PCR的叙述，错误的是（　　）

A．复性温度和延伸时间均与引物有关

B．常用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物

C．PCR时需加入DNA聚合酶和解旋酶

D．可用细胞的基因组DNA作为模板

6 . 单个B细胞抗体技术可用于制备高亲和力、高特异性的单抗，其技术流程如下：①康复者单个B淋巴细胞的分离和筛选；②利用RT-PCR获取和扩增抗体基因；③构建基因表达载体；④将抗体基因导入动物细胞；⑤单抗的筛选和鉴定。下列叙述错误的是（　　）

A．操作①选用单个B淋巴细胞以保证最终获得纯度较高的单抗

B．操作②使用的PCR反应体系常添加Mg2+以激活DNA聚合酶

C．操作③常用两种限制酶切割抗体基因和载体以防止其自身环化

D．操作④前可用Ca2+处理受体细胞促使其主动吸收DNA分子

7 . 花青素属于生物类黄酮物质，有清除自由基、抗氧化和抗突变的作用。科研人员将拟南芥的MYB12基因（能促进类黄酮生物合成）转入番茄体内，培育出了果实含有花青素而呈紫色的番茄新品种。某种质粒和含MYB12基因的DNA片段如图所示，箭头表示限制酶及其切割位点。回答下列问题:

(1)将MYB12基因导入受体细胞前，利用PCR技术进行扩增。在PCR扩增仪中要加入缓冲液、目的基因、_________（答出2点）等。若在PCR扩增仪中加入模板DNA分子2个，经过30次循环后，则DNA分子数量将达到______个。
(2)据图分析，为了将MYB12基因正确插入图示质粒中，应选取限制酶_______分别切割质粒和含目的基因的DNA片段。不选取其他两种限制酶的原因是_____。
(3)番茄是双子叶植物，常用____________法将目的基因导人受体细胞，Ti质粒上的______能整合到受体细胞的染色体DNA上。
(4)为了鉴别受体细胞中是否含有MYB12基因，可用含_____（填“氨苄青霉素”、“卡那霉素”、“四环素”或“链霉素”）的培养基进行初步筛选。待转基因番茄结果后，也可以通过观察______来确认是否成功获得了转MYB12基因番茄新品种。

8 . 下列关于PCR的叙述，错误的是（       ）

A．PCR只能扩增引物之间的DNA片段而非整个完整的模板DNA分子

B．PCR过程中变性的目的是让引物与模板DNA单链结合

C．PCR的原理是DNA半保留复制

D．PCR的过程需要耐高温的DNA聚合酶但不需要解旋酶

9 . 为加强校园食堂管理工作，切实保障师生的饮食安全和身体健康，学校食堂实行“6T”管理制度，以提高食堂饮食卫生状况。食品卫生检验检疫人员对某学校食堂自来水进行随机抽样检测细菌总数和大肠杆菌是否超标。已知大肠杆菌的代谢产物能与伊红—美蓝指示剂结合，使菌落呈深紫色并有金属光泽。我国《生活饮用水卫生标准》GB5749-85中关于生活饮用水的细菌标准的具体规定如下：
细菌总数：1mL水中不超过100个；大肠杆菌数：1L水中不超过3个。
下表是检测人员用于培养细菌的培养基配方，请根据表格和所学知识回答下列相关问题：

成分	蛋白胨	乳糖	蔗糖	K2HPO4	伊红—美蓝	琼脂
含量（g）	10.0	5.0	5.0	2.0	0.2	12.0
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL

(1)根据培养基用途划分，该培养基属于___________________（填“选择”或“鉴别”）培养基。在微生物培养的过程中，为防止杂菌污染，需要用___________________法对培养基进行灭菌。
(2)检疫人员检测大肠杆菌时培养得到的结果如图甲所示，其对应的接种方法应是___________________；假设取0.1mL水样进行检测统计细菌总数，实验所用3个平板的平均菌落数结果如图乙所示，根据结果判断该校自来水细菌总数是否超标并说出判断理由？______________________________________。
   
(3)饮用水的消毒方法常见的主要有：次氯酸钠、紫外线、臭氧消毒等方法。经氯剂消毒的自来水中大肠杆菌数量极少，采用常规滤膜培养法检测会出现阴性结果，而PCR法灵敏度高，可以检测出水样中极少量的大肠杆菌。有研究表明，PCR法比较适用于氯剂消毒或臭氧消毒的饮用水大肠杆菌的检测。在PCR扩增过程中，需要将温度加热至___________________℃以上，其目的是使大肠杆菌DNA受热变性后解为单链；当温度加热至72℃左右时，互补链可在___________________酶的作用下，以单链DNA为模板，利用4种脱氧核苷酸为原料从引物的___________________端开始进行延伸DNA链。

10 . 下列有关PCR过程的叙述正确的是（       ）

A．变性过程中破坏的是DNA分子内的磷酸二酯键

B．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸等

C．复性过程中引物与DNA模板链的结合依据碱基互补配对原则完成

D．PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度相同